外植体污染的原因有哪些?人为的,环境的,操作方面的,还有什么吗?

外植体（离体细胞）：把由活植物体上切取下来以进行培养的那部分组织或器官叫做外植体.原生质体：脱去细胞壁的细胞叫原生质体,是一生物工程学的概念.动物细胞也可算做原生质体.外植体在植物激素促进下脱分化形成愈伤组织.

你说的这个问题,是平放还是插入,要看你的外植体是什么,如果是径,直接插入就可以了,应该就是你说的放直,如果是叶片,最好是平放,MS是固体培养基,但硬度不是很大,你吃过果冻吧,和那个差不多,应该说果冻的做法和培养基的做法是一样的,只是培养基要求消毒的更严格

不对.
因为无病毒的部分是没有维管束的部位,也就是说只有根尖和茎尖.
所以要培养无病毒植株,必须取根尖或者茎尖才可以的

解题思路：月季茎尖作外植体培养脱毒苗的技术是植物组织培养，过程：离体的植物组织，器官或细胞（外植体）→愈伤组织→胚状体→植株（新植体）

月季茎尖作外植体培养脱毒苗属于植物组织培养技术，依据的原理为植物体细胞的全能性，即已经分化的细胞仍然具有发育成完整植株的潜能；培养过程的顺序是离体植物器官、组织或细胞（外植体）脱分化形成愈伤组织，再分化形成根、芽等器官进而形成新的植物体．
故选：BC．

点评：
本题考点： 植物培养的条件及过程．

考点点评： 本题考查植物组织培养的过程，意在考查学生的识记和理解能力，便于学生形成知识网络．

应该是洗后才接种.我做的时候,浸泡灭菌液的地方,也就是原来的刀口,还要用刀切下去呢,因为那部分的细胞都泡死了.

无病毒植株不能用叶肉细胞
要用幼苗、芽这类的新生细胞
你想吧,叶子长的时间长了,不能保证有没有病毒的

植物病毒往往是沿着植物的输导组织进行扩散的.
植物的花芽、叶芽等处的分生组织中没有导管等输导组织,所以认为是没有病毒的.

当然可以了,外植体就是指离体的植物的组织或器官,经过脱分化分化成愈伤组织了,经过再分化分化成根、芽等器官.

消毒水都具有很强的烧蚀性,在杀灭细菌的同时,也会作用于正常的细胞组织,影响正常细胞的成长或再生,所以外植体消毒后一般要用无菌水漂洗,以清除残留的具有杀伤力的消毒剂,有的要加表面活性剂,也是这个道理.

（一）按外植体的来源分
外植体：是指在植物组织培养过程中,从植物母体上取来,用于离体培养的初始材料.
（1）植株培养
是指对具有完整植株形态的幼苗或较大的植株进行离体培养的方法.
（2）胚胎培养
是指对植物成熟或未成熟胚进行离体培养的方法.常用的胚胎培养材料有幼胚、成熟胚、胚乳、胚珠、子房.
（3）器官培养
是指对植物体各种器官及器官原基进行离体培养的方法.常用的器官培养材料有根（根尖,切段）、茎（茎尖、切段）、叶（叶原基、叶片、子叶）、花（花瓣、雄蕊）、果实、种子等.
（4）组织培养
是指对植物体各部位组织或已诱导的愈伤组织进行离体培养的方法.常用的组织培养材料有分生组织、形成层、表皮、皮层、薄壁细胞、髓部、木质部等.
（5）细胞培养
是指对植物的单个细胞或较小的细胞团进行离体培养的方法.常用的细胞培养材料有性细胞、叶肉细胞、根尖细胞、韧皮部细胞等.
（6）原生质体培养
是指对除去细胞壁的原生质体进行离体培养的方法.
（二）按培养过程分
（1）初代培养
将植物体上分离下来的外植体进行最初几代培养的过程.其目的是建立无菌培养物,诱导腋芽或顶芽萌发,或产生不定芽、愈伤组织、原球茎.通常是植物组织培养中比较困难的阶段,也称启动培养、诱导培养.
（2）继代培养
将初代培养诱导产生的培养物重新分割,转移到新鲜培养基上继续培养的过程.其目的是使培养物得到大量繁殖,也称为增殖培养.
（3）生根培养
诱导无根组培苗产生根,形成完整植株的过程.其目的是提高组培苗田间移栽后的成活率.
（三）根据培养基的类型分为:
1、固体培养:琼脂、卡拉胶等固化.
2、半液半固体培养：固液双层.
3、液体培养：震荡、旋转或静置培养.
（四）根据再生途径分为：
1、愈伤组织途径；
2、芽增殖途径：
3、原球茎途径：
4、体胚发生途径：

植物外植体消毒和接种：
用于进行组织培养的组织、器官和细胞称为外植体.在组织培养中,外植体如果是带菌的,在接种前都必须进行表面消毒,这是取得培养成功的最基本的和重要的前提.常用消毒剂对外植体进行消毒.从室外取的材料,一般先用自来水冲洗数分钟,对表面不光滑或长有绒毛等结构不容易洗净的材料,自来水冲洗的时间要长,几个小时或过夜,并且用洗衣粉或洗洁精洗涤,必要时用毛刷刷洗.洗后的材料用滤纸擦干,然后浸泡在消毒溶液中.接种材料使用消毒剂后,要用无菌水洗涤3～5 遍,最后用无菌纸擦干净.使用消毒剂的原则是既要达到消毒目的,又不能损伤植物组织和细胞,还要符合就地取材的原则.对一些容易污染、较难灭菌的外植体进行表面消毒时,用单一消毒剂不能收到好的效果,所以常选用两种消毒剂交替浸泡法.一般,首先用75％乙醇浸泡外植体数秒钟至30s,然后置于0.1％氯化汞溶液5～10min 或含有2％活性氧的次氯酸钠溶液5～30min,然后用无菌水洗涤.有时在氯化汞或次氯酸钠灭菌后,用无菌水洗,进一步剥去几层组织或器官如叶片后,再用次氯酸钠灭菌3～5min,无菌水漂洗3 次后,切割、用于接种.
用消毒剂对接种材料进行灭菌处理时,可以在灭菌溶液中加入1～2 滴表面活性剂,如吐温80或吐温20,它们可以湿润外植体整个组织,促进灭菌液充分接触表面组织,达到较好的消毒效果.有时还可以用磁力搅拌、超声振动等方法使消毒杀菌剂进入外植体.消毒溶液对外植体消毒是在超净工作台上进行.完成表面消毒的接种材料要尽快放置于培养基中.
植物外植体消毒和接种(以胡萝卜为例)：
1 ．接种前,用75 ％乙醇棉球或用2％苯扎溴铵溶液擦拭超净工作台台面,将培养基及用具放入工作台,开超净工作台紫外灯照射至少20 min,然后开送风开关,之后关闭紫外灯,通风10 min后,再开日光灯进行无菌操作.
2 ．将胡萝卜块根在自来水下冲洗干净,用小刀切去外围组织,切成小块分别放100 mL 烧杯中,用75％乙醇溶液浸泡30s,然后用0.1%氯化汞溶液分别浸泡2 、5 、10 min ,用无菌水洗涤3 次,无菌纸吸干水分.取出培养皿,剪刀和镊子使用前插入90％乙醇溶液中,使用镊子时在酒精灯火焰上炽烧片刻,冷却后,切取髓部组织0.5cm .以上操作都要在试管口靠近火焰旁.
3 ．将培养容器斜面向上,并使它们拉于水平位置,也可将培养容器放在左手中.将塞盖用右手拧转松动,以便接种时拔出.用火焰灼烧管口,灼烧时应不断转动试管口（靠手腕的动作,使试管口沾染的少量菌得以烧死）.将烧过的接种针（环）触动培养基部分,使其冷却,以免烧死被接种的外植体,然后轻轻接触外植体,慢慢将接种针（环）抽出试管,打开培养容器盖,将外植体放在培养基上,每瓶放3 块.封口,贴标签,注明姓名,标明时间和材料名称.整理好接种室（箱）的台面,搞好清洁卫生.
4 ．用水洗干净非洲澎蜞菊叶片,用滤纸擦干后置于100 mL 烧杯中,在超净工作台上加入75％乙醇溶液浸泡30s,然后用0.1％氯化汞溶液浸泡3 、5 、7 min,用无菌水洗涤3 次,将叶片切成长1cm ,按照上述同样的步骤接种于培养基上.
5 ．绿豆种子用75％乙醇溶液浸泡30 s,然后用0.1％氯化汞溶液（加入吐温2 滴）浸泡3 、5 、10 min ,期间不断搅拌溶液,用无菌水洗涤5～6 遍,洗干种子外围水分,按照上述同样的步骤接种于培养基上.

体细胞克隆变异育种是将体细胞核取出导入另一个去核的卵细胞中从而培养出的后代,变异应该是因为卵细胞的细胞质中的遗传物质与原体细胞中的不同从而造成后代的性状发生了变异的育种方法.外植体选饱满未萌发侧芽应该是未萌发的侧芽的未分化程度高,用这样的芽培养更易形成愈伤组织.中部侧芽繁殖速率快应该跟激素的分泌量不同有关吧（猜测）.越冬的芽经过越冬成活率高且发育时间短应该类似种子层积的方法打破了芽休眠,调整了植物激素使其更易生长（推测）.激素对组培植物的影响无可替代,但是不同植物对激素种类和浓度要求不同,一般NAA要求的浓度不高,细胞分裂素中6-BA可能对月季组培无影响.NAA可以促进细胞增殖,是组培常用的生长素.生根阶段加活性炭是因为活性炭可以给培养物造成一种向地性生长（地面黑色的嘛）,从而诱导生根,另外活性炭还有调节营养物质和激素浓度的作用.

外植体是植物组织培养中作为离体培养材料的器官或组织的片段，是植物体的一部分，不是细胞的一部分

解题思路：分析表格：仅加入2，4-D调节剂时，且其浓度由1.0mg/l逐渐增加到为3.0mg/l时，愈伤组织诱导率逐渐升高；若在此基础上再添加6-BA，且其浓度由0.2mg/l逐渐增加到为1.0mg/l时，愈伤组织诱导率逐渐降低．

（1）由以上分析可知，在基本培养基中添加较高浓度的2，4-D有利于食用稗胚形成愈伤组织，而添加6-BA则不利于食用稗胚愈伤组织的形成．
（2）①该实验的目的是探究光照对愈伤组织形成的影响，因此自变量是有无光照，因变量是愈伤组织诱导形成的几率，那么影响愈伤组织诱导形成的几率培养基等就是无关变量，在处理无关变量时要做到相同且最适宜，因此在该实验中要把相应的材料放在最有利愈伤组织形成的L₃培养基中培养．
②进行不同组自变量的处理：甲组置于光照条件下培养，乙组置于黑暗条件下培养，其它条件相同且适宜；
③观察并记录比较相应的因变量：培养一段时间后，分别计数甲、乙两组中形成愈伤组织的个数并计算愈伤组织诱导率．
该实验是探究性实验，实验预期和结论有多种可能，要注意讨论全面．
实验结果和结论：①如甲组的愈伤组织诱导率大于乙组的愈伤组织诱导率，则光照有利于愈伤组织的形成；②如甲组的愈伤组织诱导率小于乙组的愈伤组织诱导率，则黑暗有利于愈伤组织的形成；③如甲组的愈伤组织诱导率和乙组的愈伤组织诱导率相当，则光照、黑暗对愈伤组织的形成没有影响．
故答案为：
（1）2，4-D6-BA
（2）①L₃
②甲组置于光照条件下培养，乙组置于黑暗条件下培养，其它条件相同且适宜；
③培养一段时间后，分别计数甲、乙两组中形成愈伤组织的个数并计算愈伤组织诱导率．
预期实验结果和结论：①如甲组的愈伤组织诱导率大于乙组的愈伤组织诱导率，则光照有利于愈伤组织的形成；②如甲组的愈伤组织诱导率小于乙组的愈伤组织诱导率，则黑暗有利于愈伤组织的形成；③如甲组的愈伤组织诱导率和乙组的愈伤组织诱导率相当，则光照、黑暗对愈伤组织的形成没有影响

点评：
本题考点： 植物培养的条件及过程．

考点点评： 本题结合图表，考查植物组织培养的条件及过程、探究实验，要求考生识记植物组织培养的条件，能分析表中数据提取有效信息并得出正确结论；明确探究实验的目的，正确判断实验的自变量、因变量和无关变量，能根据探究实验的原则完善实验步骤，并预测实验的结果和结论．

离体的植物生殖细胞不一定具有全能性.
比如,花粉培养后形成单倍体,不具有全能性.

应该查找做过相关研究的文献吧?
以下是搜到的,仅供参考
毛状根培养技术
毛状根(hairy roots)是发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes）感染双子叶植物后,其Ri质粒上的T—DNA片断整合进植物细胞核基因组中诱导产生的一种特殊表现型,近10年来已发展成一种新的培养系统.
发根农杆菌 (Agrobacterium rhizogenes)是一种革兰氏阴性菌,能侵染大多数的双子叶植物、少数单子叶植物及个别的裸子植物,诱发被感染植物的受伤部位长出毛状根.发根农杆菌之所以具有这种致根性,是因为它具有能诱导毛状根产生的Ri质粒.Ri质粒是发根农杆菌染色体外的一个约250kb的大质粒,带有冠瘿合成酶基因.在Ri质粒上,存在与转化有关的两个主要功能区,即T-DNA (转移区)和Vir (致病区).Vir区基因并不发生转移,但它对T-DNA的转移非常重要.当发根农杆菌感染植物时Ri质粒上的T-DNA可以转化并插入到植物细胞基因组中,其整合和表达的结果导致了大量毛状根的产生.处理菌株后可提高Vir区的表达并明显提高药用植物外植体的转化率.
发根农杆菌Ri质粒有几种不同的类型,分别是农杆碱型、甘露碱型和黄瓜碱型.其中含有农杆碱型Ri质粒的菌株通常具有更广泛的宿主范围和更强的致根特性.经发根农杆菌侵染植物形成的毛状根适离体培养能够再生植株,而且许多植物的毛状根在离体培养条件下表现出次生代谢产物的合成能力,产物产量较正常植物及悬浮培养细胞的要高.因此Ri质粒可应用于有价值的次生代谢产物的生产.
与植物细胞培养相比,毛状根培养具有生长速度快、激素自养、分化程度较高以及遗传性状相对稳定等优点.由于近三分之一传统药材的药用部位是根,所以这一培养系统在传统药材生产中具有更重要的意义.
1.毛状根诱导常用菌种
2.毛状根的诱导操作
3.毛状根的鉴定
1.毛状根诱导常用菌种
常用于实验的发根农杆菌（ Agrobacterium rhizogenes ）有：ATCC15834、ATCC39207、G58P GV3296、A4、NCPPB2659、Rl500、Rl601、LBA9402、TRl05等菌株,这些菌株中含有侵入性致根质粒（root inducing plasmid）Ri质粒.
2.毛状根的诱导操作（以黄芪为例简述毛状根的诱导方法）
①黄芪无菌苗培养：黄芪种子表面消毒后接种于MS培养25 ℃下暗培养,待苗长至4cm左右时取其不带芽的下胚轴作为共培养的材料.
②发根农杆菌的培养与保存：农杆菌可在平板培养基上于4℃下保存数月,而在-70 ℃的低温冰箱中可长期保存.农杆菌快速生长过程中．常常会出现质粒丢失,基因突变.要使转化最为有效就要利用对数生长期的农杆菌来转化.发根农杆菌15834的质粒上带有抗cefotaximes选择标记基因,将农杆菌培养于 YEB培养基上,25 C下培养,每周转接一次,感染前两天转接一次.
③针刺接种感染与共培养：把黄芪下胚轴切段后,用解剖针蘸取培养好的发根农杆菌,在黄芪下胚轴上扎眼,之后黄芪切段接种于含500mg/L cefotaxime的MS培养基上培养.25℃黑暗下诱导毛状根.长出的毛状根经多次转接去除农杆菌之后转入MS中培养可速生长,转化的毛状根生长大大快于未转化的根培养物.
3.毛状根的鉴定
诱导出的毛状根是否确为转基因产物还需鉴定.毛状根可以从形态水平上给于鉴定,它不依赖激素快速生长,根多丛生,多分枝,多根毛,无向地性.这些表型的特征与未转化的根不同,可区分开.可以通过毛状根中GUS活性的测定或NPTII酶的检测从组织水平来证明Ri质粒中的T－DNA是否转移整合到植物细胞的核因组上.
冠瘿碱的测定可作为细胞水平的毛状根鉴定方法,因为冠瘿碱合成酶基因在发根农杆菌中并不能表达,它只能在植物细胞中表达.冠瘿碱的存在可作为植物细胞转化的指标.冠瘿碱的测定可用高压纸电泳方法,用碱性硝酸银溶液染色,硫代硫酸钠溶液固定.

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