pET28中卡那霉素抗性基因的启动子是什么?哪一段序列?

那要看卡那霉素酶和氯霉素酶的氨基酸序列了.

那要看GUS基因的表达产物在曲霉中是否有原始存在,如果有就不能证明转化成功,如果没有则基本可以确定转化成功;
另外还要看在卡那霉素培养基上是否存活;
只是推测不知道对不对

解题思路：据图分析，A过程是目的基因与运载体结合形成重组质粒的过程，这一过程需要限制性内切酶以及DNA连接酶；基因工程中作为运载体的基本要求包括：①能在宿主细胞中复制并稳定地保存；②具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接；③具有某些标记基因，便于进行筛选；B过程表示选择培养；C过程表示诱导产生愈伤组织，E过程表示再分化．

（1）基因表达载体的构建过程：首先用同一种限制酶切割目的基因和质粒，然后再用DNA连接酶把目的基因和运载体质粒连接成重组质粒．
（2）B过程是培养并选择含有重组质粒的土壤农杆菌，其中“选择”体现了质粒作为运载体必须具备具有标记基因；“培养”体现了质粒作为运载体必须能在宿主细胞中复制并稳定保存．
（3）要把重组质粒导入土壤农杆菌，需先用 氯化钙溶液处理土壤农杆菌，使土壤农杆菌转变为 感受态 态；含有重组质粒的土壤农杆菌侵染离体棉花叶片组织后，将离体棉花叶片组织培养成再生植株要经过[C]脱分化 和[E]再分化．为了筛选出含有目的基因的细胞．C过程为诱导选择，既要诱导出愈伤组织还要进行筛选，筛选出被含重组质粒的农杆菌侵染的叶片细胞，淘汰掉普通细胞，故应添加卡那霉素．
（4）后代中抗卡那霉素型与卡那霉素敏感型的数量比为1：1，说明此杂交方式为测交，抗卡那霉素型为显性杂合体（Aa），卡那霉素敏感型为隐性纯合子（aa），杂交后代表现型抗卡那霉素型与卡那霉素敏感型的数量比为1：1．抗卡那霉素型植株是显性杂合体（Aa），该类型植株自交，即Aa×Aa，后代性状分离比是抗卡那霉素型：卡那霉素敏感型=3：1．
故答案为：
（1）限制酶、DNA连接酶
（2）具有标记基因 能在宿主细胞中复制并稳定保存
（1）氯化钙溶液 感受态 脱分化 再分化 卡那霉素
（3）3：1

点评：
本题考点： 基因工程的应用．

考点点评： 本题结合获得抗虫棉的技术流程图，综合考查基因工程、植物组织培养和基因的分离定律，意在考查考生的识记能力、理解应用能力和计算能力，有一定难度．

解题思路：根据题意和图示分析可知：首先采用基因工程技术将抗虫基因导入离体棉花叶片组织，其过程为：获取目的基因（抗虫基因）→构建基因表达载体→将目的基因导入农杆菌→用含有卡那霉素的选择培养基筛选含有重组质粒的土壤农杆菌→利用农杆菌转化法将目的基因导入离体棉花叶片组织细胞．
其次采用植物组织培养技术，将导入抗虫基因的细胞培养成转基因抗虫植株，其过程主要包括脱分化和再分化两个步骤．

（1）基因表达载体的构建过程：首先用同一种限制酶切割目的基因和质粒，然后再用DNA连接酶把目的基因和运载体质粒连接成重组质粒．
（2）B过程是培养并选择含有重组质粒的土壤农杆菌，其中“选择”体现了质粒作为运载体必须具备具有标记基因；“培养”体现了质粒作为运载体必须能在宿主细胞中复制并稳定保存．
（3）C过程为诱导选择，既要诱导出愈伤组织还要进行筛选，筛选出被含重组质粒的农杆菌侵染的叶片细胞，淘汰掉普通细胞，故应添加卡那霉素．
（4）后代中抗卡那霉素型与卡那霉素敏感型的数量比为1：1，说明此杂交方式为测交，抗卡那霉素型为显性杂合体（Aa），卡那霉素敏感型为隐性纯合子（aa），杂交后代表现型抗卡那霉素型与卡那霉素敏感型的数量比为1：1．抗卡那霉素型植株是显性杂合体（Aa），该类型植株自交，即Aa×Aa，后代性状分离比是抗卡那霉素型：卡那霉素敏感型=3：1．
（5）如果要检测转基因是否成功，D过程最好采用放射性同位素标记的抗虫基因作为探针，利用DNA分子杂交原理进行检测．
故答案为：
（1）限制酶、DNA连接酶
（2）在宿主细胞内自我复制、含有标记基因
（3）卡那霉素
（4）非转基因植株 3：1
（5）放射性同位素（或荧光分子）标记的抗虫基因

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术；植物培养的条件及过程．

考点点评： 本题结合获得抗虫棉的技术流程图，综合考查基因工程、植物组织培养和基因的分离定律，意在考查考生的识记能力、理解应用能力和计算能力，有一定难度．

解题思路：分析题图：图示为获得抗虫棉的技术流程图，其中A表示基因表达载体的构建过程，该过程需要限制酶和DNA连接酶；B表示用选择培养基筛选含有重组质粒的土壤农杆菌的过程；C表示脱分化过程；D表示转基因抗虫植株的检测．

（1）图中A为基因表达载体的构建过程，该过程所用的运载体是含kanr质粒；构建基因表达载体时，首先需用限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，还需用DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组质粒．
（2）标记基因是卡那霉素抗性基因，因此C过程的培养基除含有必需的营养物质、琼脂和激素外，还需加入卡那霉素．
（3）将离体棉花叶片组织培养成再生植株还需要采用植物组织培养技术，该技术的原理是植物细胞的全能性．
（4）探针是指用放射性同位素（或荧光分子）标记的含有目的基因的单链DNA片段．因此D过程应该用放射性同位素（或荧光分子）标记的抗虫基因作为探针．
（5）从个体生物水平上鉴定，D过程可用的最简单检测方法是让棉铃虫食用再生植株（抗虫接种实验）．
故答案为：
（1）含kanr质粒 　限制性核酸内切酶 　DNA连接酶
（2）卡那霉素
（3）植物组织培养 　植物细胞全能性
（4）抗虫基因
（5）让棉铃虫食用再生植株（抗虫接种实验）

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术；植物培养的条件及过程．

考点点评： 本题结合转基因抗虫植株的培育过程图，考查基因工程和植物组织培养的相关知识，要求考生识记基因工程的工具及操作步骤，能准确判断图中各过程的名称；识记植物组织培养的过程、原理及应用，能结合图中信息答题．

解题思路：据图分析，A过程是目的基因与运载体结合形成重组质粒的过程，这一过程需要限制性内切酶以及DNA连接酶；B过程表示选择培养；C过程表示脱分化产生愈伤组织，D过程表示检测目的基因是否导入受体细胞．

（1）基因表达载体的构建过程：首先用同一种限制酶切割目的基因和质粒，然后再用DNA连接酶把目的基因和运载体质粒连接成重组质粒．
（2）B过程是培养并选择含有重组质粒的土壤农杆菌，其中“选择”体现了质粒作为运载体必须具备具有标记基因；“培养”体现了质粒作为运载体必须能在宿主细胞中复制并稳定保存．
（3）C过程为诱导选择，既要诱导出愈伤组织还要进行筛选，筛选出被含重组质粒的农杆菌侵染的叶片细胞，淘汰掉普通细胞，则放在含有卡那霉素的选择培养基上进行选择培养．
（4）若利用DNA杂交技术检测再生植株中是否含有抗虫基因，一般用放射性同位素（或荧光分子）标记的抗虫基因作为探针与再生植株DNA进行杂交，如果显示出杂交带，则表明目的基因已经导入受体细胞．
（5）①后代中抗卡那霉素型与卡那霉素敏感型的数量比为1：1．说明此杂交方式为测交，抗卡那霉素型为显性杂合体（Aa），卡那霉素敏感型为隐性纯合子（aa），杂交后代表现型抗卡那霉素型与卡那霉素敏感型的数量比为1：1．
②抗卡那霉素型植株是显性杂合体（Aa），该类型植株自交，即Aa×Aa，后代性状分离比是抗卡那霉素型：卡那霉素敏感型=3：1．
③如果培养基不加卡那霉素，那么其再生植株中有一半是卡那霉素敏感型，另一半是抗卡那霉素型，所以将该转基因植株的花药在含有卡那霉素培养基上作离体培养时，卡那霉素对再生植株群体起到一个选择作用，将卡那霉素敏感型全部淘汰，只留下抗卡那霉素型，因此培养基中全部是抗卡那霉素型，占总数的100%．
故答案为：
（1）限制性内切酶和DNA连接酶
（2）具有标记基因；能在宿主细胞中复制并稳定保存
（3）卡那霉素
（4）放射性同位素（或荧光分子）标记的抗虫基因
（5）①非转基因植株
②3：1
③100

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题结合获得抗虫棉的技术流程图，综合考查基因工程、植物组织培养和基因的分离定律，意在考查考生的识记能力、理解应用能力和计算能力，有一定难度．

不会失效,紫外线穿透能力极弱,根本不可能穿透玻璃.即使你把培养基完全暴露在紫外线之下,紫外线也只能穿透薄薄的一层,不会对培养基造成明显影响.

(1)限制性内切酶和DNA连接酶
(2)具有标记基因 能在宿主细胞中复制并稳定保存
(3)卡那霉素
(4)放射性同位素(或荧光分子)标记的抗虫基因
(5)①．非转基因植株 ②．3：1 ③．100

(1)限制性内切酶和DNA连接酶
(2)具有标记基因；能在宿主细胞中复制并稳定保存
(3)卡那霉素
(4)放射性同位素(或荧光分子)标记的抗虫基因
(5)①．非转基因植株 ②．3:1 ③．100

按照你的表述,EcoRI酶切位点是在卡那霉素抗性基因内部?
那么,如果这个抗性基因插入了你的目的基因,那么这个基因就被破坏,也就失去了卡那抗性.
所以,插入了目的基因的质粒,应该是只有氨苄抗性的.所以转化之后涂平板,不能用双抗,只能用氨苄抗性.
要鉴别是否插入目的基因,很简单：
1,菌落pcr：从转化平板上随机挑选几个菌落,用普通pcr体系,以菌体为模板,做pcr,然后跑胶鉴定.(我的经验,这一步阳性了就基本准了)
2,从菌落pcr阳性菌内提质粒酶切鉴定.（这个最准）
3,如果你实在是要求用抗性来筛（其实抗性筛选不是很准）,你用两种平板,一种是amp平板（也就是转化用的平板）,一种是amp+kan平板,你用接种环或者灭过菌的牙签,从amp转化平板上的菌落点一下,再在amp
+kan平板上原位点一下,培养.
如果同一个菌落,只能在amp上长,而不能在双抗上长,就可能是重组质粒.

解题思路：分析题图：图示为利用生物技术获得生物新品种的过程示意图，其中A表示基因表达载体的构建过程；B表示用选择培养基筛选含有重组质粒的土壤农杆菌的过程；C表示脱分化过程；D表示转基因抗虫植株的检测．

（1）图中A为基因表达载体的构建过程，该过程需要限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，还需DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组质粒．
（2）质粒是小型环状DNA分子．
（3）B过程是培养并选择含有重组质粒的土壤农杆菌，其中“选择”要求质粒作为运载体必须具有标记基因；“培养”要求质粒作为运载体必须能在宿主细胞中复制并稳定保存．
（4）标记基因是卡那霉素抗性基因，因此B过程所用的培养基中应加入卡那霉素．
（5）为确定抗虫棉是否培育成功，可从个体水平上进行鉴定，即让棉铃虫采食棉花叶片观察存活情况．
故答案为：
（1）限制酶 DNA连接酶
（2）小型环状DNA
（3）具有标记基因 能在宿主细胞中复制并稳定保存
（4）卡那霉素
（5）让棉铃虫采食棉花叶片观察存活情况

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题结合转基因抗虫植株的培育过程图，考查基因工程和植物组织培养的相关知识，要求考生识记基因工程的工具及操作步骤，能准确判断图中各过程的名称；识记植物组织培养的过程及应用，能结合图中信息答题．

两株基因型不一样,1是杂合子和野生隐性纯合子杂交,2是与野生杂合子杂交所以比例不同

解题思路：分析图解：图中A表示基因表达载体的构建，B表示筛选含有重组质粒的土壤农杆菌，C表示脱分化，D表示愈伤组织，E表示再分化．
基因工程的基本操作步骤主要包括四步：①目的基因的获取；②基因表达载体的构建；③将目的基因导入受体细胞；④目的基因的检测与鉴定．
农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植物，对单子叶植物没有感染力；Ti质粒的T-DNA可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体上．
转化：目的基因插人Ti质粒的T-DNA上 农杆菌→导入植物细胞→目的基因整合到植物细胞染色体上→目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达．

（1）基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤：目的基因的获取、基因表达载体构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定．
（2）基因表达载体构建过程需要限制酶和DNA连接酶．
（3）要把重组质粒导入土壤农杆菌，首先必须用Ca²⁺感受处理土壤农杆菌，使土壤农杆菌转变为重组质粒和感受细胞态；然后将在缓冲液中混合培养完成转化过程．
（4）含有重组质粒的土壤农杆菌侵染离体棉花叶片组织后，离体棉花叶片组织必须通过植物的组织培养技术培养成再生植株，该过程需要要经过[C]脱分化和[E]再分化．如要确保再生植株中含有抗虫基因，可在C脱分化过程的培养基中加入卡那霉素，进行筛选．
（5）目的基因能否在棉花植株体内维持和表达其遗传特性的关键是目的基因是否插入受体细胞的DNA分子上．这需要通过检测才能知道，检测采用的方法是DNA分子杂交技术．
故答案为：
（1）基因表达载体构建目的基因的检测与鉴定
（2）限制酶DNA连接酶
（3）Ca²⁺感受重组质粒和感受细胞
（4）脱分化再分化 卡那霉素
（5）目的基因是否插入受体细胞的DNA分子上 DNA分子杂交技术

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术；植物培养的条件及过程．

考点点评： 本题考查了基因工程的相关知识，要求考生能够识记基因工程的操作步骤以及操作工具；明确农杆菌转化法在植物基因工程中的应用；并能够掌握植物组织培养技术的过程等知识．

解题思路：分析题图：图示为利用生物技术获得生物新品种的过程示意图，其中A表示基因表达载体的构建过程；B表示用选择培养基筛选含有重组质粒的土壤农杆菌的过程；C表示脱分化过程；D表示转基因抗虫植株的检测．

（1）农杆菌是原核生物，其遗传信息主要分布在拟核中，此外在细胞质的质粒上也有少量遗传信息．
（2）图中A为基因表达载体的构建过程，该过程需要限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，还需DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组质粒．基因表达载体的组成包括：目的基因、启动子、终止子和标记基因．
（2）将重组质粒导入微生物细胞时，常采用感受态细胞法，即首先用Ca²⁺处理微生物细胞，使之成为易于吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞，然后将将重组质粒和感受态细胞在缓冲液中混合培养完成转化过程．
（4）将离体棉花叶片组织培养成再生植株还需要采用植物组织培养技术，该技术包括脱分化和再分化两个过程．因此图中C表示脱分化过程．
（5）检测目的基因是否插入棉花的基因组DNA分子中，常采用DNA分子杂交技术；将转基因抗虫植株种植在试验田中，可通过害虫接种（或害虫感染）来检测抗虫基因是否表达．
故答案为：
（1）拟核DNA和质粒上
（2）限制酶、DNA连接酶启动子、终止子
（3）Ca²⁺感受态
（4）脱分化
（5）DNA分子杂交害虫接种（或害虫感染）

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题结合转基因抗虫植株的培育过程图，考查基因工程和植物组织培养的相关知识，要求考生识记基因工程的工具及操作步骤，能准确判断图中各过程的名称；识记植物组织培养的过程及应用，能结合图中信息答题．

解题思路：分析题图：首先采用基因工程技术将抗虫基因导入离体棉花叶片组织，其过程为：获取目的基因（抗虫基因）→构建基因表达载体→将目的基因导入农杆菌→用含有卡那霉素的选择培养基筛选含有重组质粒的土壤农杆菌→利用农杆菌转化法将目的基因导入离体棉花叶片组织细胞．其次采用植物组织培养技术，将导入抗虫基因的细胞培养成转基因抗虫植株，其过程主要包括脱分化和再分化两个步骤．

A、基因工程能产生定向变异，且该类变异属于基因重组，故A错误；
B、植物组织培养过程包括脱分化和再分化两个重要步骤，其中脱分化过程要避光，但再分化过程需光，因为幼苗需要光照来合成叶绿素并进行光合作用制造有机物，故B错误；
C、用两种限制性内切酶切割抗虫基因和质粒，可以形成不同的黏性末端，这样可以防止目的基因、质粒自身环化，也可以防止目的基因和质粒方向连接，故C正确；
D、在“离体棉花叶片组织”中检测到抗虫基因，说明抗虫基因已经导入受体细胞，但还要检测目的基因是否转录和翻译形成相应的蛋白质，只有检测到相应的蛋白质，才能用组织培养技术来生产抗虫棉，故D错误．
故选：C．

点评：
本题考点： 基因工程的应用．

考点点评： 本题结合生产抗虫棉的技术流程示意图，考查基因工程和植物细胞工程的相关知识，意在考查考生的识图能力和理解所学知识要点的能力；能运用所学知识与观点，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或得出正确的结论．

在细菌胞浆内对抗生素进行修饰的钝化酶主要有三类：氨基糖苷磷酸转移酶、氨基糖苷乙酰转移酶和氨基糖苷类核苷转移酶.
这个中文命名有时候有点乱,你最好查一下你指的这个“乙酰氨基葡糖苷酶”的EC号是否跟上述的几种相对应.

潮霉素抗性基因（Hyg）不抗卡那霉素,
卡那霉素抗性基因（Npt）不抗潮霉素
不同载体具有不同的抗性基因.

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拟南芥是一种模式植物,多年来围绕拟南芥的相关研究很多,尤其是对于拟南芥转基因研究非常热门,相关的论文也有很多.原因主要有以下几个方面：
1 拟南芥是一种模式植物,基因组小,克隆其基因比较简单.
　　2 种植方便,条件易得.
3 拟南芥是自花传粉植物,这样既很容易进行遗传分析.
4 方法简单,不同于传统的植物转基因,不需要植物组织培养阶段,对于实验操作的要求不是很高.
当前拟南芥转基因所使用的方法主要是农杆菌介导的转化（载体法）,区别主要是转化的方法不同,有抽真空,花序浸染和喷雾法使用最为广泛.
1农杆菌介导转化的基本流程编辑
农杆菌（目标载体）液的制备↘
拟南芥种植→花期（侵染）→共培养→收种→验证
2农杆菌制备编辑
1)从-80℃冰箱中取出lml农杆菌.
2)LB培养基中添加50mg/L的卡那霉素(Kan)和100mg/L的利福平(Rif).
3)把lml农杆菌加入到含有Kan和Rif抗生素的LB培养基中,28℃振荡10h.
4）拟南芥转基因浸润液采用的是1/2MS,加蔗糖50g/L,PH值调至5.7.然后在15p压力下蒸汽灭菌15min,灭菌结束,冷却后保存于4℃,以待转基因使用.
3转化编辑
抽真空/花序浸染/喷雾法
其中抽真空法转化效率最高,但是步骤麻烦,而且要将拟南芥倒置浸染到菌液中,操作不方便.喷雾法相比来说简便易行,而且进行重复浸染,可以提高转化效率.
4验证编辑
1.种子筛选,将收到的种子种植于含有筛选剂（卡那霉素/潮霉素等）的培养基上,筛选出抗性幼苗.
2.PCR,提取拟南芥基因组,进行PCR扩增,核酸电泳观察有无目的基因.

这和你的实验有关系吧,你最好讲一下实验背景.
我是猜你的农杆菌是作为载体或宿主菌使用吧,里面会带上别的基因,并带抗性标记,而你的农杆菌的抗性标记就是卡那霉素,是这样吗?
抗性标记是一种选择标记,你的LB培养基里加了卡那霉素,长出来的菌基本上就是你的目的菌了.