RNA电泳条带拖尾原因从细菌中提取的RNA电泳条带这个样子的原因是什么

只能说是一定程度上,因为存在共迁移等诸多问题

我估计你把分离胶和浓缩胶放反了.先是浓缩胶,这样蛋白在进入分离胶之前都在一个起跑线上,在分离胶中就可以根据蛋白分子的大小而分离开来.离胶和浓缩胶分界线下部应该是分离胶,蛋白就是应该分布在这里.

IgG是血清免疫球蛋白的主要成分,它占总的免疫球蛋白的75%,是初级免疫应答中最持久、最重要的抗体,它仅以单体形式存在.IgG可又含有αβγ三种免疫球蛋白,我们这里的起作用的主要是γ球蛋白,可以通过硫酸铵盐析和半透膜通析的方法纯化,也可以用过柱了.纯化后的蛋白质电泳,一般会在出现50kDa和23.5kDa这二条带,因为Ig分子的基本结构是由四肽链组成的,即由二条相同的分子量较小的轻链（L链）和二条相同的分子量较大的重链（H 链）组成的.L链与H链是由二硫键连接形成一个四肽链分子,称为Ig分子的单体,是构成免疫球蛋白分子的基本结构.在电泳的过程中在聚丙烯酰胺凝胶系统中,加入一定量的十二烷基硫酸钠（SDS）,SDS是一种阴离子表面活性剂,加入到电泳系统中能使蛋白质的氢键和疏水键打开,并结合到蛋白质分子上使蛋白质的迁移率只与蛋白质的分子量有关,这样你就可看到两种链了.至于要不煮,我觉得影响不是太大吧,煮了可以使样品和上样缓冲液更好的结合.

跑时间太长、DNA降解弥散、150片段一般与溴酚蓝在一个位置上.检测是否正负电源插错及胶配置是否存在问题.请具体描述情况说明.

模板没条带说明量少,pcr本身就是扩增,能出条带很正常.但仅此只能说是有得到目的片段的可能,需要进一步酶切验证或测序

调整标记剂量,增加琼脂糖胶浓度~

分离胶缓冲液的pH有问题.建议测量一下,应该在8.8左右,你的pH肯定低于8.8,如果不是你弄错了,就是你的pH计出问题了.如果一时找不到准确的pH计,建议使用pH试纸.

首先你的确认你没有用错东西.
如果没有问题,二次PCR的话,那得看你的延伸时间和退火温度了.
2轮的退火温度最好调高些,以增强特异性.
延伸时间上,看你的产物大小.如果需要大条带,那延伸时间意义不大,最好能对一轮产物进行预期条带的回收后再做2轮,或者进行巢式PCR；要是需要小条带那就简单了,直接缩短延伸时间就好了.

另外我用了天根的胶回收试剂盒,回收的DNA 量非常的少最多的一个才9ng/?l 左右,我加了 50ul 的洗脱液.这个到底是出了什么问题呢?我回收的是下面那 3 条跑开的条带,大小是500Bp 左右,下面小的Marker 都跑没了,不知道是为什么,以前都有的,胶是1.2%的浓度,电压120V,时间是25 分钟.建议用原模板进行PCR,如果担心PCR 量较少,可同时扩增几管（最后回收成1 管）,如果 PCR 产物较纯（无非特异性杂带）,则可以直接采用纯化,相对于胶回收,可以减少损失.如果PCR 产物可能存在突变,混在一起后会比较麻烦,你可以就一管回收下来,先连T 克隆,在进行后续载体的构建.PS:做T 克隆时,回收产物只要有就够了,不需要太多的回收产物,即使你回收后的产物电泳检测都看不到都没关系,T 克隆很容易的.关于胶回收问题,我不知道你的片段大概多少,用的什么公司的回收试剂盒.For SOE-PCR:1,never use the SOE-PCR product as the 2ndary PCR template,since it usually contains several different length products which will cause your final products as a smear.2,use about 1/10 conc.of middle primers to increase the PCR products:for example of your case:you should have 3 pairs of PCR primers to amplify the first group products (those three bands on the right side),let's name those primers as 1 to 6.1 and 2 for the 2nd band 3 and 4 for the 3rd band 5 and 6 for the 4th band in this case,odd number primers are forward primers,and even number primers are reverse primers.And let's say you want to PCR them together as the order of 5'-2nd band-3rd band-4th band-3'.When you perform SOE-PCR,in addition of your regular primer 1 and 6 as the pair,add 1/10 the conc.3 and 4 with it.3,Run 2% gel,which will increase the resolution of DNA band (