用721分光光度计测多糖在多少有吸收

你可以试试边稀释边测,如果原液OD值太高可以二倍稀释

测定土壤有机质必须按照国家标准（GB9834-88）进行.
试剂：0.4N重铬酸钾—硫酸溶液（称取化学纯重铬酸钾20.00克,溶于500毫升蒸馏水中（必要时可加热溶解）,冷却后,缓缓加入化学纯浓硫酸500毫升于重铬酸钾溶液中,并不断搅动,冷却后定容至1000毫升,贮于棕色试剂瓶中备用.）、0.2N硫酸亚铁溶液（称取硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）56克,溶于500毫升蒸馏水中,加浓硫酸5ml,然后再加蒸馏水稀释至1升,贮于棕色瓶中,用时需标定）、邻菲啰啉指示剂（称取此指示剂1.49g与FeSO4·7H2O 0.695g溶于含100ml水溶液中.此指示剂易变质,应密闭保存于棕色瓶中.）、0.1N重铬酸钾标准溶液（称取经130℃烘1.5h的优级纯重铬酸钾（4.1）9.807g,先用少量水溶解,然后移入1L容量瓶内,加水定容.）
操作步骤：准确称取通过0.25毫米筛孔的土样0.1000～0.5000克,土样数量视有机质含量多少而定.有机质含量大于5%的称土样0.2克以下,5%的称0.0.2克,4%的称0.0.3克,3%的称0.0.4克,小于2%则称0.5以上.由于土样数量少,为了减少称样误差,好最用减量法.将土样放入干燥的硬性试管中,用移液管准确加入0.4N的重铬酸钾—硫酸溶液10毫升（先加入3毫升,摇动试管,使溶液与土混匀,然后再加其余的7毫升）,在试管上套一小漏斗,以冷凝蒸出的水汽,把试管放入铁丝笼中.将装有试管的铁丝笼（每笼应有1～2个试管做空白试验,用灼烧过的土壤代替土样,其他手续均相同）放入温度为185～190℃的油浴锅中,要求放入后油浴锅温度下降至170～180℃左右,以后必须控制温度在170～180℃,当试管内液体开始沸腾（溶液表面开始翻动,有较大的气泡发生）时记时,缓缓煮沸5分钟,取出铁丝笼,稍冷,用纸擦净试管外部的油液.等试管冷却后,将试管内溶液倒入250毫升三角瓶中,用蒸馏水冼净试管内部及小漏斗的内部,洗涤液均冲洗至三角瓶中,最后总的体积约60～70毫升.滴加3～4滴邻啡啰啉指示剂,此时溶液为橙黄色,用已标定过的硫酸亚铁溶液滴定,溶液由橙黄色经过绿色突变到砖红色即为终点.
希望对您有所帮助.

1.接通电源,打开仪器开关,掀开样品室暗箱盖,预热10分钟.
2.将灵敏度开关调至“1”档（若零点调节器调不到“0”时,需选用较高档.）
3.根据所需波长转动波长选择钮.
4.将空白液及测定液分别倒入比色杯3/4处,用擦镜纸擦清外壁,放入样品室内,使空白管对准光路.
5.在暗箱盖开启状态下调节零点调节器,使读数盘指针指向T=0处.
6.盖上暗箱盖,调节“100”调节器,使空白管的T=100,指针稳定后逐步拉出样品滑竿,分别读出测定管的光密度值,并记录.
7.比色完毕,关上电源,取出比色皿洗净,样品室用软布或软纸擦净.
原理:（一）郎伯-比尔定律
光是一种电磁波,具有一定的波长和频率.可见光的波长范围在400~760nm,紫外光为200~400nm,红外光为760~500000nm.可见光因波长不同呈现不同颜色,这些波长在一定范围内呈现不同颜色的光称单色光.太阳或钨丝等发出的白光是复合光,是各种单色光的混合光.利用棱镜可将白光分成按波长顺序排列的各种单色光,即红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等,这就是光谱.有色物质溶液可选择性地吸收一部分可见光的能量而呈现不同颜色,而某些无色物质能特征性地选择紫外光或红外光的能量.物质吸收由光源发出的某些波长的光可形成吸收光谱,由于物质的分子结构不同,对光的吸收能力不同,因此每种物质都有特定的吸收光谱,而且在一定条件下其吸收程度与该物质的浓度成正比,分光光度法就是利用物质的这种吸收特征对不同物质进行定性或定量分析的方法.
在比色分析中,有色物质溶液颜色的深度决定于入射光的强度、有色物质溶液的浓度及液层的厚度.当一束单色光照射溶液时,入射光强度愈强,溶液浓度愈大,液层厚度愈厚,溶液对光的吸收愈多,它们之间的关系,符合物质对光吸收的定量定律,即Lambert-Bear 定律.这就是分光光度法用于物质定量分析的理论依据.

（1）721-分光光度计
1.接通电源,打开仪器开关,掀开样品室暗箱盖,预热10分钟.
2.将灵敏度开关调至“1”档（若零点调节器调不到“0”时,需选用较高档.）
3.根据所需波长转动波长选择钮.
4.将空白液及测定液分别倒入比色杯3/4处,用擦镜纸擦清外壁,放入样品室内,使空白管对准光路.
5.在暗箱盖开启状态下调节零点调节器,使读数盘指针指向T=0处.
6.盖上暗箱盖,调节“100”调节器,使空白管的T=100,指针稳定后逐步拉出样品滑竿,分别读出测定管的光密度值,并记录.
7.比色完毕,关上电源,取出比色皿洗净,样品室用软布或软纸擦净.
原理:（一）郎伯-比尔定律
光是一种电磁波,具有一定的波长和频率.可见光的波长范围在400~760nm,紫外光为200~400nm,红外光为760~500000nm.可见光因波长不同呈现不同颜色,这些波长在一定范围内呈现不同颜色的光称单色光.太阳或钨丝等发出的白光是复合光,是各种单色光的混合光.利用棱镜可将白光分成按波长顺序排列的各种单色光,即红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等,这就是光谱.有色物质溶液可选择性地吸收一部分可见光的能量而呈现不同颜色,而某些无色物质能特征性地选择紫外光或红外光的能量.物质吸收由光源发出的某些波长的光可形成吸收光谱,由于物质的分子结构不同,对光的吸收能力不同,因此每种物质都有特定的吸收光谱,而且在一定条件下其吸收程度与该物质的浓度成正比,分光光度法就是利用物质的这种吸收特征对不同物质进行定性或定量分析的方法.
在比色分析中,有色物质溶液颜色的深度决定于入射光的强度、有色物质溶液的浓度及液层的厚度.当一束单色光照射溶液时,入射光强度愈强,溶液浓度愈大,液层厚度愈厚,溶液对光的吸收愈多,它们之间的关系,符合物质对光吸收的定量定律,即Lambert-Bear 定律.这就是分光光度法用于物质定量分析的理论依据.

正常情况下,答案唯一确定：比色皿外表面没有檫干净,有残液.
还可能有：
1）仪器预热时间不够
2）仪器安装环境振动过大,光源附近空气流速大或受外界强光照射；
3）外部电压不稳；
4）仪器接地不良；
5）光源灯位置不正确；
6）光源切换杆位置不正确（不到位）；
7）待测样品不稳定或具有挥发性；
8）仪器内部故障.

这个跟比色皿的长度没有关系,在紫外区,也就是400nm以下就应该用石英比色皿,石英比色皿在紫外下没有吸收,而玻璃会吸收紫外区域的光线,当你测可见光下的吸收时就可以用玻璃的比色皿.这与你用比色皿的长度没有太大的影响,具体参照朗伯比尔定律,以及对该公式的解释~~

液面要达到比色皿2/3的位置

（除仪器和稀释原因 ）那只能是你的原因了.

你用朗伯－比尔定律算吧

650nm?那用的是protein lowry法吧.原理简单说就是蛋白中的酪氨酸可将磷钼酸和磷钨酸还原为蓝色物质,并且是严格定量的.所以说,这个方法最终检测的是这个物质而非蛋白质,故吸光度是不同的.

应该是用直径0.5cm的比色皿的意思吧

相关系数为1,做的挺不错的,不过这个也容易引起大家怀疑有造假的可能.
建议楼主增加几个样品梯度,如果得出的工作曲线的相关系数也是1的话那就说明仪器的线性好,楼主陪得溶液也好!这样得出的结果更有说服力!