高效液相色谱仪工作情况是什么我看到有色谱仪,有色谱柱,有进样针.是用进样针把待测物质打到色谱柱里吗?然后流动相不停的流,

紫外分光光度计 检测器：进口硅光电池
液相有很多种检测器,如蒸发光检测器,荧光检测器,示差检测器等.其中紫外可见检测器的工作原理与结构同一般分光光度计相似,实际上就是装有流动地的紫外可见光度计.

　在所有色谱技术中,液相色谱法（liquid chromatography,LC）是最早（1903年）发明的,但其初期发展比较慢,在液相色谱普及之前,纸色谱法、气相色谱法和薄层色谱法是色谱分析法的主流.到了20世纪60年代后期,将已经发展得比较成熟的气相色谱的理论与技术应用到液相色谱上来,使液相色谱得到了迅速的发展.特别是填料制备技术、检测技术和高压输液泵性能的不断改进,使液相色谱分析实现了高效化和高速化.具有这些优良性能的液相色谱仪于1969年商品化.从此,这种分离效率高、分析速度快的液相色谱就被称为高效液相色谱法（high performance liquid chromatography,HPLC）,也称高压液相色谱法或高速液相色谱法.
　　气相色谱只适合分析较易挥发、且化学性质稳定的有机化合物,而HPLC则适合于分析那些用气相色谱难以分析的物质,如挥发性差、极性强、具有生物活性、热稳定性差的物质.现在,HPLC的应用范围已经远远超过气相色谱,位居色谱法之首.
　　高效液相色谱的类型
　　广义地讲,固定相为平面状的纸色谱法和薄层色谱法也是以液体为流动相,也应归于液相色谱法.不过通常所说的液相色谱法仅指所用固定相为柱型的柱液相色谱法.
　　通常将液相色谱法按分离机理分成吸附色谱法、分配色谱法、离子色谱法和凝胶色谱法四大类.其实,有些液相色谱方法并不能简单地归于这四类.按分离机理,有的相同或部分重叠.但这些方法或是在应用对象上有独特之处,或是在分离过程上有所不同,通常被赋予了比较固定的名称.
　　现在的液相色谱仪一般都做成一个个单元组件,然后根据分析要求将各所需单元组件组合起来.最基本的组件是高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器和数据系统（记录仪、积分仪或色谱工作站）.此外,还可根据需要配置流动相在线脱气装置、梯度洗脱装置、自动进样系统、柱后反应系统和全自动控制系统等.
　　液相色谱仪的工作过程：输液泵将流动相以稳定的流速（或压力）输送至分析体系,在色谱柱之前通过进样器将样品导入,流动相将样品带入色谱柱,在色谱柱中各组分因在固定相中的分配系数或吸附力大小的不同而被分离,并依次随流动相流至检测器,检测到的信号送至数据系统记录、处理或保存.
二、梯度洗脱（gradient elution）又称为梯度淋洗或程序洗脱.在同一个分析周期中,按一定程度不断改变流动相的浓度配比,称为梯度洗脱.
　　梯度洗脱（gradient elution）又称为梯度淋洗或程序洗脱.
　　在气相色谱中,为了改善对宽沸程样品的分离和缩短分析周期,广泛采用程序升温的方法.而在液相色谱中则采用梯度洗脱的方法.在同一个分析周期中,按一定程度不断改变流动相的浓度配比,称为梯度洗脱.从而可以使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目的.
　　梯度洗脱的优点：1.缩短分析周期；2.提高分离能力；3.峰型得到改善,很少拖尾；4.增加灵敏度.但有时引起基线漂移.
　　梯度洗脱的原理：
　　流动相由几种不同极性的溶剂组成,通过改变流动相中各溶剂组成的比例改变流动相的极性,使每个流出的组分都有合适的容量因子k,并使样品种的所有组分可在最短时间内实现最佳分离.
　　梯度洗脱特点：
　　提高柱效,改善检测器的灵敏度.当样品中的一个峰的k值和最后一个峰的k值相差几十倍至几百倍时,使用梯度洗脱效果特别好.梯度洗脱中为保证流速的稳定,必须使用恒流泵,否则难获重复结果.梯度洗脱常用一个弱极性的溶剂A和一个强极性的溶剂B.
如图（两个图一种原理,前者为洗脱装置和柱子之间封闭,适用于配备压力泵的色谱柱,后者为洗脱装置和柱子之间隔离开来,是梯度洗脱的简易装置.）：两个容器放于同一水平上,两容器连通,B与柱相连,当溶液由B流入柱时,A中的溶液就会自动来补充,经搅拌与第一容器的溶液相混合,这样流入柱中的缓冲液的洗脱能力即成梯度变化.
　　洗脱时应满足以下要求：①洗脱液体积应足够大,一般要几十倍于床体积,从而使分离的各峰不致于太拥挤.②梯度的上限要足够高,使紧密吸附的物质能被洗脱下来.③梯度不要上升太快,要恰好使移动的区带在快到柱末端时达到解吸状态.目的物的过早解吸,会引起区带扩散；而目的物的过晚解吸会使峰形过宽.
　　梯度洗脱可分为低压梯度(又称为外梯度)和高压梯度(又称为内梯度).
　　(1)低压梯度装置.低压梯度是采用比例调节阀,在常压下预先按一定的程序将溶剂混
　　合后,再用泵输入色谱柱系统,也称为泵前混合.
　　(2)高压梯度装置.由两台(或多台)高压输液泵、梯度程序控制器(或计算机及接口板控
　　制)、混合器等部件所组成.两台(或多台)泵分别将两种(或多种)极性不同的溶剂输入混合
　　器,经充分混合后进入色谱柱系统.

五针峰面积不平行可能与进样有关.如是手动进样,确定样品体积是否大于定量环的5倍?如是自动进样,看看进样泵里有无气泡,及样品溶液是否过滤好.流动相中小气泡对峰面积没大影响,只会造成小尖峰,滤头堵会造成压力上升,无实质影响.

HPLC样品的浓度这个需要看你分析的是什么样品,他的响应值是高还是低,检测项目是杂质检测还是含量检测,如果做有关物质,一般浓度较高,因为要检测出很小的杂质,根据响应值的不同来确定浓度,具体操作的时候可以做成不同浓度,来做比较,确定,一般选用浓度为样品定量限的200倍,含量的话,定量限20-100倍都可以.
普通柱子进样量较多选择10ul或者20ul,做聚合物那样的柱子进样量一般为200ul,这个没有特定多少,只要相关的方法学验证通过了就可以.
样品的配制,如果主要分析成分的溶解度,稳定性都没问题的话,多采用流动相或水、甲醇、乙腈等溶解,对于特殊的样品,可以自行选择溶剂,对溶剂的要求一般是可以让待测物质完全溶解且不影响待测物质的稳定性,还有空白溶剂的色谱图不出峰或者出峰但不干扰待测物质杂质峰.
操作要领,这个就按照标准操作规范上的来就行或者你们自行定制的SOP.

HPLC自身对照法做有关物质是最常用的方法,峰面积不成比例是指你的自身对照主峰与供试品主峰间的比例吗?
这种情况也很多见,主要看供试品浓度的设计是否超载,如果浓度过大,造成超载则跟自身对照不成线性,但是这并不影响你的定量计算,因为自身对照法的优点就是缩小了对照与杂质见的线性范围,也就是说自身对照的浓度及更低浓度物质间的线性范围.
如果你要使呈线性,最简单的方法是减小供试品浓度

这些没有硬性规定
一般供试和对照各称2份,各进2针平行,也就是一共8针
求出各图谱主峰的相应因子（浓度/峰面积）再计算含量,同时满足相应因子RSD

一般都是用他们Waters自带的empower或者breeze
当然你也可以用国产的如浙大N2000,或者用agilent的工作站

一、参考百度百科：http://baike.baidu.com/view/971281.htm
　在所有色谱技术中,液相色谱法（liquid chromatography,LC）是最早（1903年）发明的,但其初期发展比较慢,在液相色谱普及之前,纸色谱法、气相色谱法和薄层色谱法是色谱分析法的主流.到了20世纪60年代后期,将已经发展得比较成熟的气相色谱的理论与技术应用到液相色谱上来,使液相色谱得到了迅速的发展.特别是填料制备技术、检测技术和高压输液泵性能的不断改进,使液相色谱分析实现了高效化和高速化.具有这些优良性能的液相色谱仪于1969年商品化.从此,这种分离效率高、分析速度快的液相色谱就被称为高效液相色谱法（high performance liquid chromatography,HPLC）,也称高压液相色谱法或高速液相色谱法.
　　气相色谱只适合分析较易挥发、且化学性质稳定的有机化合物,而HPLC则适合于分析那些用气相色谱难以分析的物质,如挥发性差、极性强、具有生物活性、热稳定性差的物质.现在,HPLC的应用范围已经远远超过气相色谱,位居色谱法之首.
　　高效液相色谱的类型
　　广义地讲,固定相为平面状的纸色谱法和薄层色谱法也是以液体为流动相,也应归于液相色谱法.不过通常所说的液相色谱法仅指所用固定相为柱型的柱液相色谱法.
　　通常将液相色谱法按分离机理分成吸附色谱法、分配色谱法、离子色谱法和凝胶色谱法四大类.其实,有些液相色谱方法并不能简单地归于这四类.按分离机理,有的相同或部分重叠.但这些方法或是在应用对象上有独特之处,或是在分离过程上有所不同,通常被赋予了比较固定的名称.
　　现在的液相色谱仪一般都做成一个个单元组件,然后根据分析要求将各所需单元组件组合起来.最基本的组件是高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器和数据系统（记录仪、积分仪或色谱工作站）.此外,还可根据需要配置流动相在线脱气装置、梯度洗脱装置、自动进样系统、柱后反应系统和全自动控制系统等.
　　液相色谱仪的工作过程：输液泵将流动相以稳定的流速（或压力）输送至分析体系,在色谱柱之前通过进样器将样品导入,流动相将样品带入色谱柱,在色谱柱中各组分因在固定相中的分配系数或吸附力大小的不同而被分离,并依次随流动相流至检测器,检测到的信号送至数据系统记录、处理或保存.
二、梯度洗脱（gradient elution）又称为梯度淋洗或程序洗脱.在同一个分析周期中,按一定程度不断改变流动相的浓度配比,称为梯度洗脱.
　　梯度洗脱（gradient elution）又称为梯度淋洗或程序洗脱.
　　在气相色谱中,为了改善对宽沸程样品的分离和缩短分析周期,广泛采用程序升温的方法.而在液相色谱中则采用梯度洗脱的方法.在同一个分析周期中,按一定程度不断改变流动相的浓度配比,称为梯度洗脱.从而可以使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目的.
　　梯度洗脱的优点：1.缩短分析周期；2.提高分离能力；3.峰型得到改善,很少拖尾；4.增加灵敏度.但有时引起基线漂移.
　　梯度洗脱的原理：
　　流动相由几种不同极性的溶剂组成,通过改变流动相中各溶剂组成的比例改变流动相的极性,使每个流出的组分都有合适的容量因子k,并使样品种的所有组分可在最短时间内实现最佳分离.
　　梯度洗脱特点：
　　提高柱效,改善检测器的灵敏度.当样品中的一个峰的k值和最后一个峰的k值相差几十倍至几百倍时,使用梯度洗脱效果特别好.梯度洗脱中为保证流速的稳定,必须使用恒流泵,否则难获重复结果.梯度洗脱常用一个弱极性的溶剂A和一个强极性的溶剂B.
梯度洗脱装置示意图2 梯度洗脱示意图1（梯度洗脱参考：http://baike.baidu.com/view/1311799.htm）
如图（两个图一种原理,前者为洗脱装置和柱子之间封闭,适用于配备压力泵的色谱柱,后者为洗脱装置和柱子之间隔离开来,是梯度洗脱的简易装置.）：两个容器放于同一水平上,两容器连通,B与柱相连,当溶液由B流入柱时,A中的溶液就会自动来补充,经搅拌与第一容器的溶液相混合,这样流入柱中的缓冲液的洗脱能力即成梯度变化.
　　洗脱时应满足以下要求：①洗脱液体积应足够大,一般要几十倍于床体积,从而使分离的各峰不致于太拥挤.②梯度的上限要足够高,使紧密吸附的物质能被洗脱下来.③梯度不要上升太快,要恰好使移动的区带在快到柱末端时达到解吸状态.目的物的过早解吸,会引起区带扩散；而目的物的过晚解吸会使峰形过宽.
　　梯度洗脱可分为低压梯度(又称为外梯度)和高压梯度(又称为内梯度).
　　(1)低压梯度装置.低压梯度是采用比例调节阀,在常压下预先按一定的程序将溶剂混
　　合后,再用泵输入色谱柱系统,也称为泵前混合.
　　(2)高压梯度装置.由两台(或多台)高压输液泵、梯度程序控制器(或计算机及接口板控
　　制)、混合器等部件所组成.两台(或多台)泵分别将两种(或多种)极性不同的溶剂输入混合
　　器,经充分混合后进入色谱柱系统.

液相色谱图很简单啊.就一个一个的峰.是按照面积归一法算纯度的.
他的出峰时间和峰高 是和你进样 和流动相 浓度 还有机器流速有关的.只要你取样进样 以及分析步骤正确.结果误差很小的.
色谱图完成后是要修的.不同物质跑出的峰是不同的,一般来说一个主峰（主要物质）若干杂峰（杂质）.这得根据你的反应以及需要的结果来分析.
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额.我是化工的分析员.整天液相打样.主要是苯胺类的.一般分析,主要是2类.一个成品 一个是工序产品.工序样品打样是为了下一步反应服务的

Luminous,应该是发光强度

通俗的讲就是化合物在固定相（色谱柱）和流动相之间不断的吸附和解吸的过程从而使不同的化合物得以分离,因为不同的化合物在这两者之间（固定相和流动相）的作用力是有差别的.

一般有进样器（有各种阀门可以进样,可以对色谱柱冲洗）、有一个guard column,也就是保护分离用色谱柱的去除一些可能对色谱柱有害的小色谱柱,过了guard column就是进入分离的色谱柱了,一般色谱柱按照其极性分类,C18的就是含有18个碳的烷基链固定相的色谱,对于极性偏低的物质会有较强的亲和力,导致极性低的物质较后流出,极性高的物质就会先留出,如果是亲水性的固定相,色谱流出顺序就和用c18的相反,极性高的后流出,流出了之后就是检测器,一般便宜的是UV-VIS,贵点的就是质谱了

是做二维分离用么?如果仪器允许,最好是弄个在线二维分离的泵和柱子,如果没有,那就根据需求每30秒或1分钟在排液口用小管儿接就行,可能有点儿狼狈,但效果还行

不可能单独用硫酸做流动相吧,应该是流动相添加硫酸吧,调节酸度影响出峰时间,还有就是抑制酸性物质水解,另外用紫外检测时,有助于提高信噪比.