琼脂糖电泳分离6kb和7kb的片段,用什么浓度的胶?现在是条带太宽,在6000和8000之间只有一条

lcqhero2022-10-04 11:39:542条回答

琼脂糖电泳分离6kb和7kb的片段,用什么浓度的胶?现在是条带太宽,在6000和8000之间只有一条
是一个7338bp的质粒,双酶切下900多的片段,电泳,要回收6000多的片段

已提交，审核后显示！提交回复

共2条回复

katrinalily 共回答了12个问题 | 采纳率83.3%: 你切的时间长一点质粒不能这么算的因为切开了就是开环了和超螺旋的在跑胶上差别很大的不是只有900BP的差别所以如果只有一条那一条就是切开的; 1年前

纷纷机将共回答了278个问题 | 采纳率: 你切的时间长一点质粒不能这么算的因为切开了就是开环了和超螺旋的在跑胶上差别很大的不是只有900BP的差别所以如果只有一条那一条就是切开的老板说应该有两条带，特别交代收6000多的，是什么情况？你在旁边跑一道没有切的看看两个条带位置是不是一样只要不一样就是那个了老板都不懂实验...; 1年前

相关推荐

SDS电泳和琼脂糖电泳的区别为什么琼脂糖不用两种浓度的胶? haoyue83061年前1: 27469195 共回答了15个问题 | 采纳率80%

你说的SDS电泳实际上是SDS-PAGE,SDS只是蛋白变性剂,而凝胶是聚丙烯酰胺.SDS-PAGE和琼脂糖凝胶电泳使用的是完全不同的凝胶材料.SDS－PAGE采用的是聚丙烯酰胺,它是靠化学反应形成的凝胶.而琼脂糖凝胶则是物理反应（加热融化,冷却凝固）.通常情况下,我们采用聚丙烯酰胺凝胶电泳来分离蛋白质,而琼脂糖凝胶电泳来分离核酸.当然,这并不绝对,如果要用来分辨碱基数相近的核酸片段时,我们也会采用聚丙烯酰胺凝胶来进行电泳,如DNA测序反应中的变性聚丙烯凝胶电泳.至于为啥琼脂糖凝胶不用两种浓度不同的胶,实际上是和SDS-PAGE与琼脂糖凝胶电泳点样孔方向有关.SDS－PAGE是竖胶,电泳点样孔与电泳方向平行,点样的时候肯定会造成样品分布不均.所以需要一个高浓度的胶来预电泳保证在分离胶的时候所有蛋白处于同一水平.而琼脂糖凝胶电泳时,胶是横着的,点样孔方向与胶的方向垂直,所以加样的时候不会导致样品电泳时不在同一水平.故不需要两种不用浓度的凝胶.

1年前查看全部

琼脂糖电泳能检测50bp的DNA条带吗 琼脂糖电泳能检测50bp的DNA条带吗 能用琼脂糖电泳检测的50bpDNA条带吗?我用过2%的胶,80V电泳.Mark是PBR322/Mspl,电泳了90分钟,Mark还没跑开.我都先后看了30分钟,60分钟,90分钟的电泳效果图,都没有目的条带（点样2ul）.像这种短片段DNA能用琼脂糖电泳检测吗?琼脂糖浓度为多少?电泳多长时间?DNA的点样量有什么要求不?是不是有什么操作诀窍?请大家帮帮忙啊. 谢谢你们的建议，我会再尝试的。请问Mark没跑开不是时间问题吗？我的电压是80V，电泳缓冲液也是新配的TAE，应该这方面没什么问题。再说，如果这些条件有问题，那目的带肯定也跑不出来啊（我是通过酶切跑电泳的，一个条带5000bp，一个50bp，5000bp的看到了而且很亮，50bp的就没见到）。我再想如果50bp的目的带只要跑30分钟，而Mark要跑60分钟甚至更长，那就不能在一块胶上跑了，等Mark跑开了，我的目的带也跑出去了。。。请问你们在做这个时用的什么Mark？你们还有什么好建议吗？期待你的帮助。。。。 zjrong0251年前4: 网球美眉共回答了18个问题 | 采纳率94.4%

2%浓度的胶已经够了,120V,30分钟以内；但是说实话50bp的东西肯定不会很明显,我最低做过80bp的,勉强能看到条带,50bp琼脂糖胶应该也能看到的.
另外,你电泳MARK没跑开说明你的电泳实验存在问题,请检查你的电泳仪电压电流,电泳槽接触是否良好,电泳缓冲液浓度是否正确

1年前查看全部

rna琼脂糖电泳前RAN需变性吗? 梦幻BB1年前1: wesley_3623 共回答了18个问题 | 采纳率100%

RNA电泳一定要保持RNA变性的,为了防止RNA二级结构对结果的影响,通常会加入甲醛之类的物质使的RNA可以保持链状

1年前查看全部

请教琼脂糖电泳跑胶结果的问题? 请高人指点我这个电泳带跑的怎么样,怎么有两行亮带? 请教琼脂糖电泳跑胶结果的问题? 请高人指点我这个电泳带跑的怎么样,怎么有两行亮带? 请高人指点我这个电泳带跑的怎么样,怎么有两行亮带?而且每条条带怎么不是规矩的方形亮带啊?这个能不能送去测序?刚开始做分子有很多不懂的地方,求高人指点 luneluna1年前1: 蓝色银狐共回答了21个问题 | 采纳率100%

这个是PCR的结果跑的胶么?还是酶切

1年前查看全部

提出来的RNA 电泳检测时没有条带用的是1%琼脂糖电泳 陈家三少1年前2: lihongniu 共回答了20个问题 | 采纳率90%

RNA在提取过程中和保存期间非常容易被RNA酶降解,提取过程得非常小心,保存期间也得加RNA酶抑制剂,不知道紫外分光光度计检测时含量和纯度如何,及时被降解,也应该有拖尾才对,可能是浓度太低,建议加大上样量试试.

1年前查看全部

1%琼脂糖电泳后,为什么看不到我的目的条带? 1%琼脂糖电泳后,为什么看不到我的目的条带? 我的目的条带是177bp,从质粒中双酶切后跑电泳,几乎看不到我的目的条带,是不是因为目的条带比较小,跑的比较前面,本身就容易变得模糊,亮度减弱的?双酶切是20ul体系,点样时用了8ul.酶切后电泳,大的条带比较清晰,我的目的条带177bp的几乎看不见,不知是什么原因, 当然加了MARKER了。还没跑出去呢~不过谢谢回答 gdcail1年前4: songkeer160 共回答了25个问题 | 采纳率96%

条带短,能结合的EB（或其他染料）就少,所以相对长片段亮度就很弱,一般小于500就很难看清.
解决方案,基本上楼上的都提到了：
1.提高琼脂糖凝胶浓度到2%-3%
2.跑个单酶切对照,有差异就表示有连接进去.不过如果是要回收目的片段,建议还是用载体上的序列PCR扩增,而且回收小于400bp的DNA不太容易呵

1年前查看全部

真菌总DNA提取,琼脂糖电泳时,有一条带靠近加样孔,另一条分子量也很大 真菌总DNA提取,琼脂糖电泳时,有一条带靠近加样孔,另一条分子量也很大 请高手解释一下靠近加样孔那条带是什么原因 f1986511年前2: 我是萧洋共回答了24个问题 | 采纳率91.7%

蛋白质,另外可能还有糖类之类的,如糖蛋白,多糖,所以整体黏糊糊的,跑不出点样空!

1年前查看全部

琼脂糖电泳分离DNA时缓冲液的pH应在什么范围内?此时DNA带什么电荷,为什么? Ariel3161年前1: 小雨点-66 共回答了14个问题 | 采纳率92.9%

主要是看tris的缓冲范围,Tris缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0到9.2之间,算是中性和偏碱性.DNA肯定是要带负电荷的,所以电泳的时候才会向正极跑.

1年前查看全部

电泳120V但是胶跑的速度很慢琼脂糖电泳是ATTO的电泳仪AE-8450 1000VC 张江明1年前1: 天平座的紫rr 共回答了15个问题 | 采纳率93.3%

1,如果你的DNA分子量很大,用TBE跑就慢,可用TAE.
2,胶的浓度太高,提取的DNA用0.6%-0.8%的胶,PCR结果用1.0%-1.2%的.
另外说一下：你的电压是否太高,就算120V跑得快,那跑出来,条带是否会比较粗糙,其形状给人以嚣张的感觉?一般应该根据电泳槽长度算出电压,电压应是5-10V/CM左右.我用的电压是80V,电泳槽长度大概25公分左右,电压低一些,时间长一些,但条带含蓄内敛,姿态优美,赏心悦目,风魔万千老师.

1年前查看全部

质粒酶切后,目的片段DNA是小片段,琼脂糖电泳图目的条带太暗,怎么增加亮度? 质粒酶切后,目的片段DNA是小片段,琼脂糖电泳图目的条带太暗,怎么增加亮度? 我的目的条带在200bp左右,酶切跑胶,能看见目的条带,但是太暗了,怎么能够增加亮度啊? 补充：我用的琼脂糖凝胶浓度是1.5%,酶切体系是20uL,上样量也是20ul,工作液中的EB浓度是0.6%. 怎么改进实验啊? 是目的条带太暗（小片段），切开的大片段挺亮的，而且加了质粒对照了，质粒也比较亮（加了3ul） 幽幽小饼1年前1: 求知小生共回答了21个问题 | 采纳率81%

你没怎么说清楚.首先,是大片段和小片段（目的条带）都暗,还是只有小片段暗?如果都很暗,可能是酶切体系中的质粒加的不够多,或者是你提取的质粒浓度不高.如果是只有小片段很暗,那就说明内切酶没把质粒切开,你要注意一下内切酶的活性或浓度、温度、离子等对酶活是否有影响.
1、3ul的质粒感觉有点少,你是割胶回收的吗?那质粒量要多加,因为回收会损失片段的.
2、有质粒的存在就是说明还没切开.你的酶有问题吗?酶切体系的buffer浓度、温度什么的对不?酶切多少时间?另外,还要看你选择的酶切位点好不好切啦,有些酶切位点很难切开的.

1年前查看全部

DNA跑琼脂糖电泳,为什么第一次跑和第二次跑的结果不一样? DNA跑琼脂糖电泳,为什么第一次跑和第二次跑的结果不一样? 给细胞加药后DNA会断裂成片段,将正常细胞和加药细胞提出DNA后跑电泳,理论结果是加药DNA跑电泳会有明显拖尾,正常DNA只有15000的一个清晰条带.我将两种细胞提出DNA后跑电泳,第一次跑出来的结果和理论结果一致,样品我没有扔,继续跑第二次电泳,但结果就很混乱：加药DNA不拖尾；正常DNA反而有一点拖尾,不过不明显；而且第二次电泳条带没有第一次的亮.我又跑了第三次电泳,结果和第二次一样.于是我又重复提DNA,后来跑的电泳和原来的一样,第一次跑出来的结果和理论结果一致,第二、第三次的就不是理论值了,但第二和第三次跑的结果是一样的. 我确实是反复冻融DNA,我一直以为是DNA在TE里没有混合均匀呢~电泳前我会解冻DNA,期间大概一个小时DNA是暴露在室温中的,跑完电泳我就把它冻起来了,然后又解冻~DNA真的是被降解了吗?我回去试试您的方法吧~ 还想问个问题,怎样才能把DNA提得纯一点呢?我提的是HePG-2细胞~教我教我~ mnkj6781年前1: Jattiuf 共回答了18个问题 | 采纳率88.9%

这个很好解释啊,你每次都是提取好DNA第一次跑电泳结果跟预期一致,后面跑就不一致了
这是因为提取得到的DNA由于含有DNA酶会降解断裂,反复冻融DNA样品的话就会更厉害,DNA降解了就会形成弥散状的条带,也就拖尾了,特别是提取的DNA纯度不高的时候,降解就会更严重.
给你一个建议,DNA提取好之后,将得到的DNA分装（比如总共100ul的话分成25ul的四份）,然后于-20度保持,-70度更好,用的时候拿一管

1年前查看全部

我用十一种微卫星引物扩增某一个体的基因组DNA,可是1.0%琼脂糖电泳检测时有的没条带,有的有很多条带?谢 猫猫03731年前2: cjjxy 共回答了12个问题 | 采纳率100%

如果引物序列,PCR体系,程序,以及所用的物种都和文献一样的话,可考虑两种情况：1.你所参考的文献真实度有待考量.2.你所提取的该物种DNA质量不好.需重新提纯.

1年前查看全部

请问dna的琼脂糖电泳时,缓冲液能不能使用tris-hcl?如果可以,具体如何操作?电泳完后的dna染色可不可以不用溴化 请问dna的琼脂糖电泳时,缓冲液能不能使用tris-hcl?如果可以,具体如何操作?电泳完后的dna染色可不可以不用溴化乙锭?谢谢! 坏豆豆1年前1: shangle0605 共回答了16个问题 | 采纳率81.3%

不可以,常用tae

1年前查看全部

质粒双酶切后,目的片段DNA是小片段,才56bp,我做的琼脂糖电泳图目的条带看不到,这么小能不能看到呢? 质粒双酶切后,目的片段DNA是小片段,才56bp,我做的琼脂糖电泳图目的条带看不到,这么小能不能看到呢? 如果因片段太小电泳看不到,那么怎么判断小片段被切下来了呢? 咿吖吖1年前4: shoulderzheng 共回答了19个问题 | 采纳率84.2%

你在旁边跑一道没有酶切的质粒如果切完的质粒跑的多一个条带那就说明切下来了经过酶切的开环质粒跑的位置和原质粒差别还是比较明显的

1年前查看全部

提取DNA实验中为什么琼脂糖电泳后仅能见到一条主带呢? 提取DNA实验中为什么琼脂糖电泳后仅能见到一条主带呢? 一条染色体含有一条DNA,基因组中不同的染色体DNA的大小是不同的.按理来说,所提取的基因组DNA中含有多条大小不一的DNA.但为什么用琼脂糖电泳后仅能见到一条主带呢? 追逐梦幻1年前2: jaclynxy 共回答了16个问题 | 采纳率87.5%

1.你需要知道琼脂糖胶的分辨率是有限的,通常用的1%的琼脂糖胶是不能有效分辨相差100bp以内的片段的（这一点不能说明你的问题）；2.你还需要知道基因组是很大的,通常都是以M为单位的,而琼脂糖胶分辨最大片段的能力是有限的,即便是0.3%的琼脂糖胶所能分辨的最大片段也只有50000bp（这点可解答你的问题）,所以不同长度的染色体DNA是不能在琼脂糖胶上分开的.

1年前查看全部

血浆脂蛋白按照琼脂糖电泳法和密度超速离心法可将其分为哪几类? 昀珊1年前2: myid2004 共回答了17个问题 | 采纳率88.2%

（三）根据蛋白质带电性质进行分离蛋白质在不同pH环境中带电性质和电荷数量不同,可将其分开.1、电泳法各种蛋白质在同一pH条件下,因分子量和电荷数量

1年前查看全部

新屠宰的羊腿肉,想提取其表面细菌DNA,用的天根试剂盒,但琼脂糖电泳后无条带 新屠宰的羊腿肉,想提取其表面细菌DNA,用的天根试剂盒,但琼脂糖电泳后无条带 想问问有经验的朋友,会不会是肉表面的菌太少了,导致没有出条带呢?那如果我PCR扩增一下,是否有可能能出来结果呢? 也偶尔我一样1年前2: 安讯腾飞共回答了18个问题 | 采纳率94.4%

你少做了一步增菌.
就算表面有菌,你也可能刚好没取到有菌的部位或者是菌量少到难以提取到足够的DNA.
所以同理,就算你用PCR扩增,也还是要先增菌.
增菌这步就看你做哪个指标,然后根据那个指标的国标来做就可以了.

1年前查看全部

做细菌pcr扩增的时候,琼脂糖电泳在100到250之间有亮条带,但是在250到500之间多出了一亮条带,这是怎么回 wtianqya1年前2: laogongaiwo123 共回答了21个问题 | 采纳率90.5%

那是非特异性扩增片段,因为你使用的引物不光扩增了你的条带,还复制了其他一段DNA,只要非特异性扩增不是很强你也不是做qPCR,基本没有影响的,做PCR常会遇到.

1年前查看全部

琼脂糖电泳分离6kb和7kb的片段,用什么浓度的胶?现在是条带太宽,在6000和8000之间只有一条

共2条回复

相关推荐

大家在问