人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性?这句话对还是错?请说明一下原因?

（1）图中②是以mRNA为模板合成DNA的逆转录过程，需要逆转录酶的参与．（2）①是获取胰岛素mRNA的过程，由于基因是选择性表达的，人的肝细胞中不转录出胰岛素mRNA，因此不能利用人的肝细胞来完成①过程．（3）⑧是将...

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题结合利用基因工程技术生产胰岛素的操作过程示意图，考查基因工程、细胞分化等知识，要求考生识记基因工程的工具及操作步骤，能准确判断图中各过程或物质的名称；识记细胞分化的概念，掌握细胞分化的实质，明确胰岛素基因只在胰岛B细胞中表达，再运用所学的知识答题．

（1）根据题干信息“所用的人胰岛素基因是依据植物偏爱的密码子来设计所含的密码子，通过人工合成若干DNA片段，拼接而成”可知，上述基因工程操作是采用人工合成方法获得目的基因的．由于密码子具有简并性，因此获得的人胰岛素基因与人体细胞中胰岛素基因中编码氨基酸的碱基序列不同，但两者所编码的蛋白质中氨基酸序列相同．PCR技术可在体外大量扩增目的基因；由于PCR技术在较高的温度下进行，因此该技术中使用的关键酶是热稳定性DNA聚合酶（或Taq酶）．
（2）根据题干信息可知，该过程中采用了农杆菌转化法，其原理是农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上．根据农杆菌的这一特点，如果将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上，通过农杆菌的转化作用，就可以把目的基因整合到植物细胞中染色体的DNA上．基因表达载体包括启动子、目的基因、标记基因和终止子．
（3）检测受体细胞中是否存在目的基因可采用DNA分子杂交技术．该技术中使用的基因探针也可以用来检测目的基因是否转录出mRNA．
故答案为：
（1）人工合成 密码子具有简并性，基因序列不同，蛋白质可以相同 PCR 热稳定性DNA聚合酶（或Taq酶）
（2）农杆菌的Ti质粒 T-DNA ①③⑤⑥
（3）DNA分子杂交 目的基因是否转录出mRNA

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题以利用转基因番茄作为生物反应器生产人胰岛素为题材，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作步骤及应用，能结合题中信息准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查．

大肠杆菌能大量生产治疗糖尿病的药物胰岛素，运用的是转基因技术，把人胰岛素基因注入大肠杆菌体内，可以通过大肠杆菌生产胰岛素，之所以选择把细菌作为基因工程的受体细胞，原因有两个：首先细菌繁殖较快，基因简单，其次能够在较短时间内通过细菌的大量繁殖来获得所需要的产品．此方法属于转基因技术．
故选：A

点评：
本题考点： 转基因技术的应用．

考点点评： 掌握现代生物技术的范围和转基因技术的应用是解答此类题目的关键．

（1）逆转录过程获得DNA需要逆转录酶和DNA聚合酶，将目的基因导入细菌的方法是钙离子转化法．
（2）由于基因C的表达产物会阻断Tet^r基因表达，所以需要破坏基因C但不能破坏Tet^r基因，所以选用Bg1Ⅰ、HindⅢ进行切割．DNA连接酶连接的化学键是磷酸二酯键．标记基因是四环素抗性基因，所以在含有四环素的培养基上培养农杆菌．
（3）愈伤组织细胞的特点是具有分生能力的薄壁细胞，检验目的基因在烟草细胞中是否成功表达的方法是抗原-抗体杂交．
答案：（1）逆转录酶和DNA聚合酶 钙离子转化法
（2）Bg1Ⅰ、HindⅢ人胰岛素基因和质粒 磷酸二酯键 四环素
（3）具有分生能力的薄壁细胞 抗原-抗体杂交

点评：
本题考点： 基因工程的应用．

考点点评： 本题考查基因工程，解题关键：①理解基因工程操作过程．②能理解题意“基因C”的作用和 基因表达载体的构建方法．

（1）基因工程的操作步骤：目的基因的获取→基因表达载体的构建→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测和鉴定．
（2）⑦是基因表达载体的构建过程，该过程首先需用限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，还需要用DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组质粒．基因表达载体的组成包括启动子、目的基因、终止子和标记基因．
（3）由于皮肤细胞中的胰岛素基因未表达，不能形成胰岛素mRNA，因此不能利用人的皮肤细胞来完成①过程．
故答案为：
（1）目的基因的检测和鉴定
（2）限制性内切酶、DNA连接酶 终止子标记基因
（3）不能皮肤细胞中的胰岛素基因未表达，不能形成胰岛素mRNA．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题结合利用基因工程技术生产胰岛素的操作过程示意图，考查基因工程、细胞分化等知识，要求考生识记基因工程的工具及操作步骤，能准确判断图中各过程或物质的名称；识记细胞分化的概念，掌握细胞分化的实质，能结合所学的知识准确答题．

（1）①是获取胰岛素mRNA的过程，由于基因是选择性表达的，人的肝细胞中不转录出胰岛素mRNA，因此不能利用人的肝细胞来完成①过程．
（2）②为逆转录过程，需要逆转录酶的参与；④是DNA的复制过程，该过程需要DNA聚合酶的参与．
（3）构建基因表达载体的过程中，必须用相同的限制酶切割A（含目的基因的外源DNA分子）和B（运载体）以产生相同的黏性末端，再加入DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成C（重组DNA分子）．
（4）⑧是将目的基因导入受体细胞的过程，当受体细胞是微生物细胞时，常采用感受态细胞法，即用CaCl₂处理微生物细胞使其成为易于吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞，从而将目的基因导入受体细胞．
故答案为：
（1）肝细胞中的胰岛素基因未表达（或未转录），不能形成胰岛素mRNA
（2）逆转录DNA聚合
（3）同一种限制性内切酶相同的黏性末端DNA连接酶
（4）CaCl₂

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题结合利用基因工程技术生产胰岛素的操作过程示意图，考查基因工程、细胞分化等知识，要求考生识记基因工程的工具及操作步骤，能准确判断图中各过程或物质的名称；识记细胞分化的概念，掌握细胞分化的实质，明确胰岛素基因只在胰岛B细胞中表达，再运用所学的知识答题．

A、基因工程的步骤为：获取目的基因、构建基因表达载体、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定，其中基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤，A正确；
B、胰岛素基因在人体皮肤细胞中不表达，不能形成胰岛素mRNA，因此不能利用人的皮肤细胞来完成①过程，B错误；
C、②为逆转录过程，需要逆转录酶，③为解旋过程，需要解旋酶，C正确；
D、在利用AB获得C的过程中，必须用同一种限制性内切酶切割A和B，使它们产生相同的黏性末端，再加入DNA连接酶才可形成C，D正确．
故选：B．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题结合利用基因工程技术生产胰岛素的操作过程示意图，考查基因工程、细胞分化等知识，要求考生识记基因工程的工具及操作步骤，能准确判断图中各过程或物质的名称；识记细胞分化的概念，掌握细胞分化的实质，明确胰岛素基因只在胰岛B细胞中表达，再运用所学的知识答题．

（1）根据题干信息“所用的人胰岛素基因是依据植物偏爱的密码子来设计所含的密码子，通过某方法合成若干DNA片段，拼接而成”可知，本专利是采用人工合成方法获得目的基因．由于密码子具有简并性，即使基因序列不同，但其控制合成的蛋白质可以相同，因此获得的人胰岛素基因与人体细胞中胰岛素基因的碱基序列不同，但两者所编码的蛋白质中氨基酸序列相同．PCR技术可以在体外大量扩增目的基因片段，PCR技术是在较高温度环境中进行的，因此该技术中使用的关键酶是热稳定性DNA聚合酶（或Taq酶）．
（2）根据题干信息“通过农杆菌介导的方法”可知，转基因操作时所用的载体是农杆菌的Ti质粒，载体上的T-DNA可以转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上．
（3）要检测在受体细胞中是否存在目的基因，可采用DNA分子杂交技术；将转基因受体细胞培育成转基因植株，可采用植物组织培养技术．
故答案为：
（1）人工合成密码子具有简并性，基因序列不同，蛋白质可以相同PCR热稳定性DNA聚合酶（或Taq酶）
（2）农杆菌的Ti质粒T-DNA
（3）DNA分子杂交组织培养

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题以“利用转基因番茄生产人胰岛素的方法”的专利摘要为题材，考查基因工程和植物细胞工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，识记植物组织培养的原理及应用，能结合题中信息准确答题．

大肠杆菌能大量生产治疗糖尿病的药物胰岛素，运用的是转基因技术，把人胰岛素基因注入大肠杆菌体内，可以通过大肠杆菌生产胰岛素，之所以选择把细菌作为基因工程的受体细胞，原因有两个：首先细菌繁殖较快，基因简单，其次能够在较短时间内通过细菌的大量繁殖来获得所需要的产品．
故选：D．

点评：
本题考点： 转基因技术的应用．

考点点评： 掌握现代生物技术的范围和转基因技术的应用是解答此类题目的关键．