荧光定量PCR问题荧光定量PCR设的引物260bp可以用吗?师姐他们说最好在100--150之间.

荧光定量PCR 标准曲线在做某个基因的标准曲线的时候,来自两个不同品种的同一个基因的标准曲线需要做两次的标准曲线吗?如果

荧光定量PCR 标准曲线
在做某个基因的标准曲线的时候,来自两个不同品种的同一个基因的标准曲线需要做两次的标准曲线吗?如果只用其中的一个去分析两个品种的数据会有什么影响?

梦想成真20071年前1

ygx2009 共回答了30个问题 | 采纳率90%

具体情况要看你做的这个基因在两个物种中的同源性.如果同源性很高,可以用同一对引物,同一条探针的话,那我们就认为它在realtimePCR中的扩增效率是一样的,标准曲线只要做一次就行了,对数据分析不会有影响

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荧光定量PCR引物为什么要跨内含子设计,大家都说是为了避免提RNA时残留基因组的干扰,但是即使跨了内含子,假如有基因组残

荧光定量PCR引物为什么要跨内含子设计,大家都说是为了避免提RNA时残留基因组的干扰,但是即使跨了内含子,假如有基因组残留,Real time PCR中还是能P出比cDNA大的一条带（含内含子的条带）,探针同样会结合这条大的片段,不会只结合小的片段,还是会干扰定量,除非引物只能扩增cDNA,不能扩增基因组,那就不存在基因组的干扰了.很困惑,请各位指教.

wwwwandy1年前2

kt308bwsgracdnj 共回答了23个问题 | 采纳率87%

引物若跨内含子的话,引物仅能以3'端的一小部分结合基因组DNA,这样的话Tm会很低.在较高的退火温度下,引物几乎无法和基因组DNA结合来引发聚合,而主要是与能够完全配对的cDNA结合并引发反应.

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定量pcr CT请问做荧光定量PCR时,CT值的结果在30左右,而不是20-25之间,这样的结果可信吗

dusbk1年前1

puppetwj 共回答了14个问题 | 采纳率85.7%

请问你做Real Time PCR做几个循环的?40个吗?40个循环的话,CT值在30左右很正常的啊,CT值30的话大概是10000copies,
说明模板含量低嘛,定量定量就是要CT值有大有小的才有比较嘛

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荧光定量PCR中分子信标技术的原理?

荧光定量PCR中分子信标技术的原理?
fgege

wuliangtai1年前1

此物最相思风雨中 共回答了14个问题 | 采纳率92.9%

分子信标是一段呈茎环结构的寡核苷酸探针,中间的环序列与目标核酸序列互补,茎的两端分别连的荧光分子和猝灭分子,如下图：
当无目标核酸序列时,荧光分子和猝灭分子距离近,荧光分子发出的能量被猝灭分子吸收并以热能消耗,不发荧光；当有目标核酸序列时,中间的环序列与目标核酸序列结合,荧光分子和猝灭分子距离远,此刻猝灭分子不能吸收荧光分子的能量,可以检测到荧光.
大概原理就这样,分子信标技术属于RT-PCR中的荧光探针,详细的原理和技术应用变化找几篇文献看看吧.
觉得可以别忘了给最佳答案哈,还有疑问就追问或者百度HI我,都OK!

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帮我分析HBV-DAN检测结果为：乙型肝炎病毒DNA荧光定量PCR检测结果是3.670E+05:参考值是(0-1000I

帮我分析HBV-DAN检测结果为：乙型肝炎病毒DNA荧光定量PCR检测结果是3.670E+05:参考值是(0-1000IU/ML)?

小傻至极1年前1

香小蝶 共回答了16个问题 | 采纳率75%

意思是数量是3.67乘以10的5次方

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荧光定量PCR检测HCV-RNA 参考值（1*10⌒3 IU/mL).结果（2.14*10⌒7）

gj123root1年前2

千年zz僧挥精如土 共回答了14个问题 | 采纳率92.9%

检测结果表示丙型肝炎病毒携带

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HBV-DNA荧光定量PCR检测

未激活2211年前1

italiabello 共回答了23个问题 | 采纳率87%

小于10的3次方表示你的体内的病毒少,控制的比较好,10^4、10^5、10^6、10^7越高越不好.常规药：阿德福韦,拉美夫定,还有新出来的.荧光PCR定量是以10^4、10^5、10^6、10^7标曲标准来定你曲线的CT,或者来判断你用药前后的“病毒载量”,以这个依据来给临床医生安排用药.

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请教 做染料法荧光定量PCR,熔解曲线分析,如何区分目的基因产物和引物二聚体呢?

请教 做染料法荧光定量PCR,熔解曲线分析,如何区分目的基因产物和引物二聚体呢?
是不是一般峰比较高的那个就是目的基因产物了?

小驴宝宝1年前3

hongxiaoyu1986 共回答了22个问题 | 采纳率86.4%

你要重新设计引物了 有引物2具体有好几个峰,谁也不知道是哪个,是产物的话主要看溶解温度,溶解温度高一般是产物.建议重新设计引物,重做梯度PRC 电泳分析.

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荧光定量PCR问题您好,我最近在做qpcr,我做的是一个基因在不同组织中的表达,用相对定量的方法,我想请问一下用spss

荧光定量PCR问题
您好,我最近在做qpcr,我做的是一个基因在不同组织中的表达,用相对定量的方法,我想请问一下用spss进行数据分析时是用2-delter delter值输入进去进行方差分析吗,实验重复了三次,我是取每次算一个值还是先将CT值平均最后再算2-delter delter值呢?还是我需要做3次实验,每次每个组织重复三次,取平均后得到2-delter delter值,用三次实验得出的值（3个）做方差分析呢?最近在进行分析不是很懂,
另外,能否麻烦老师把您的Rapid and direct quantitative RT-PCR method to measure promoter activity.这篇文章发给我吗?我邮箱wenjiezhu08@163.com.

美乡的醉梦者1年前1

小楼一夜听春雨P 共回答了22个问题 | 采纳率81.8%

应该是用每个样本算出的基因表达的相对量来做统计分析.用2-delter delter值也不能说错,不过感觉很怪.简单的组间分析,用不着用SPSS吧.Excel就全部搞定了.
你应该是做三次实验,至于每次试验重复几次完全取决于你自己.如果样本加样,PCR反应的误差很大,建议多重复几次.不然2次就完全够了.主要是看有无系统误差.我的那个文章要的人很多,我发到百度文库了.就不再一一发email了.

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反转录PCR和荧光定量PCR很纠结的问题.我想做一个基因的表达量定量.之前认为是先提取RNA,然后反转录,然后做荧光定量

反转录PCR和荧光定量PCR
很纠结的问题.
我想做一个基因的表达量定量.
之前认为是先提取RNA,然后反转录,然后做荧光定量.
现在发现貌似反转录PCR也是可以做定量的,请问是不是这样?
这两个怎么都叫RT-PCR.我纠结死了.那要是做荧光定量的话是不是就不需要单独的做反转录PCR了.
不要贴这种段子行不。

xuna_momo1年前3

碧海微澜AAA 共回答了20个问题 | 采纳率90%

一个是RT-pcr,reverse transcription pcr的简写
一个是real-time,一般不会简化为“rt-pcr”,又称实时定量pcr,Q-pcr,应该就是你说得荧光定量
而你要测mRNA的量,就是先反转录成cDNA,再作定量pcr,就是前两者的合,常称为qRT-PCR
有很多real-time的试剂盒,你可以网上看下说明书

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荧光定量PCR的前试验准备及流程

荧光定量PCR的前试验准备及流程
首先是获取菌体,再提总RNA,然后分离mRNA,之后进行RT-PCR,还是可以直接进行荧光定量PCR呢?

抱着粉红猴子唱歌1年前4

风籁 共回答了22个问题 | 采纳率95.5%

首先是获取菌体,再提总RNA,不用再分离mRNA,直接做反转录RT-PCR,得到cDNA后直接进行荧光定量PCR.
得到的得到cDNA可以保存的时间比较长.这样荧光定量PCR就可以集中一起做.

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求荧光定量PCR高手原来好好的,突然坏了,找不到原因,求有经验的高手指教.用的是Taqman探针法,原先已摸索好条件,做

求荧光定量PCR高手
原来好好的,突然坏了,找不到原因,求有经验的高手指教.
用的是Taqman探针法,原先已摸索好条件,做好了质粒的标准曲线,E都在98%--102%之间,R2都在0.99以上.已用做好的标准质粒检测了几天样品了.这两天做的时候突然坏了,E变得很大、R2也乱七八糟的了.重新稀释了质粒标准品,换了试剂盒,也还是不行.可能是什么原因呢?

flyfox-041年前4

怡然自乐2000 共回答了22个问题 | 采纳率86.4%

不是你的质粒问题就是你的引物、探针的问题
可能是引物或探针降解了

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southern杂交与荧光定量PCR鉴定拷贝数的优缺点是什么?

southern杂交与荧光定量PCR鉴定拷贝数的优缺点是什么?
鉴 定植物基因的拷贝数,southern是不是不是很可靠,具体体现在哪一方面?

cbpeb1年前2

hesue 共回答了19个问题 | 采纳率89.5%

Southern 的结果最后是体现在胶片,或者是膜上,能看到深浅不一的条带,但是这种条带如果进行胶片曝光的话,很容易过曝,也就是条带的深浅并不能精确反应具体的拷贝数.所以只能选择拷贝数已知的样品作为对照,根据最后的条带灰度判断有可能的拷贝数,但是这个数量并不精确.
荧光定量PCR,如果能够找到拷贝数已知的样品,用此样品做标准曲线,就可以相应计算出,样品中具体的拷贝数,准确度要高很多,相应实验操作也要比southern简单得多,就是要控制好实验的重复性.

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谁能具体解释一下荧光定量PCR中溶解曲线的意思以及作用?

suzi12341年前1

pontific 共回答了22个问题 | 采纳率90.9%

用Syber Green方法做完PCR后,用来判断产物是否相对专一.反应结束后,逐渐加温.和Syber Green分子结合的PCR产物随温度升高逐渐变为单链,就不能在和Syber Green结合.一般每加温一度,读一次信号.当温度到达PCR产物的Tm时,产物解离一下增多.曲线的横坐标是温度,而纵坐标是荧光信号的变化!开始加热,信号变化不大,所以几乎是平的,接近Tm时,突然变化加大,所以出现峰值.再升温,产物全部解离,就又是一条直线了.
如果有非特异性产物,在加热过程中就会出现一些比较矮,宽的峰.

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哪家做生物技术服务,荧光定量PCR,RT-PCR、蛋白表达与纯化、Western blot等,服务态度好,性价比高?

乔杜里1年前5

远方响动了胡笳 共回答了14个问题 | 采纳率85.7%

上海以琳生物技术有限公司是一家致力于为客户提供专业、优质、高效的生物医药技术服务的CRO公司,公司整合多方面资源,利用分子和细胞生物学、转基因动物模型、生物芯片、新药筛选、药效药理和安全性评价等多个专业技术服务平台,为客户提供科学研究和技术解决方案,提供从实验设计、实验实施、结果整理、数据分析到策略咨询等整体或分项服务.
公司提供荧光定量PCR,RT-PCR、蛋白表达与纯化、Western blot等分子生物学技术服务及细胞生物学服务等!

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荧光定量PCR 溶解曲线与什么有关

荧光定量PCR 溶解曲线与什么有关
与产物片段大小有关还是与引物的溶解温度有关

zmc3051年前3

徘徊在这里 共回答了16个问题 | 采纳率81.3%

荧光定量PCR 溶解曲线是验证有无非特异性扩增的,
与引物的溶解温度有关

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在荧光定量PCR中,如何由已知浓度和分子量的模板,求出拷贝数?

在荧光定量PCR中,如何由已知浓度和分子量的模板,求出拷贝数?
有浓度为1ug/ul的质粒A1,长度5000bp,其拷贝数为多少

haojudnfang1年前2

jia8881 共回答了15个问题 | 采纳率93.3%

http://www.uri.edu/research/gsc/resources/cndna.html试试这个网站,很不错的.直接给你算出来

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荧光定量pcr检测报告 HBV DNA的检验结果3.68乘以10的7次方.但是检验肝功能却是正常,请问问题严重吗?

荧光定量pcr检测报告 HBV DNA的检验结果3.68乘以10的7次方.但是检验肝功能却是正常,请问问题严重吗?
这个结果的小孩今年才十五岁.希望好心的朋友给我一点主张.谢谢了!

marchapply1年前1

fengwujiutian1 共回答了24个问题 | 采纳率95.8%

而且他经检验是大三阳.

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荧光定量PCR的Tapman 探针引物怎么设计

zhuthreetwoone1年前2

白雨木暮 共回答了27个问题 | 采纳率77.8%

这个不同的基因Taqman的探针不一样,它不是通用的,是专一性的,是某个基因的某段序列.然后你选一段小的位置来做为探针,两端分别加上发光基团与淬灭基团,正常情况下他们不发出信号,在PCR扩增的时候他就会自己结合到目的...

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HBV-DNA荧光定量PCR检验报告

HBV-DNA荧光定量PCR检验报告
荧光定量pcr检测报告 HBV DNA的检验结果1.49乘10的7次方.是什么情况?

一村无剑1年前2

wolkwoman 共回答了15个问题 | 采纳率80%

小于标准值就算正常,标准值一般写着呢啊.至于高的话,多少就算不好,多少算还可以,其实无所谓,指标就是那么回事,还在调养

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荧光定量PCR引物设计为什么要在100-200bp之间

赤火情深1年前3

水中仙80 共回答了14个问题 | 采纳率100%

楼主说的是扩增子,即两引物目标位点之间的序列长度.PCR过程中,扩增就跟修路一样,越长越费工.在能够保证特异性的情况下,当然是越短越有效率,100-200bp就是综合两方面的考虑而建议的最佳扩增子长度吧.其实有的人会说50-250bp,这跟各人经验和具体实验条件有关.

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做荧光定量PCR前要做总RNA定量吗

fayjia06011年前3

do_it_better26 共回答了26个问题 | 采纳率92.3%

在逆转录之前必须要检测总RNA浓度：1、为下一步逆转录加入总RNA的量提供依据.2、通过260/280比值判定提取的总RNA纯度.

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荧光定量pcr taqman探针设计 takara怎么样

mian31年前2

独在花下 共回答了17个问题 | 采纳率94.1%

是个好办法

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哪家做生物技术服务,RT-PCR和荧光定量PCR服务态度好,性价比高?求推荐

qinjiaxian1年前2

暗神虚影 共回答了17个问题 | 采纳率88.2%

你要做的实验其实不难,如果不会可以咨询有的生物技术公司,他们一般还是愿意帮忙的,我以前有什么不会都是咨询威斯腾,他们是做实验外包的,我没给他实验做,但是去咨询技术问题,他也愿意帮我解答,你可以试试!

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在荧光定量PCR中,FRET原理是什么?

阿弥陀佛536331年前1

凉山的魂 共回答了15个问题 | 采纳率86.7%

FRET在FQ·PCR荧光检测中的应用
看了这篇文章就了解了

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请问,荧光定量PCR的两个曲线感觉都是正常的,怎么跑SDS-page胶却出现双带呢?而荧光曲线不正常跑胶却正常

请问,荧光定量PCR的两个曲线感觉都是正常的,怎么跑SDS-page胶却出现双带呢?而荧光曲线不正常跑胶却正常
我用Trizol和氯仿手提人血清miRNA先反转,然后做Realtime PCR..然后跑2%的DNA胶.目的DNA长度大概是20~50bp.有什么可能的原因吗?

timmy_cat1年前2

RockyWoo 共回答了26个问题 | 采纳率92.3%

一楼没有做过 miRNA,先不要理他.
楼主的做法我并没有做过,因为我使用的是Tagman试剂盒带有特异性探针,所以并无特异性问题.
我理解楼主的意思是：
1505及1489曲线不正常,1505条带正常,1489条带不正常
659与1491曲线正常,但是两个条带都不正常
我的意见如下：
1.楼主的引物是自己设计的吗?目标只有二十多碱基,哪里来的特异性?
2.楼主的反转用的什么引物?
3.楼主的样本是否含有DNA?有检查过DNA消化干净了吗?

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荧光定量PCR的引物如何设计..

荧光定量PCR的引物如何设计..
新手想问一下...做几个基因的定量.然后这几个基因的序列似乎没有,只在相近物种中的序列已经测过了..
..需要先做什么测序么

我爱肖艾1年前3

莠x 共回答了16个问题 | 采纳率100%

如果你测定的基因序列未知,可以用同源基因或者别的物种的同类基因序列来设计引物,进行PCR,看看是否能够扩增出产物,并对产物进行确认,判断扩增的特异性.
如果确认无误,就可以进行荧光定量PCR.

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肿瘤细胞RNA提取不出来?我是想提取RNA,然后在反转录,最后做荧光定量PCR.我用的标本是Hep-2喉癌细胞株,试剂盒

肿瘤细胞RNA提取不出来?
我是想提取RNA,然后在反转录,最后做荧光定量PCR.我用的标本是Hep-2喉癌细胞株,试剂盒是Biomiga_EZgeneTM Biozol RNA kit,每次收集50ml培养瓶里面的细胞,但是总是提取不出来RNA,条带上面也没有,郁闷之极,

solor20001年前2

东碟西读 共回答了20个问题 | 采纳率90%

那只能说是你手法问题了.这种细胞系RNA很好提的 别用试剂盒了 买个TRIZOL直接提吧 6孔板的一个孔就够了

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荧光定量pcr多长时间出结果

fkxmz1年前2

cuiguyouju 共回答了20个问题 | 采纳率95%

荧光定量我用罗氏的反应速度算是相当快的,在样本处理（提出核酸）后,放在荧光定量PCR仪器上一般需要30分钟~1小时左右.但是如果你的样本比如支原体的含量非常高,可能在没有运行结束已经可以看出结果了,但是如果说5分钟就出结果了,确实太快了点.

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荧光定量PCR(探针法)实验出现问题,通常需要进行哪些数据核查,从而判断可能的原因?

我用群kk1年前1

丫头与老头 共回答了24个问题 | 采纳率95.8%

1,检查引物探针的特异性等
2.检查所用模板质量
数据核查的话主要看你所测得的数据是否跟你的理想状态差距很大,或数据是否符合常理.
再就是看数据得看下相关系数和扩增效率
.

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相对荧光定量PCR中,2（-ΔΔCt）是怎么回事?

相对荧光定量PCR中,2（-ΔΔCt）是怎么回事?
比如我用T基因为内参,得到了耐药菌A、B、C基因的Ct值的均值和敏感菌的A、B、C基因的Ct值的均值,怎么比较耐药株和敏感株这三个基因表达量有没有差异呢?

bbyam1年前1

k31063 共回答了18个问题 | 采纳率94.4%

耐药菌A,B,C的ct值分别先减去它们各自的内参基因T的ct值,这是ΔCt1,敏感菌的也一样,得到ΔCt2,用ΔCt1-ΔCt2就是ΔΔCt,然后求负倒数就是2（-ΔΔCt）了,这个数值就是你耐药菌和敏感菌不同基因的表达量差异倍数

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本人做荧光定量PCR,对照基因怎么弄啊,计划对照基因是GAPDH,能帮忙弄个序列么

静水流深_19831年前1

blxlhao 共回答了17个问题 | 采纳率94.1%

人的么?
Forward primer AGAAGGCTGGGGCTCATTTG 20 54.41 55.00%
Reverse primer AGGGGCCATCCACAGTCTTC 20 55.59 60.00%

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荧光定量PCR引物设计本人在做荧光定量PCR之前,先用Primer 3.0设计了目的基因的引物,用于半定量PCR,而且也

荧光定量PCR引物设计
本人在做荧光定量PCR之前,先用Primer 3.0设计了目的基因的引物,用于半定量PCR,而且也把引物放入NCBI中进行了blast比对,得到引物为特异性引物,半定量PCR效果也跟预期一样,电泳仅出现目的带,接着我准备用sybr green 做荧光定量PCR,不知道可不可以就用我现在设计的这个引物去做?因为目的基因是多基因家族,所以在设计引物时我是在3非翻译区设计的引物,不知道荧光定量PCR中,此引物还可不可以用?

christd1年前3

寄生人11 共回答了23个问题 | 采纳率95.7%

完全可以,PCR长度从50bp到数百都可以,不止局限于150-300个碱基对.楼上说的有道理,但是有一点要注意,最好计算一下扩增片段的Tm值,这样做溶解曲线的时候,光有一个峰还不够,而且得到的TM和你计算的Tm相吻合才行.
是否在翻译区没有影响.

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为什么荧光定量PCR产物长度最好不要超过300bp?

为什么荧光定量PCR产物长度最好不要超过300bp?
产物越长一次循环激发的荧光就越多，达到荧光阈值需要的循环数就越少，那么CT值应该是出现过早吧？

uu收购站1年前1

黑色米米 共回答了21个问题 | 采纳率90.5%

会使得CT值出现过晚,一般采用80-150bp的产物长度.

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[QPCR,荧光定量PCR,实时定时PCR,求助]QPCR的时候为什么用Sybgreen跑出的带不是很准确?直接胶里面加

[QPCR,荧光定量PCR,实时定时PCR,求助]QPCR的时候为什么用Sybgreen跑出的带不是很准确?直接胶里面加EB条带是正确的?

joyful13141年前2

lcg44844 共回答了22个问题 | 采纳率86.4%

你也可以找公司做的了,方便又省事,[威斯腾生物]就不错

1年前查看全部

普通的RT-PCR 和荧光定量PCR,在反转录这一步是不是一样的?

普通的RT-PCR 和荧光定量PCR,在反转录这一步是不是一样的?
我买的是普通的反转录试剂盒,是不是再增加一个做荧光定量PCR的PCR那一部分就可以了?

ly11011年前4

TTMM841009 共回答了21个问题 | 采纳率90.5%

北京基诺莱普实时荧光定量PCR检测专家.
普通的RT反应跟QPCR的RT反应是一样的,没有区别,只要你在后续试验中加入含SYBR的MIX就可以了.

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细胞IP3水平能用荧光定量PCR检测么

siyuxiang1年前1

宁儿贝贝 共回答了15个问题 | 采纳率86.7%

三磷酸肌醇是水解产生的,不是基因直接表达产生的,不能用荧光定量PCR,应该用ELISA检测

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荧光定量PCR绘制溶解曲线应该从多少度开始?

wolfbox1年前1

erkunchong 共回答了21个问题 | 采纳率90.5%

实时PCR产物的Tm值大小一般会在80°上下,所以溶解曲线不必从40°开始,可以从65°开始进行溶解曲线绘制,另外在产物之前出现的小峰,同时也在阴性对照中出现了,应该是引物二聚体或者是非特异的扩增.

1年前查看全部

您好,我想问一下荧光定量PCR产物的溶解曲线中Tm值在92度左右可以吗?是不是在86-88度之间最好?

pppgjj1年前1

往事如风808 共回答了11个问题 | 采纳率81.8%

这个是可以的.根据扩增产物GC含量的不同,TM有可能很高.只要解离曲线有一个很锐的峰,就没有问题.我以前为了提高特异性,专门设计过高TM值的引物.

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荧光定量pcr时,那个荧光染料是不是先配成混合mix

你给的一切1年前1

liubao_07 共回答了19个问题 | 采纳率84.2%

一种新定量试验技术,它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行... 轻弹管底将溶液混合,6000rpm短暂离心. ②混合液在加入逆转录酶MMLV 之前先...

1年前查看全部

做荧光定量PCR,同样的样品为什么有的孔有条带有的没有

永远的菊树1年前3

gbbygb 共回答了17个问题 | 采纳率88.2%

你做3个重复是吗?我也经常见到这样的,一般来说我不会管没有条带的空,因为表达量低的话,没扩增出条带也属正常,PCR扩增起来也有随机性的,一个重复扩增不出来也不怎么影响结果

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做荧光定量PCR的时候,是不是所有的样品都必须做三个平行?做两个可以吗?

十三02191年前2

cynthia927 共回答了17个问题 | 采纳率94.1%

你如果做三个以后发现高度一致,可以考虑减少到做两个.
其实冒这种风险不太划算,因为做两个如果差异太大则这个数据点废弃,可能导致整套数据不完整,损失更大.
是否一致同你的移液技术以及反应系统的各种试剂有关.所以每换一对引物要重新检查一致性.

1年前查看全部

荧光定量PCR一定要用管家基因么?我的细胞5个孔药物浓度分别是 0（0.5%FBS的）、 20uM 、 40uM 、 6

荧光定量PCR一定要用管家基因么?我的细胞5个孔药物浓度分别是 0（0.5%FBS的）、 20uM 、 40uM 、 60uM 、 0（10%FBS的）、 都是双复孔的.那最终加在荧光定量PCR仪中需要 加那些体系?标准品梯度的体系还有上面的五个cDNA?管家基因体系是怎么加的?

流浪的确红舞鞋1年前1

旅行2008 共回答了14个问题 | 采纳率100%

管家基因是用来做对照的,它表达量恒定,这样你可以通过比较它和你的基因,做出标准化的数值,所有定量必须带有管家基因才能排除干扰.

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您好,我想问一下荧光定量PCR产物的溶解曲线的Tm值在92度可以吗?是不是在86-88度之间最好?

tuboshulq1年前2

关洛男儿 共回答了22个问题 | 采纳率95.5%

这个不是绝对的,只是大多数RT-PCR产物的TM值会落在那个范围内,有些目的片段很长的产物有可能会稍微大一点.这跟目的片段长度有关系.主要看产物是否为单一峰,是否有杂峰.

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请问：做荧光定量PCR时,△△Ct值是什么意思,它的计算公式是什么?

bohem1年前1

灰暗的心灵 共回答了18个问题 | 采纳率100%

△△Ct = △Ct(试验样品) — △Ct(基准样品)
△Ct(试验样品) = Ct（试验样品,目的基因） — Ct（试验样品,内参基因）
△Ct(基准样品) = Ct（基准样品,目的基因） — Ct（基准样品,内参基因）
2 －△△Ct =2 －（－1.2）= 2.30

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我要做荧光定量PCR,测细胞因子mRNA,要测三种因子,是否是把三种引物和内参基因引物分别加入到四个体系中

duanxingrong1年前1

cgr2008 共回答了13个问题 | 采纳率84.6%

是的,你需要用等量体系分别用每对引物进行PCR.
实际操作时,我们要求至少3份biologic replica,用来检测你所测到的表达变化确实是因为实验组与对照组之间的差别.同时这3份biologic replica需要2份technical replica,以确认差异不是由于具体实验操作过程的失误产生的.

1年前查看全部

哪里有不用DNA酶消化、无毒、20分钟直接用于荧光定量PCR的RNA提取试剂盒卖,之前听说过,现在想用时忘记了

聆听音乐88991年前3

ljh521 共回答了19个问题 | 采纳率84.2%

北京艾德莱生物科技有限公司生产
可直接用于荧光定量PCR的RNA提取试剂盒RN28 EASYspin Plus 组织/细胞RNA快速提取试剂盒
我也是听说的 没有用过

1年前查看全部

荧光定量pcr标准曲线横坐标和纵坐标分别表示啥意思

zhf2004031年前1

三条腿的蛤蟆蹦跶 共回答了23个问题 | 采纳率95.7%

坐标分表为CT值和已知的标准品的拷贝数目.不限定哪个是横坐标,哪个是纵坐标.看各人习惯了.
如果没有标明,可以根据数值的大小看出来:CT 值一般在0-40之间,而拷贝数则为好几千,好几万的大数字

1年前查看全部

荧光定量PCR RT-PCR荧光定量PCR和RT-PCR是一回事吗?若不是,它们之间有什么区别?谢谢!

邪kk1年前1

普通用户普通用户 共回答了17个问题 | 采纳率88.2%

RT可能含义：
reverse transcribe 是逆转录,那么相应pcr应该是由rna凡转录cdna过程
real time 实时定量 那么就是荧光定量pcr了

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