DNA测序可以采用哪些手段,并阐述各自的原理谢谢了,

恩,HGP是人类基因组计划,主要任务是人类的DNA测序：主要建立四大图谱,即遗传图谱、基因图谱、物理图谱、序列图谱.如果,你的意思是所有碱基的话,没有错.先明确一个概念：基因组,Genome,一般的定义是单倍体细胞中的全套染色体为一个基因组,或是单倍体细胞中的全部基因为一个基因组.可是基因组测序的结果发现基因编码序列只占整个基因组序列的很小一部分.因此,基因组应该指单倍体细胞中包括编码序列和非编码序列在内的全部DNA分子.说的更确切些,核基因组是单倍体细胞核内的全部 DNA分子.BP（basal pairs）碱基对是以ATCG为区分的,它们构成了DNA,而染色体（比如说人的）是一条巨长无比的DNA链,上面的碱基数以万计（只是说多）,但是,其中,基因的（有效的遗传成分,即会产生性状影响的）所占部分却很低,这也是测序是才发现的.换句话说,那些不表达或者不翻译的地方占了更多的地方（注：别搞混,不是基因的内含子序列）,但是,这并非说明他们没有作用,只是科学家也还不清楚.总之,应该理解到,这一计划是对整个人类24条（22+x+y）的一次完整BP测序,但序列的完成,并不代表该计划的完成,主要是是在这些序列上标记出哪些是真正的基因序列,基因间的距离连锁等等很多遗传上的问题,并且,人类也是通过这些序列的发现,来研究那些未知功能的基因的.因而,事实上,人类很多基因已经标出,但是却仍然没有对其功能有着明确的了解!

质粒构建出错了.

我认为有的.
DNA序列测定分手工测序和自动测序,手工测序包括Sanger双脱氧链终止法和Maxam-Gilbert化学降解法.自动化测序实际上已成为当今DNA序列分析的主流.自动化测序是在Sanger法基础上发展而来的.
DNA测序的原理,要答 Maxam-Gilbert化学降解法、Sanger双脱氧链终止法和现在发展起来的焦磷酸化测序的原理.
如果说现在最常用的测序原理,应答自动化测序：采用毛细管电泳技术取代传统的聚丙烯酰胺平板电泳,应用该公司专利的四色荧光染料标记的ddNTP(标记终止物法),因此通过单引物PCR测序反应,生成的PCR产物则是相差1个碱基的3'末端为4种不同荧光染料的单链DNA混合物,使得四种荧光染料的测序PCR产物可在一根毛细管内电泳,从而避免了泳道间迁移率差异的影响,大大提高了测序的精确度.由于分子大小不同,在毛细管电泳中的迁移率也不同,当其通过毛细管读数窗口段时,激光检测器窗口中的CCD(charge-coupled device)摄影机检测器就可对荧光分子逐个进行检测,激发的荧光经光栅分光,以区分代表不同碱基信息的不同颜色的荧光,并在CCD摄影机上同步成像,分析软件可自动将不同荧光转变为DNA序列,从而达到DNA测序的目的.
基因组测序的原理：则涉及到样品的制备、大规模的测序,以及序列分析等

双引物结合是啥意思捏~
是说引物在模板上有两个结合位点吗?
如果这样的话就只好重新设计引物咯

解题思路：分析题图：图示是应用生物工程生产乙肝疫苗的示意图．①表示获取目的基因，即从乙肝病毒中分离出有关基因，通过反转录法合成目的基因；②表示基因表达载体的构建和将目的基因导入受体细胞；③表示采用微生物工程进行发酵．

A、生产乙肝疫苗的过程采用了基因工程技术，该技术能定向改造生物的性状，A正确；
B、选用细菌作为受体细胞是因为其具有繁殖快，遗传物质相对较少等特点，B正确；
C、用于生产疫苗的目的基因编码病毒的表面抗原蛋白，C错误；
D、②包括基因表达载体的构建过程，该过程需要限制酶和DNA连接酶，D正确；
故选：C．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题结合乙肝疫苗的生产过程，考查基因工程及免疫的相关知识，要求考生识记基因工程的概念、工具及操作步骤，明确该过程的目的基因是编码病毒表面抗原蛋白的基因，再结合所学的知识准确判断各选项．

就是说在你测的那一个基因本来应该是A的话,但是在他们测的时候出现了G的峰和A的峰重叠,导致他们无法判定这一点的基因应该是什么,应该把你的片段与所测的做对比.这是一个基因的信号重叠.但是按照你的意思所说的好象是整个片段都是重叠,最有可能的就是你所测的片段太长,现在技术达不到那么精细,其它还有可能是他们设计的的引物不对导致所有的信号重叠

这种情况比较常见,你可以看一下你基因的大小,差30bp应该可以看出来
到底是丢了,还序列本身问题不好说,都有可能.只能怪目前测序公司水平不行呗

解题思路：根据题意分析可知：双脱氧核苷酸能遵循碱基互补配对原则，所以胸腺嘧啶双脱氧核苷酸也可和单链模板上的腺嘌呤脱氧核苷酸进行配对．

以含11个碱基的脱氧核苷酸单链模板合成出的子链有含3、5、7、9、11个碱基的4种脱氧核苷酸片段，可推知：
（1）可能在模板链的3、5、7、9的位置上含有腺嘌呤脱氧核苷酸．这样就有可能在3、5、7、9的位置上共4个胸腺嘧啶双脱氧核苷酸与模板上的腺嘌呤脱氧核苷酸进行配对，③正确．
（2）可能在模板链的3、5、7、9、11的位置上含有腺嘌呤脱氧核苷酸．这样，可能就有在3、5、7、9、11的位置上共5个胸腺嘧啶双脱氧核苷酸与模板上的腺嘌呤脱氧核苷酸进行配对，④正确．
故选：D．

点评：
本题考点： DNA分子的复制．

考点点评： 本题提供了一个新材料．主要是考查有关DNA分子复制和碱基互补配对原则的运用．试题角度新颖．难度不大，但还是需要学生认真考虑．能够在新情境下运用相关知识进行分析．

会受到检查,请携带有关证明,以及证件,避免长时间检查

DNA测序一个反映大约可以测800bp左右,如果所测目的序列在800BP左右,则一个反映就可以测通,即完成测序；
如果序列大于800BP,如1500BP,则需要两个反应才可以完成测序,两个反应的测序中间是有相同的部分,故需要拼接.

DNA测序技术,即测定DNA序列的技术.在分子生物学研究中,DNA的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基础.目前用于测序的技术主要有Sanger等（1977）发明的双脱氧链末端终止法和 Maxam和 Gilbert（1977）发明的化学降解法.这二种方法在原理上差异很大,但都是根据核苷酸在某一固定的点开始,随机在某一个特定的碱基处终止,产生 A,T,C,G四组不同长度的一系列核苷酸,然后在尿素变性的PAGE胶上电泳进行检测,从而获得DNA序列.目前 Sanger测序法得到了广泛的应用.
Sanger 法测序的原理就是利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物.直到掺入一种链终止核苷酸为止.每一次序列测定由一套四个单独的反应构成,每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP),并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP).由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基团,使延长的寡聚核苷酸选择性地在G、A、T或C处终止.终止点由反应中相应的双脱氧而定.每一种dNTPs和ddNTPs的相对浓度可以调整,使反应得到一组长几百至几千碱基的链终止产物.它们具有共同的起始点,但终止在不同的的核苷酸上,可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段,凝胶处理后可用X- 光胶片放射自显影或非同位素标记进行检测.

因为DNA的两条链之间存在互补关系,因此测哪一条都无所谓,因为得到一条链的碱基排列顺序就可以推断出另一条链.
在现实操作中,由于DNA分子很小,并不是我们真的能够选择哪条链,要看哪条链正好在实验中可以被DNA测序仪读取.

看是隐形遗传还是显性,还有看是基因的哪个位点的突变（密码子第三位一般不影响蛋白功能）

在ABI3730测序仪中,当激光照射放射性标记时,标记会发出荧光并在ccd上留下电信号.dATP,dGTP,dCTP,dTTP四种荧光各不相同,所以通过分析不同的电信号就可以测出DNA的序列.放射性标记只存在于dNTP上.

先将目的基因导入受体细胞,然后转录检测.需要大量试验,与未导入受体的细胞比较不同,大体可以猜出.望采纳,谢谢

个人认为在sanger法测序的时候
一是因为随着双脱氧核糖核酸的掺入,链延伸立即中止,所以延伸出长链的概率随链的增长而降低.
二是因为目前普遍使用的毛细管电泳（或者之前使用的测序胶）,分辨率也随链的增长而降低.可以简单的想象普通琼脂糖凝胶电泳,分辨100bp和150bp很容易,分辨1000bp和1050bp就比较困难,10000bp和10050bp非常困难.