microRNA的提取方法和RNA提取的方法相同么?

逐风的人2022-10-04 11:39:541条回答

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莉莉爱上亮亮 共回答了19个问题 | 采纳率94.7%
因概说原理是一样的,因为提RNA一般指total RNA.但要注意的是很多抽总RNA的方法,包括一些试剂盒,最短组分都在100nt左右.这些方法不针对miRNA,里面的某些步骤会损失大量的miRNA,如果抽提miRNA是为了定量,那肯定是不行了
建议用试剂盒
1年前

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编码237条成熟的miRNA 其中对应了234条单独的 就是有三条是重复的...
microRNA发挥作用后会怎么样
azuremoonlight1年前2
嚣张说话 共回答了17个问题 | 采纳率88.2%
microRNA是体内的microRNA前体转录物经过酶切产生的.microRNA通过与相应的蛋白结合,形成一个“RNA诱导的转录沉默复合体”.该复合体主要有4个作用:1.讲解靶mRNA;2.抑制mRNA的翻译;3.在细胞核内募集组蛋白脱乙酰化酶等因子,沉默DNA的表达;4.扩增相应的microRNA.
以上4个功能,就是microRNA发挥作用的功能,总之,它就是一个调控RNA,负责抑制转录和翻译.
提取出来的microRNA可以在-80°C条件下储存多久不会降解,并且还可以继续RT-pcr
tangdp1年前2
菁葶 共回答了19个问题 | 采纳率94.7%
你是提了总RNA 然后想检测miRNA么 如果是已经用DEPC水溶了 那三周就差不多了 不超过一个月 不然就不准了
microRNA茎环引物设计及RT-PCR
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microRNA的茎环引物可以自己设计吗?是不是线性序列发到公司合成就行?有没人已经做过该实验?microRNA定量时的内参一般选择哪些?在反转录的时候因为内参基因的反转录引物和microRNA不同,那么是跟目标microRNA加到同一个管子一起反转,还是分开反转呢?
许诺丶1年前2
烟渣 共回答了16个问题 | 采纳率100%
microRNA的茎环引物可以自己设计.据说有公司也可以帮忙合成,不过还是自己设计好了发过去比较省钱吧.内参一般是U6,因为它长度和microRNA一样比较短.我做的反转录内参是跟microRNA分开管子转的Real-time quantification of microRNAs by stem–loop RT–PCR 这篇文献上有比较容易看懂的茎环引物的图.也可以看看几篇相关的中文文献都有.
做microrna的pcr需要细胞数量最少多少
黑色麻雀1年前2
朱小柳青 共回答了18个问题 | 采纳率94.4%
我们一般一种细胞要6孔板的3个孔铺满,达到10的7次方左右
帮忙翻译以下摘要(英文)小鼠胸腺细胞和胸腺髓质上皮细胞11种microRNA的表达量比较分析MicroRNA(miRNA
帮忙翻译以下摘要(英文)
小鼠胸腺细胞和胸腺髓质上皮细胞11种microRNA的表达量比较分析
MicroRNA(miRNA)是一类长度为18~25nt的内源性非编码小RNA,由具有发夹结构的约70~90nt大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成。miRNA的表达具有物种保守性、时序性和组织特异性。几个miRNA也可以调节同一个基因,通过几个miRNA的组合来精细调控某个基因的表达。据推测,miRNA调节着人类三分之一的基因。在对miRNA作用机制的研究中,小鼠作为理想模型已经被广泛应用。
在本教研室的前期研究中,我们对不同月龄小鼠胸腺组织内miRNA表达谱进行比较分析。发现随着胸腺老化,小鼠胸腺中不同小鼠miRNA的表达水平会有各自的发展趋势,相对于1月龄的小鼠胸腺,10月龄小鼠和19月龄小鼠胸腺中miRNA表达水平分别有40%和35%下调,同时有60%和65%的上调。但由于miRNA表达具有组织和细胞特异性,而胸腺组织包含多种细胞类型,其中主要以胸腺细胞和胸腺上皮细胞为主。所以有必要对miRNA在这两种细胞中的表达量进行比较分析。根据前期研究芯片分析中的发现,筛选出月龄分析中差异表达较大的前11个小鼠miRNA(mmu-miR-125b-5p、mmu-miR-181b-5p、mmu-miR-let-7c-5p、mmu-miR-195a-5p、mmu-miR-128-3p、mmu-miR-148a-3p、mmu-miR-29b-3p、mmu-miR-181a-5p、mmu-miR-142-5p、mmu-miR-205-5p、mmu-miR-451a)作为观察对象,采用1月龄小鼠胸腺的胸腺细胞株以及小鼠胸腺髓质上皮细胞株作为实验材料,利用实时荧光定量PCR测定这11个小鼠miRNA在胸腺细胞和胸腺髓质上皮细胞的初始浓度来经行对比分析。
荧光定量PCR结果表明所观察11个小鼠miRNA中:mmu-miR-195a-5p、mmu-miR-29b-3p、mmu-miR-let-7c-5p、mmu-miR-125b-5p和mmu-miR-148a-3p在胸腺髓质上皮细胞内高表达;mmu-miR-451a在胸腺细胞和胸腺髓质上皮细胞内表达量都极低或不表达;mmu-miR-205-5p只在胸腺髓质上皮细胞内表达,在胸腺细胞内表达量极低或不表达。
zufangmao1年前1
champagnebb 共回答了23个问题 | 采纳率82.6%
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烨枫7777 共回答了13个问题 | 采纳率100%
miRNA mimics是针对miRNA的成熟体设计并合成的小片段双链miRNA
麻烦问一下,MicroRNA的转录时指哪个过程?.
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恺撒1205 共回答了18个问题 | 采纳率94.4%
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请各位大牛相助.可不可以用原位杂交?可以的话怎么查用什么抗体啊?
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周孟 共回答了18个问题 | 采纳率94.4%
可以用原位杂交 不是抗体 是那个miRNA的探针
如果闲麻烦就提RNA反转录了用real time检测miRNA的表达量
我最近想设计茎环结构的引物克隆MicroRNA,但不知我发给引物公司的单链引物,在我试验时是自动形成茎环结构,还是要在引
我最近想设计茎环结构的引物克隆MicroRNA,但不知我发给引物公司的单链引物,在我试验时是自动形成茎环结构,还是要在引物合成后进行相关的处理才会形成茎环.
此引物是做miRNA逆转录用的,不需要变性。
阿拉小思1年前1
jiangweichu 共回答了24个问题 | 采纳率91.7%
就问题本身而言,引物合成回来是固体粉末,你把它溶于水中,再做一步变性退火就行了(不过由于是hairpin,形成二聚体的可能性也很大,这个似乎不可避免).
另外我不太明白为什么要用hairpin的引物?在pri-miRNA甚至pre-miRNA的两臂上设计引物,都可以PCR出miRNA片段.不知兄弟为何要设计hairpin引物?怎样的“克隆miRNA”,能否稍微详细的介绍一下实验思路?大家一起讨论.
看了你的原理图,大概明白了,其实就是用RT-PCR检测样品中某微量miRNA的含量,差不多吧?
我个人意见是,如果你引物序列没问题,它自己在实验时就会形成hairpin.不用预先把引物变成hairpin的理由有二.
1、实验的第一步,应是在样品中加入你的引物,准备退火.但退火之前必然有一个95度变性,然后退火.否则,样品中的miRNA可能有二级结构,不能以单链形式与你的引物互补,那就检测不到了.
既然有高温变性,那么你之前把引物退火形成hairpin就没意义了,因为在这一步同样会打开.
2、退一步讲,即使不形成hairpin,对实验的影响也不大.因为你的目的是通过引物的3'长臂端与miRNA互补,然后延伸,探针检测延伸出来的片段(绿色部分).那么即使红色片段为线性,不是hairpin,只要序列没有问题,同样可以进行延伸的步骤,对你之后的PCR也没有太大影响(可能有错配的问题,看你引物设计的情况了).既然整个实验红色引物是否是hairpin都没什么关系,又何必之前非要把它变成hairpin呢?
根据你的补充:
我不同意你的意见,我个人认为引物需要变性.引物中如果有茎环结构,那么必然有形成二聚体的可能,只不过根据你loop和stem的序列长短有难易区别而已.而且底物是必须要变性的,所以保险起见都是把引物加入到底物中,然后一起变性,然后退火.
实验之前预先把它变成茎环没有意义,而且也不能保证确定能形成茎环.必然会同时形成引物二聚体的形式,会影响实验效率.
欢迎讨论,祝实验顺利=)
先用PCR裂解液裂解细胞,再将细胞放入-80℃冷冻保存,以此积累细胞数量.冷冻对PCR测MicroRNA结果有影响吗
只羡鸳鸯3711年前1
远古的呼唤 共回答了21个问题 | 采纳率95.2%
没有影响
谁知道microRNA芯片、microRNA测序和基因表达谱芯片区别,具体些,
pocky52521年前1
该i飞机 共回答了25个问题 | 采纳率96%
microRNA芯片和基因表达谱芯片都是芯片.
芯片指样本荧光染色杂交到芯片上,通过各个点亮度差异来判断表达差异的方法.
区别是一个针对microRNA,微小RNA.另一个针对mRNA,信使RNA.
microRNA测序区别于芯片分析方法.直接测出小片段的序列然后用生物统计方法合并区段等最终计算出表达差异.
microRNA芯片与microRNA测序是用不同平台研究同样的问题.
microRNA的分子量大概为多少?
联想哈哈1年前1
2222yuchi 共回答了16个问题 | 采纳率87.5%
  MicroRNA (miRNA) 是一类由内源基因编码的长度约为22 个核苷酸的非编码单链RNA 分子,一个核苷酸的分子量大约为330,22个核苷酸就是7260,合7.2kD.
分子生物学初步,有关microRNA的
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书上说microRNA由基因组DNA非编码区转录,长度约22nt
请问非编码区不是不转录吗?还有22nt是说什么意思?22个核苷酸大小?
酸酸酸酸酸1年前4
小沾工 共回答了24个问题 | 采纳率91.7%
分编码区和非编码区是按照是否编码蛋白质来分的,也有不编码蛋白质却也转录的区域,这就是非编码区的转录.
在mRNA中,除了编码区以外,在5'段和3'端还有非编码区;当然tRNA、rRNA、miRNA等都是非编码区转录的.
22nt就是22个核苷酸的大小,nt:Nucleotide
miRNA(就是microRNA哈)其实是很长的,不止22个nt,但是它主要的作用片段是22个nt左右.在miRNA首先转录的时候,是形成pri-miRNA,然后经过剪切形成pre-miRNA,最后才成熟为miRNA,作为细胞内源性的小干扰片段,调节多个代谢途径.(当然也有行为诡异的,略过不提.在大学学习中不需要掌握这么具体的内容,你就当课外知识来看吧~)
哪里可以代做MicroRNA实时定量PCR检测?
zcgg1234561年前1
rich7588 共回答了20个问题 | 采纳率90%
你可以联找威斯腾生物,把你的实验内容和要求告诉他们,那边会给你设计分析,公司质量和服务都很不错.
细胞总rna包括microrna吗
Darren1年前1
龙龙傲天 共回答了14个问题 | 采纳率85.7%
包括,但是提取rRNA,mRNA的步骤和提取小分子RNA的有点差别.
如何敲除microRNA
paleblue20001年前1
200502 共回答了17个问题 | 采纳率100%
敲除microRNA?
好吧.3个方案:
1、对转录microRNA前体转录物的基因做敲除.
2、诱导Dicer 酶突变,去除该酶活性.
3、利用与microRNA前体转录物基因一致的dsRNA,导入细胞,沉默该microRNA前体转录物基因的表达.

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