高效液相色谱检测灵敏度如何调节

流动相用0.45μm微孔滤膜过滤后超声脱气15min,标准品是纯溶液的话不需要过滤,待测样品为生物样品是需要经过处理的（沉淀蛋白,萃取,高速离心）,离心之后取上清液直接进样,不能过滤

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价格便宜、对样品、离子对水溶液、酸碱调节剂溶解性好、通用性强.

你的流动相是用水和有机溶剂配制的,而一般的有机溶剂的极性比水的要小,所以增加流动相中的有机相的比例,会使整个流动相的极性减小.而导致对与样品的洗脱能力下降,所以会使的样品的出峰时间增加.
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气相温度对于样品的气化程度影响很大,一般说温度越高,气化越快,通过色谱柱时间也越短,气相单一物质分析一般用恒温,多种物质分析时,通过改变柱温能够很好的对样品进行分离,节省了分析时间,这时往往用梯度升温
液相并不是都是室温,一般来说,温度对于反相色谱分析影响不大,所以用反相柱分析时,一般用室温,不配备柱温箱,但是很多正相色谱分析时对于温度要求比较严格,比如说配位体交换色谱法时,温度的影响还是很大的,用金属离子柱分析时,如Ca柱,一般要求温度80度以上,没有柱温箱是不能分析的

如果是农药残留测定,基本是痕量分析,一般必须前处理浓缩.采用质谱检测器有可能不用处理,取决于灵敏度.

eplicate injection指同一个样品瓶的重复进样；
duplicate injection指同一样品制备多份样品瓶的重复进样 ；
blank injection空白进样,具体操作看上下文.
供参考.

你说的是制备色谱,普通液相色谱在紫外无损检测后,可以按时间段收集流出组分,但是问题在于1.高效色谱本身系统压力就很大,开口后无法保证系统压力.2.普通高效色谱柱效很高,柱容很小,都是痕量分析,只有大容量的制备色谱才能满足得到小量目标物的要求.制备色谱分为低压、中压和高压几种,根据自己要求可以选择合适的,

haocunha到的回答只有“应用范围广,样品不被破坏、易回收等优点”这三点勉强对了.
高效：一般的气相理论板数达到万级,高于液相的千级.
高灵敏度：一般液相都是微克级别,更好的可以达到纳克级,气相一般都是纳克级的,有些可以达到皮克级.
分析速度：气相和液相差不多,时间长短主要根据样品来定,气相一般不会超过40min,液相考虑到流速不能调太高,有很多样品要跑1到2小时.
色谱柱耐用性：维护和使用得好的话,气相色谱柱用得更久.
液相色谱和气相色谱检测的范围不同,优点并不好比较,总的来说,有以上的3个优点外,还有以下几点：
1 定量准确性更好；
2 重复性更好；
3 液相的流动相变化更灵活,有利于研究和开发方法.

中国药典2010年版：按各品种项下的规定,配制供试品溶液,取一定量注入仪器,记录色谱图.测定各峰的面积和色谱面积的百分率.

HPLC中,波长选择是依据待测物质最大吸收波长来决定的.
通常,高效液相色谱检测器为紫外检测器,所以HPLC中波长的选择和紫外波长选择一致,均为选择最大吸收波长,这样能保证检测的灵敏度和响应值最高.

如果波长相差较大,无法选择波长,相差较小的话,选择3种物质中间的波长.要是二极管阵列检测器就好办了...
无法选择波长也不是没法做,看看你做的是什么东西了,1种方法是可以用衍生法实验,把其中的一种或者2种用衍生的手段,把吸收波长调整的较为接近.另一种方法只能一个一个的进行试验了.
波长相差的大小也不好描述,你选择中间波长试验一次,看看是否都能出峰,能不能达到检出限.

不同点：
一、流动相不同：HPLC为液体流动相,GC为永久性气体作流动相（通常叫做载气）
二、进样器不同：高效液相为平头进样针,气相色谱为尖头进样针
三、色谱柱长不同：
（1）气相色谱柱通常几米到几十米
（气相色谱由于载气的相对分析量较低,分子间隙大,故粘度低,流动性好,组分在气相中流动速度快,因此可以增加柱长,以提高柱效）.
（2）液相色谱柱通常为几十到几百毫米
四、分析种类有差异：
气相色谱分析的对象多为（不适绝对）：分子质量小于1000,低沸点,易挥发,热稳定性好的化合物.
液相色谱：更适用于分析高沸点,难挥发,热稳定性差,分子质量较大（1000 - -2000）的液体化合物.
五：样品柱前变化不同：气相色谱的样品在柱前必须变为气体（气化室汽化）,而液相色谱的样品在柱前则无变化.
六、所用检测器有差异：
液相主要为：紫外检测器,荧光检测器、示差折光检测器.
气相色谱主要为：氢火焰离子化检测器（FID）,热导检测器（TCD）,电子捕获检测器（ECD）,火焰光度检测器（FPD）,氮磷检测器（NPD）.
相同点：基本原理相同.
都是利用物质在流动相和固定相中的分配系数的差别,从而在两相间反复多次（1000-1000000次,甚至更多）的分配,使原来分配系数差别很小的各组分分离开来.

色谱柱的3-10um填料的已经很普遍了,不觉得有什么优点了,现在分析用的25cm的长柱子基本都是5um的,短柱子中3.5um填料的也很常见了!现在开始流行

能说明色谱柱的分离能力.建议你去“色谱世界”网站看看,这个网站在色谱方面非常专业,对你会有较大帮助.

柱效（理论板数）、分离度（大于1.5）、拖尾因子（0.95-1.05）三项.
目的是衡量该色谱条件下的色谱系统（主要是柱子）,是否适用于该方法.

一定要过滤.

可以.
增加进样量和增加浓度是一样的意思.
你可以看一下自己实验条件的定量限（信噪比为10时候的浓度）是多少,只要比这个高就好.当然了,最好是吸收大一点,看着漂亮.
不过有一个过载量,这个要通过线性才能看出来.只要是线性试验的中间浓度其实都是可以的.

计算含量的方法很多：面积归一化法,外标法,内标法常用的：面积归一化法那很简单,配制一个供试品,进样分析.一个色谱峰代表一个物质,最大的那个通常是你的主峰,其余的基本都是杂质.杂质（%）=杂质的峰面积/主峰峰面积*...

按照流动相走的顺序说下吧：
储液瓶——装流动相；
送液装置（泵）——送液的；
进样装置（手动/自动进样）——使样品进入系统中；
色谱柱——分离的核心,色谱的心脏,分离的好坏绝大部分取决于色谱柱的选择；
检测器——收集信号变化,记录数据变化；
工作站——早期的是积分仪,现在基本淘汰,现在一般都是将模拟信号或数字信号的,模拟信号需要转换成数字信号传给电脑,电脑上有软件,进行数据的记录和处理；
液相色谱的大部分基本就这些,

通常的,用反相(如C18)保留不是很理想,这时可以考虑用亲水作用Hilic色谱柱.用Hilic色谱柱的色谱条件与反相C18一样,如乙腈/水.
这类应用,如核苷酸、氨基酸、多肽、单糖、有机酸,等等.

对于反相的HPLC,梯度洗脱的流动相是有机相比例从小到大,水从大到小.
作为方法建立,可选择如下步骤：
1.乙腈-水（0：100）-（100：0）,没有选甲醇的原因是甲醇-水粘度大（尤其在与水大概55：45时）,这样如果可以换等度的时候柱压较高,又有背压调节的问题；
2.根据若干目标物出峰的时间,可以大致推算当时的流动相比例范围,找到1个比较精确的梯度表,注意,因为有柱前体积,出峰时刻显示的流动相比例与实际的柱上比例是有滞后的；
3.进一步的调整,以达到满意的分离效果,和尽量短的分析时间；
4.目标物如果是可解离的（酸性物质或碱性物质）,水相中可以加入酸（和或三乙胺）,或用buffer,如果是蛋白质、肽类,一般可加入三氟乙酸；
5.能够进一步调整的还有柱温和流速.
就我个人的意见,如果能用等度,还是尽量用等度洗脱.

sunmaocheng(站内联系TA)是不是在跑液相开始的时候,用磷酸钾缓冲液和纯乙腈先梯度洗脱?huanghaiyu(站内联系TA)只要盐完全溶解,一般不会有问题的,如果你确实很担心,就把乙腈和盐按照你的比例混合好,然后装在一个瓶子了,再进样品,这样就没问题了,使用完清洗的时候首先要用95%的水冲洗,避免残留.痴客(站内联系TA)以前用PB缓冲液和乙腈跑过,貌似没出过什么问题,但是后来老师说盐可能会堵柱子fisherme(站内联系TA)遇到过这样的问题,前一天有人用眼做流动相跑了,系统可能没有冲干净,隔天再用乙腈系统压力就会升高,甚至堵住.这明显是少量盐溶液在系统内有过量的乙腈会洗出盐结晶.x0d其实只要盐溶液和乙腈比例合适就不会存在析出的问题,关键是使用过后的后处理,也不能直接用100%水来冲,要有个缓冲.算不上经验,交流一下.lihuan0525(站内联系TA)最关键的就是使用后的及时冲洗.chene(站内联系TA)主要是要在用完后,耐心把柱子冲赶紧,这很重要,要不下次别人没法用的同时也耽搁你自己的使用!caozhanglei(站内联系TA)1.用前要用磷酸调PH值,使其达到所要求的PH值.x0d2.要现用现配,以免时间长缓冲盐析出和滋生细菌.x0d3.要一次配足,多次配的前后缓冲效果不一样,影响分离效果.x0d4.磷酸盐流动相尽量现用现配,不要存放太久,如果晶体析出,会严重损坏柱子和泵内的密封垫圈,还有柱塞杆.x0d5.流动相溶剂应选择hplc的溶剂或依此为标准的溶剂.流动相使用前用0.45μm滤膜过滤、脱气,清除微粒和灰尘.在送液泵内,为了防止杂物（固体）进入流路,装有吸滤器,但网孔径为10μm,比此更小的颗粒仍然可通过,这会导致流路和柱子堵塞和污染.为此,建议常用0.45μm滤膜过滤.流动相溶剂须经脱气,如不脱气,在溶剂混合时,或压力温度变化时容易产生大量气泡,会导致泵误动作和输液不畅,检测器产生噪声信号等.x0d6.流动相恢复到室温后使用.流动相温度与室温相差时,流动相在恢复到室温前,基线水平很难稳定,特别是发生漂移,也容易产生气泡等现象.水与有机溶剂混合时,混合液变化大,往往会与室温相差很大,务必注意.gdmc041(站内联系TA)安装保护住,再则冲洗好柱子,一般没有什么大碍了.痴夷子皮(站内联系TA)缓冲盐会析出是因为流动相中有机相（甲醇或乙腈）比例高所致.防止盐析出就需避免高比例有机相-缓冲盐体系的出现.x0d正规操作1、以流动相平衡色谱柱前,先用50%~90%以上的水平衡约30min,再更换上流动相.x0d2、使用后,及时以梯度冲洗色谱柱.80%~90%水 0.5ml/min冲约1h,再改用80%~90%有机相冲约1h,然后以纯乙腈冲及保存.

不同色谱柱的分离机制是不同的.
比如反相柱C4/C18是根据物质的疏水性不同分离的
凝胶柱是根据分子大小不同分离的
离子柱是根据带电性质、数量不同分离的
等等

我没听说过它有分类……
分离原理不就是在高压下,固相和流动相不同的分配细说吗
实用于分离那些吸附性很高,在普通压力下无法分离的

这要看你已经掌握的结构信息了.
如果你只要知道分子量就能判断其结构,那么LC-MS就能解决问题.一般的四级杆MSD提供的分子量在整数位,比较好的飞行时间MSD,可以提供比较精确度分子量.
如果对其结构信息一无所知,那么用多级的MS也许能解决问题,因为可以获取碎片信息.
还有一个办法,用制备色谱（LC或TLC）分离出纯品,这样你就可以用NMR、IR、加上磁质谱,甚至热分析等其他手段来解决了.

可以的,首先进一阵已知对照品溶液的标样,然后进一针被测样品的溶液,看被测样品溶液色谱图中在对照品溶液色谱图主峰保留时间处是否有峰,可以鉴别被测样品中是否含有对照品的成分.
利用液相色谱法的保留时间进行定性,只是定性鉴别的一种手段,要想得到跟进一步的定性,最好还要辅助其他的鉴别手段.

高校液相色谱中,梯度洗脱是指输液泵最少2元以上的,就是至少有2个泵.一般常用的紫外检测器,荧光检测器,蒸发光散射检测器,质谱检测器等都可以用于梯度洗脱.但是对于示差折光检测器是不能用于梯度洗脱的.

1、线性范围广,且线性良好.
2、精密度高
3、相对气相来说,各次进样体积精密度高；
4、内标物不好找啊
antpedia乐意为你效劳各种化学疑问

高效液相色谱仪（美国安捷伦1200系列）配备有UV-VIS（紫外可见吸收光谱）检测器 和 有机酸分析硅胶基质色谱柱（5微米,4毫米X250毫米）
HPLC=High performance liquid chromatograph

这个可说来话长,不知道LZ要分析什么?有机物和无机物都能用HPLC进行分析,不过情况复杂

流动相可改变样品峰保留时间和各组分间分离效果.

常用的色谱分析的方法有外标法、内标法、归一法等.按你所说的情况,用的方法是面积归一法.我就简单的介绍一下面积归一法.面积归一法是测量各杂质峰的面积和色谱图上除溶剂峰以外的总色谱峰面积,计算各杂质峰面积及其...

保留时间:是样品从进入色谱柱到流出色谱柱所需要的时间,不同的物质在不同的色谱柱上以不同的流动相洗脱会有不同的保留时间,因此保留时间是色谱分析法比较重要的参数之一.
保留时间由物质在色谱中的分配系数决定：
Rt = t0(1 + KVs / Vm)
式中Rt表示某物质的保留时间,t0是色谱系统的死时间,即流动相进入色谱柱到流出色谱柱的时间,这个时间由色谱柱的孔隙、流动相的流速等因素决定.K为分配系数,Vs,Vm表示固定相和流动相的体积.这个公式又叫做色谱过程方程,是色谱学最基本的公式之一.