高效液相色谱法采用外标法测定时,校正因子f会对待测物质含量有影响吗?（我用的是苏州岛津的）

1,为进行分离,可以根据样品的组分将流动相和固定相的组合最佳化.如果熟悉液相色谱,这是非常有利的,但对初学者来说,这是困难的.2,适用样品范围广,80%的分析对象可借此法分析.3,可以使用高效的分离柱,易于分离复杂的多...

离子色谱法 采用柱色谱技术的一种高效液相色谱法,样品展开方式采用洗脱法.、分离柱 、抑制柱、电导检导器和数据处理单元等组成.离子色谱仪最重要的

用公式：样品百分含量=(样品的面积391486×标准品质量×标准品的含量)/(标准品的峰面积201311×样品的质量） ×100
后面那个乘以100是前面所有算式都算完全最后再算的,因为是百分含量.

应该是缩短实验时间吧.
一般而言,在选定色谱柱的条件下,改变流动相的比例,可以调整样品的色谱保留时间,有的情况下,缩短了实验时间,会导致一些难分离物质无法分开.如果保证分离度的情况下,调整流动相使得流动相增加对样品的洗脱能力,能够缩短实验时间.
由于正相色谱,和反相色谱的不同,所以流动相的极性的调整也是不一样的,要看你采用那种色谱了.
建议你去“生化色谱网”看看,这个网站在色谱方面非常专业.

可以采用柱前衍生法或在线柱后衍生法,当然测出来的结果是白酒中的游离氨基酸.也可以直接用氨基酸分析仪测定,一般氨基酸含量不会很高,需要浓缩或加大进样量.

楼上说的很对了.
要定性,需要用到各添加剂的标样,与供试品分别分析,根据保留时间来确定是哪一个添加剂.
所以你先需要拿到可能存在的添加剂标样,确定种类后,再定量检测,外标法峰面积计算.

不是.高效液相色谱法原理是利用物质的极性不同,而导致与固相柱内填料的结合能力不同,然后在一定的流动相中从柱上洗脱下来的时间不同,来达到分离物质的一个目的.高效液相色谱既可以说是一种物质的分离方式,也可以说是一种物质的检测方式,因为它本身能同时达到这两个目的.对于高效液相色谱,物质的洗脱时间（也叫做滞留时间）是一个重要的检测指标,另外一个重要的检测指标则是物质的光谱.高效液相色谱的探测头实际上是一个紫外光谱扫描探头,它对从色谱中随着流动相流出的物质进行实时的光谱扫描.严格来说,从高效液相色谱中分离的物质与标准物质具有同样的滞留时间和紫外光谱的话,才认为是同一物质.不过一般在检测完标准物质后,确定它的吸收波长,然后再检测样品的话,同样的滞留时间和吸收波长的也可以认为是同一物质.
紫外光谱法其实是非常简单的,原理是任何物质的溶液都会在某一特定的紫外波长下有一特异的吸收波长,如果用紫外分光光度计对物质的溶液进行一个波长扫描,那么在它的特异吸收波长附近就会形成一个峰形的曲线,这个曲线的最高点就是该物质的特异吸收波长.如果以吸收值作为纵坐标,波长作为横坐标的话,波长与吸光值对应的曲线就是物质的紫外光谱了.对于单一的物质而言,紫外光谱是特异的,所以对于同样的物质,那么它肯定具有相同的紫外光谱.
但是,如果检测溶液是混合物的话,那么紫外光谱法就显然不能用了.这就是高效液相色谱和紫外光谱法的区别了,高效液相色谱实际上就是在紫外光谱前多了一道程序,这就是将不同物质分离的程序,然后将分离的单一物质进行紫外光谱检测分析.当然,有些人比较懒或者机器不行的话,就只检测物质的最高吸收波长,而不进行波长扫描了.

高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等.高效液相色谱是色谱法的一个重要分支,以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析.该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术.

不知道你做的是不是中药成分.甲醇和冰醋酸的话,随着甲醇比例的提高,保留时间会提前,随着冰醋酸的比例提高,保留时间会滞后.而分离效果来说随着保留时间滞后,图形一般情况下都会出现,峰与峰之间的距离变大的现象,这有利于分离,但是缺点是保留时间变长.
试过改变流动相配比后峰形还是不好的话,建议你改变冰醋酸的含量.

原理是该物质（的官能团）在某一特定波长下有吸收,并且,该物质浓度和峰面积成正比.即：A样品/A对照=C样品/C对照
C,为浓度,可以理解成C=质量（mg）*纯度（%）/稀释倍数（ml）
所以在使用标准品进行含量标定的时候,标准品的纯度是已知的量,称取一定量标准品后进行定容稀释.进样分析后,峰面积可从图谱上读取（A样品）.
样品也称取一定的质量,稀释后进样分析.然后读取峰面积（A对照）.公式中之后样品纯度是未知数,最后计算结果.
也有情况是在没有标准品的情况下用面积归一化法计算的,就是进样后从图谱上读取杂质,按照峰面积的百分比计算.这种方式有很大的局限性,故不经常使用

是纯物质出了两个峰顶?首先确定该物质是不是分解了,再看仪器或进样过程有问题,
如果都不是,换一条一样的柱,如果没有两个峰,那可能是前面那条柱坏了.

如果我没有理解错的话,你问的是方法学的稳定性试验：
一般分析周期不会超过一天,所以最多24小时内稳定就足够了.由于化合物降解一般符合一级动力学,时间取点应该前密后疏.
比如如果做12小时,可以按0,1,2,4,8,12小时测试,6个点5个段.
如果我理解错了的话,你可能是问制剂的稳定性试验：
一般要考察到该制剂的有效期后一年,比如有效期2年,就要做3年的考察,第一年每3个月测一次,以后每年测一次.
应该说全了吧?

2.0%

有两种,一种方法是普通的液相色谱,这种色谱通常是用于分析检测用的,还有一种叫制备液相色谱,这种色谱通过色谱柱分离各组分后,可以得到比较纯的单一物质.
制备液相色谱通常使用在用通常的方式很难得到纯品时才使用的方法,如果要生产大量产品时时候,用制备液相是不可能完成的.
当然,如果你没有制备色谱,而需要的纯物质量非常小,只想做NMR就够用,这种情况下,你可以用普通液相色谱,通过大进样量,高浓度的方式,一边看谱图,一边在检测器处接样的方式,也能接到纯物质.多次操作接到的样品浓缩后,够做NMR的了.

HPLC色谱图上的基线并不是一条直线,而是呈现锯齿状,这就是检测器的噪音信号.通过测定噪音峰峰高与样品峰峰高的的比值,来确定在此系统条件下样品的检出限与定量限.
检出限 流动相中样品组分在检测器上产生两倍基线噪声信号时相当的浓度或质量流量定为HPLC法的检出限.也就是信噪比为2：1的时候的样品浓度.
定量限 流动相中样品组分在检测器上产生十倍基线噪声信号时相当的浓度或质量流量定为HPLC法的定量限.也就是信噪比为10：1的时候的样品浓度.
测定检出限和定量限的所用的方法,就是把样品稀释成一系列浓度梯度,注入HPLC仪中,测定信噪比,在色谱图上直接测定就可以了.

楼主也知道一般是用浓度对峰面积；用峰高对峰面积也是可以的,但对峰的对称性要求比较高,药典要求应该是对称因子得是0.95 1.05之间,色谱条件要求比较高,如果能达到要求也是可以的.

没有什么为什么,即使不用乙酸铵,其实用其他盐也是可以跑出来的,但是用乙酸铵有一个好处,就是这个流动相可以做MS-LC,不需要重新摸索流动相.
参考下这个吧,虽然不一定有用,推荐你一本书,《高效液相色谱法的建立》是译著,很有用.
反相色谱中如何选择缓冲液
化合物的划分
HPLC分离的样品从其在分离体系内（或者说是流动相下）的状态来划分,可以分为中性样品和离子型样品.所谓中性样品就是在分离条件下不能解离的化合物,而离子型化合物则能够解离出离子.换句话说,离子型样品是指酸碱盐类的化合物,而中性化合物是除此之外的化合物.
有盐流动相好在那里
反相色谱（RPC）分离样品主要基于待分离化合物的极性实现分离的.在其他条件相类似的情况（分子量、空间结构）下极性强的物质保留值小.对于中性样品来说其极性取决于化合物本身,但是对于离子型化合物可以通过调整其是否解离或者解离程度来调整其极性,最终达到调整其保留值、分离度和拄效（一般保留值提前会带来拄效的提高）.
在分离含有少数化合物待检样品的情况下,使用无盐流动相是一般是可行的（可以不考虑其是否全部或者部分未中性化合物）.因为分离的化合物少,可能分离度方面的要求相对不是很重要,而保留值的调整还可以采用调整流动相的洗脱能力、流速等条件得以实现..此时需要尝试采用有盐流动相,也就是要用到缓冲液.但是对于分离多组分的样品采用无盐流动相往往就会遇到麻烦当然如果样品中的化合物全部都是中性化合物采用有盐流动相也是很难奏效的,可是这样的时候毕竟比较少.所以,在分离多组分待检样品时如果无盐缓冲液效果不好,要首先考虑有盐流动相.
缓冲液
缓冲液是能够提供共轭酸碱对,在一定条件下稳定pH值的一种溶液.使用缓冲液就可以控制分离过程中的p H,进而控制化合物的解离程度,达到调整化合物极性的目的.
缓冲液控制pH的能力就是缓冲液的缓冲容量.其大小由三方面因素决定,分别是：所要控制的pH、缓冲盐的pKa和缓冲盐的浓度.这里就涉及你要控制的pH和选用的缓冲盐的关系,好在这方面的数据一般的色谱书中都会有提及,查一查就可以解决问题.关于缓冲盐浓度认为采用30mM是比较好的,这是一个通常的参数,一般来讲进样量越少、分子量越大、酸碱官能团越少选用的盐浓度可以越小.缓冲盐浓度越小对仪器和色谱拄越好.
缓冲液的选择
对于已知化合物来说这个比较容易.如果是一个碱性化合物,在无盐流动相下保留时间过长,那么可以采用控制流动相为低pH条件,使其达到完全解离,增加其极性,达到缩短分离时间的目的.如果分离的化合物pKa比较低（酸性化合物）,在无盐流动相下保留时间比较长,可以采用控制流动相为高一些的pH条件,道理相同.对于保留时间过短的采用相反的调整方式即可,不赘述.
对于分离多个组分而且未知化合物组成的样品就显得比较麻烦了.缺少相关分离样品的资料只能从实验入手了.也就是说尝试各种pH值的流动相（期间最好有机相的比例固定）,一般来说从低pH试起是一个比较好的选择,因为我做过的化合物多是碱性化合物（这点仅当参考）,再有常用ODS柱子适用pH范围相对第一些.
另外,在调试分离最佳的pH条件的时候,可以采用一种盐——枸橼酸盐,其有点是在Ph2.6.4之间等体积混合相同浓度不同pH的缓冲液,混合后的pH值几乎是两者的平均值.声明这一点我没有试验过,从书上看来的.如果这样,在有双通道仪器上调整流动相的pH值将会非常方便.确定好了pH值,然后在换成常用的缓冲盐就OK了.
上面说的是pH范围的选择.在确定了分离最适合的pH之后,就是确定用那种缓冲盐了.一般从两个方面考虑,一是溶解度,要求在所用的有机相比例下易溶解,否则容易造成系统内缓冲盐析出；二是要考虑截至波长的问题.磷酸盐是比较常用的,可以有两个缓冲范围2.3.0和6.8.2,截至波长小于200nm.注意：缓冲盐中的杂质可能严重影响其截至波长.碳酸盐也不错,但是在低pH会有CO2放出,可能导致缓冲效果降低.
缓冲液的制备
流动相的pH就指的是流动相中缓冲液的pH值.不要把有机相混入缓冲液之后再调其pH.
流动相或者缓冲液过滤的问题.有人倾向于先过滤缓冲液然后混合有机相使用.也有的是有机相与缓冲液混合之后统一过滤.虽然各有缺点,但我认为第二种做法更好些.因为毕竟这样做最仪器和柱子更为保险些,虽然有可能在抽了过程中有可能引起部分溶剂挥发,但我认为可以忽略之.
缓冲液不易长时间防止,尤其是夏天,会生细菌.2天内使用比较合适.
系统冲洗
用缓冲液的系统用过后一定、务必要冲洗.用过渡流动相是一种好办法.过渡流动相就是分析用流动相中去掉无机盐.但是有机相比例较少的最好不要用过渡流动相冲洗.
结束语
采用有盐流动相是反相色谱普中常用的方法,尤其适合分离离子型化合物.只是也有其缺点就是仪器维护上稍微费事点.这种方法不能解决分离中的所有问题,有些复杂样品必须借助于梯度洗脱或者离子对色谱.

根据所要求的“置信度”.

转载自分析测试百科网：“高效液相色谱仪结构及原理”
高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上,引用了气相色谱的理论,在技术上,流动相改为高压输送(最高输送压力可达4.9´107Pa);色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成,从而使柱效大大高于经典液相色谱(每米塔板数可达几万或几十万);同时柱后连有高灵敏度的检测器,可对流出物进行连续检测.
一、特点：
1.高压：液相色谱法以液体为流动相(称为载液),液体流经色谱柱,受到阻力较大,为了迅速地通过色谱柱,必须对载液施加高压.一般可达150～350×105Pa.
2.高速：流动相在柱内的流速较经典色谱快得多,一般可达1～10ml/min.高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多,一般少于 1h .
3.高效：近来研究出许多新型固定相,使分离效率大大提高.
4.高灵敏度：高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器,进一步提高了分析的灵敏度.如荧光检测器灵敏度可达10-11g.另外,用样量小,一般几个微升.
5.适应范围宽：气相色谱法与高效液相色谱法的比较：气相色谱法虽具有分离能力好,灵敏度高,分析速度快,操作方便等优点,但是受技术条件的限制,沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析.而高效液相色谱法,只要求试样能制成溶液,而不需要气化,因此不受试样挥发性的限制.对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大(大于 400 以上)的有机物(这些物质几乎占有机物总数的 75% 80% )原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析.据统计,在已知化合物中,能用气相色谱分析的约占20%,而能用液相色谱分析的约占70～80%.
二、性质及原理：高效液相色谱按其固定相的性质可分为高效凝胶色谱、疏水性高效液相色谱、反相高效液相色谱、高效离子交换液相色谱、高效亲和液相色谱以及高效聚焦液相色谱等类型.用不同类型的高效液相色谱分离或分析各种化合物的原理基本上与相对应的普通液相层析的原理相似.其不同之处是高效液相色谱灵敏、快速、分辨率高、重复性好,且须在色谱仪中进行.
高效液相色谱法的主要类型及其分离原理
根据分离机制的不同,高效液相色谱法可分为下述几种主要类型：
1 .液 — 液分配色谱法(Liquid-liquid Partition Chromatography)及化学键合相色谱(Chemically Bonded Phase Chromatography) 流动相和固定相都是液体.流动相与固定相之间应互不相溶(极性不同,避免固定液流失),有一个明显的分界面.当试样进入色谱柱,溶质在两相间进行分配.LLPC与GPC有相似之处,即分离的顺序取决于K,K大的组分保留值大;但也有不同之处,GPC中,流动相对K影响不大,LLPC流动相对K影响较大.
a.正相液 — 液分配色谱法(Normal Phase liquid Chromatography):流动相的极性小于固定液的极性.
b.反相液 — 液分配色谱法(Reverse Phase liquid Chromatography):流动相的极性大于固定液的极性.
c.液 — 液分配色谱法的缺点：尽管流动相与固定相的极性要求完全不同,但固定液在流动相中仍有微量溶解;流动相通过色谱柱时的机械冲击力,会造成固定液流失.上世纪70年代末发展的化学键合固定相(见后),可克服上述缺点.现在应用很广泛(70~80%).
2 .液 — 固色谱法
流动相为液体,固定相为吸附剂(如硅胶、氧化铝等).这是根据物质吸附作用的不同来进行分离的.其作用机制是：当试样进入色谱柱时,溶质分子 (X) 和溶剂分子(S)对吸附剂表面活性中心发生竞争吸附(未进样时,所有的吸附剂活性中心吸附的是S),可表示如下：
Xm + nSa ====== Xa + nSm
式中：Xm--流动相中的溶质分子;Sa--固定相中的溶剂分子;Xa--固定相中的溶质分子;Sm--流动相中的溶剂分子.
当吸附竞争反应达平衡时：
K=[Xa][Sm]/[Xm][Sa]
式中：K为吸附平衡常数.[讨论：K越大,保留值越大.]
3 .离子交换色谱法(Ion-exchange Chromatography)
IEC是以离子交换剂作为固定相.IEC是基于离子交换树脂上可电离的离子与流动相中具有相同电荷的溶质离子进行可逆交换,依据这些离子以交换剂具有不同的亲和力而将它们分离.
以阴离子交换剂为例,其交换过程可表示如下：
X-(溶剂中) + (树脂-R4N+Cl-)=== (树脂-R4N+ X-) + Cl- (溶剂中)
当交换达平衡时：
KX=[-R4N+ X-][ Cl-]/[-R4N+Cl-][ X-]
分配系数为：
DX=[-R4N+ X-]/[X-]= KX [-R4N+Cl-]/[Cl-]
[讨论：DX与保留值的关系]
凡是在溶剂中能够电离的物质通常都可以用离子交换色谱法来进行分离.
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外标一点法适合这个测定
首先核对一下你的对照品和样品溶液制备过程、稀释过程是否有问题.
可能的话把你实验过程,包括对照品称量、稀释过程,样品称量、稀释处理过程及峰面积情况发过来,帮你看一下.

用流动相稀释样品主要是为了提高分离度,增加理论塔板数,使峰形尖锐,对称.具体理由如下：
色谱法的实质是样品在流动相与固定相之间反复分配的过程,这个过程在实际中会受到很多因素的影响从而造成分离度下降,理论塔板数降低,使得分离不理想.
根据液相色谱Van Deemter方程H = A + Cμ（A为涡流扩散系数,C为传质阻抗系数,μ为流动相流速）.
涡流扩散主要由色谱柱本身造成.
传质阻抗是阻碍组分分子在固定相和流动相之间达到平衡需要进行分子的吸附、脱附、溶解、扩散等过程的因素.在理想状态中,色谱柱的传质阻抗为零,则组分分子流动相和固定相之间会迅速达到平衡,在实际体系中传质阻抗不为零.用流动相溶解稀释样品,是为了减少传质阻抗,提高分离塔板数,使得峰尖锐,对称.

看看峰形有没有变差?应该是柱子的问题,分离度不够了.换根色谱柱试试,或者把柱子好好冲洗下,走安苯山糖还是比较伤柱子的,盐比较多啊,用比例高一点的水,稍低流速冲过夜,90水：10甲醇好了,流速0.2.实在不行也只好换柱子了.没条件换柱子的话,就色谱柱再生,然后反过来用.

因为高效液相色谱的流动相中就有甲醇,用甲醇是为了让检测结果不受溶剂的影响.

一般有在线脱气（真空脱气,或氦气脱气）,或者你可以把流动相在使用前先超声十来分钟进行脱气.

浓度太低只是其中的一种可能性,可以提高样品浓度或加大进样量解决.还有其它的原因
1.样品在色谱柱上无保留或是保留时间太长,较大的可能是流动相不适用,改变流动相种类或比例.无保留的原因也较多,除以上原因外,也有可能是柱子选择不对,或是柱损坏.
2.紫外检测器的话,可能是波长选择的原因,可能此波长下样品的紫外吸收非常小.

1,为进行分离,可以根据样品的组分将流动相和固定相的组合最佳化.如果熟悉液相色谱,这是非常有利的,但对初学者来说,这是困难的.
2,适用样品范围广,80%的分析对象可借此法分析.
3,可以使用高效的分离柱,易于分离复杂的多组分混合物.
4,把被分离的组分溶解在流动相中,可以全部回收之.
5,可以使用多种非破坏性高灵敏度和选择性的检测器,把几种检测器串联起来,根据其对应特性,获取与定性有关的重要信息.
6,只能检测从色谱柱流出的组分.
7,由于没有通用型高灵敏度检测器,所以在分析未知混合物而没有色谱峰的时候,无法确定其原因是分离条件不合适,还是检测器没有响应.
8,采用尺寸排斥色谱法时,从低分子到高分子的样品全部流出,而且流出顺序是从高分子量开始,故可根据保留容量推测分子量,最适于做未知样品的组成分析.
9,测定精度好.因为注入精度比气相色谱好,故可以用绝对工作曲线.
10,虽然示差折光检测器为通用型检测器,但和气相色谱的热导检测器和氢火焰检测器相比,由于化合物之间的响应不同,所以用峰面积百分数求由多种化合物组成的混合物时问题较多.
11,要限制色谱柱的使用条件（温度、压力、流动相等）.而且与气相色谱相比,性能随时间的变化较大.必须定期用标准品在标准条件下检查色谱柱的性能.若按照不同的样品对象,固定使用色谱柱,对色谱柱的寿命是有利的.
12,制作色谱柱需要特殊装置和专门技能.
13,与气相色谱法相比,由于共存物质对分离的影响小,易于制备分析样品.
14,柱外死体积对色谱柱的性能有重大的综合性影响,而且连接方法依仪器制造厂而异.

高效液相色谱法包括正相高效液相色谱法和反相高效液相色谱法.
正相高效液相色谱法中流动相的极性小于固定相的极性,也就是以及性键合相为固定相（常以氨基、氰基键合相等作为固定相）.
反相高效液相色谱法中流动相的极性大于固定相的极性,也就是以非极性键合相为固定相（常以十八硅烷C18、辛烷C8、甲基C1、苯基等作为固定相）.不知道这样说你是否明白

高效液相色谱法,只要求试样能制成溶液,而不需要气化,因此不受试样挥发性的限制.对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大（大于400以上）的有机物（这些物质几乎占有机物总数的75%～80%）原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析.

你所用流动相在设定的分析波长下的吸收大于你所进样品（在倒峰保留时间处）的组分,一般此类倒峰出现于流动相含水量较高或样品含水量较高的分析.

以牛血清白蛋白(BAS)和牛血清红蛋白(HG)为物系,在制备型高效液相色谱(HPLC)分离装置上,考察了柱尺寸对柱效和分离度的影响.结果表明,增加柱长,可以显著地提高分离效率,但在满足分离要求的前提下,宜采用较短的制备柱.增加色谱柱的内径,虽然分离效果会有一定程度的损失,但在满足分离要求前提下,加大色谱柱的内径,可以显著地提高制备量.

1,为进行分离,可以根据样品的组分将流动相和固定相的组合最佳化.如果熟悉液相色谱,这是非常有利的,但对初学者来说,这是困难的.
2,适用样品范围广,80%的分析对象可借此法分析.
3,可以使用高效的分离柱,易于分离复杂的多组分混合物.
4,把被分离的组分溶解在流动相中,可以全部回收之.
5,可以使用多种非破坏性高灵敏度和选择性的检测器,把几种检测器串联起来,根据其对应特性,获取与定性有关的重要信息.
6,只能检测从色谱柱流出的组分.
7,由于没有通用型高灵敏度检测器,所以在分析未知混合物而没有色谱峰的时候,无法确定其原因是分离条件不合适,还是检测器没有响应.
8,采用尺寸排斥色谱法时,从低分子到高分子的样品全部流出,而且流出顺序是从高分子量开始,故可根据保留容量推测分子量,最适于做未知样品的组成分析.
9,测定精度好.因为注入精度比气相色谱好,故可以用绝对工作曲线.
10,虽然示差折光检测器为通用型检测器,但和气相色谱的热导检测器和氢火焰检测器相比,由于化合物之间的响应不同,所以用峰面积百分数求由多种化合物组成的混合物时问题较多.
11,要限制色谱柱的使用条件（温度、压力、流动相等）.而且与气相色谱相比,性能随时间的变化较大.必须定期用标准品在标准条件下检查色谱柱的性能.若按照不同的样品对象,固定使用色谱柱,对色谱柱的寿命是有利的.
12,制作色谱柱需要特殊装置和专门技能.
13,与气相色谱法相比,由于共存物质对分离的影响小,易于制备分析样品.
14,柱外死体积对色谱柱的性能有重大的综合性影响,而且连接方法依仪器制造厂而异.

用密度换算,可知为什么要这么换算呢?

我记得鉴别用的是保留时间,不同的物质保留时间不同,相同的物质保留时间相同,因此可以用来鉴别.理论板数影响的是区分度,理论板数越大,能区分开的多种物质的峰就分离的越明显,理论板数小,物质峰可能会有重叠.因此从理论板数无法看出是哪种物质.

你可以 买市面上卖的哇哈哈纯净水,我们做实验都用它.自制的双蒸水也可以,但如果容器不干净容易混进杂质或干扰离子

巴比妥钠是巴比妥酸的钠盐,没有生理活性,我想你问的应该是苯巴比妥钠或异戊巴比妥钠等,在5位次甲基上有取代的才有生理活性.
你的问题象是个实验报告,悬赏分虽然很高,但直接给你一篇是没有意义的,应该把涉及的问题搞清楚.
1.实验目的 巴比妥类药物的含量测定一般采用经典的容量分析法——银量法、溴量法、酸碱滴定等,还有UV.HPLC多用于制剂及血液和尿液中巴比妥类药物的含量测定,为什么呢?因为需要先分离,后定量.
2.实验条件 你所说的室内温度及相对温度,没有严格的要求,仪器本身对试验环境是有要求的,但在室内一般都可以满足.
3.样品的准备,样品的取用 这个比较复杂.首先是配制对照品溶液（比较简单）,还可以根据需要选用内标；其次是样品处理,以血药浓度测定为例,先要分出血清,再用有机溶剂萃取,在控温水浴上用氮气吹干,用流动相转移定容.样品处理比较简单的是用固相萃取,但成本比较高；还可以用柱切换在线分离,但对仪器硬件要求较高.
4.仪器操作 这个就不是几句话能说清楚的了,需要学习培训.色谱条件倒是可以从文献中查到,比如苯巴比妥钠的测定,C18柱,ACN-Water(60:40),波长254nm.
5.数据处理 定量法的说明 定量法不外乎外标法和内标法,一般都可以用一点法,如果线性不好,或截距比较大,可以用两点法或标准曲线.你应该在方法学的研究中确定.
不知道你的专业程度如何,我说的也许太浅显或太深了,希望对你有点帮助.