PCR和实时荧光定量PCR这两种有什么区别?

实时定量的引物设计要求比较高,可以按普通引物设计的方法来做,但是设计时要注意扩增的片段不能太大,最好在250bp-100bp之间.同时要保证这对引物有绝对的特异性,因为要是产生非特异性扩增的话,就不能准确的计量模板量了,这样就失去了实时定量的意义了

显然用荧光定量PCR（qPCR）.mRNA荧光差异显示技术是在qPCR技术广泛应用之前,比较mRNA水平上基因表达差异的一种方法,可以说已经过时了,尤其是在你有条件做qPCR的情况下.mRNA荧光差异显示技术的前几步就是用Oligo dT做总mRNA逆转录,转成cDNA后,用特异性带荧光标记的引物扩增目标DNA,测定表达水平.其实qPCR的原理与之基本一致,只是在测量荧光表达时用机器定量测定,更加准确.

1、HBV-DNA

探针附带的说明单子上有说明的 ,有说加多少灭菌水或TE可以变成100uM的母液

有乙型肝炎,浓度比较高,最好是要吃药,可据临床观察吃药效果不是很好,你平时应该注意不要太劳累,太过喝酒,打通宵

我们课题组和威斯腾生物合作比较多,有的实验室条件有限做不了的实验,我们都是联系他们帮我做,他们有自己的实验室,还可以全程参与,这样也对实验结果放心些.

1纳摩尔（nmol）=1000皮摩尔（pmol）
9.96nmol/X=100pmol/ul
解出X=99.6ul
答：加入100微升vddH20
PS.一般我们买回引物,管它那么多,都加100微升水用着,没啥问题- -

小说的文字有很多都不是最准确的,既然上面写的是“实时”,那么就应该是实时荧光定量PCR,否则普通PCR做不到“实时”.所以是一回事.

包括绝对定量和相对定量

有的可以通用,但是大多数的时候不能,需要重新设计,我公司可以带你设计引物,如果在我公司订购试剂,可以免费设计,南京骥骜生物,电话：025-84865584,

原理不同：荧光定量pcr实时监测与dna结合的荧光染料激发的荧光；普通pcr通过检测插入dna中核算染料的量来测定pcr最终产物量,一般是紫外光.
反应要求：荧光定量对扩增片段有较高的要求,一般为100-300bp；普通定量可以扩增长点的片段.如果不需要检测产物分子量大小,荧光定量可以不进行电泳就对产物进行定量分析,普通pcr必须电泳.
结果：荧光定量可以实现精确定量,普通pcr则不行.荧光定量体现可以看到整个扩增过程,可以看到扩增效率,溶解温度,直接得到的标准曲线等,这些是普通pcr无法实现的.
如果还不清楚建议去丁香园等网站逛逛,希望可以帮到你

你盖紧了盖子不等于就盖紧了PCR管.可能你用的是国产的PCR管吧.通常国产的质量稍差,本身就是密封不严的.也就是说PCR管口不够严密,盖上PCR管子的盖,也不能完全密封.这样即使你怎么使劲盖,也没有用.要解决蒸发的问题,有两个办法,一个是用进口管,可以有效的减少蒸发,但如果你体系做得太小,比如5微升,那么蒸发可能还是比较明显.另一个办法就是还用你原来的PCR管子,但是把体系加大!比如你原来做15微升,现在改到做30微升,保证即使蒸发了也能够你用!
PCR反应有气泡很可能是因为你把PCR管放入PCR仪之前没有离心!通常我们会瞬离一下,把气泡离掉!PCR反应是不可能产生气泡的,因为只是简单的加热,降温的变化,没有达到沸腾.如果有气泡的话得看你的体系有多大,如果太小,是会有影响的.另外你可以在设置PCR程序是稍微把体系设置大一点,比如你做30微升体系,你就设置成40微升.
希望我的回答能令你满意.

实时定量目的就在于测定样品mRNA水平的含量啊!要获取扩增反应之初的模板量,必然要先提取总RNA,用多聚T引物将全部的mRNA反转录得到cDNA作为模板,再通过后续检测得出结果.

上下游引物位于内含子两端的外显子上

参照以下real-time PCR引物设计原则：
1.最好位于编码区5’端的300-400bp区域内,可以用DNAman,Alignment 软件看看结果.
2.产物不能形成二级结构（自由能小于58.61KJ/mol）.
3.引物长度一般在17-25碱基之间,上下游引物不能相差太大.
4.G+C含量在40%~60%之间,45-55％最佳.
5.碱基要随机分布,尽量均匀.
6.引物自身不能有连续4个碱基的互补.
7.引物之间不能有连续4个碱基的互补.
8.引物5′端可以修饰.
9.3’端不要以A结尾,3′端不可修饰,而且要避开AT,GC rich的区域,避开T/C,A/G连续结构（2-3个）.
10.引物3′端要避开密码子的第3位.
11.引物整体设计自由能分布5‘端大于3’端,且3‘端自由能最好小于9KJ/mol.可用oligo 6 软件进行比对看结果的情况.
12.做荧光定量产物长度80-150bp最好,最长是300bp.
13.引物设计避免DNA污染,最好跨外显子接头区.
14.引物与非特异性扩增序列的同源性最好小于70％或者有8个互补碱基同源.
15.查看有无假基因的存在.假基因就是无功能的DNA序列,与需要扩增的目的片段长度相似.
16.TM值在55-63度之间.
17..引物与非特异性扩增序列的同源性最好小于70％或者有8个互补碱基同源.

聚合酶链式反应 ( PCR) 可对特定核苷酸片断进行指数级的扩增 .在扩增反应结束之后,我们可以通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行定性的分析,也可以通过 放射性核素掺入标记后的光密度扫描来进行定量的分析 .无论定性还是定量分析,分析的都是 PCR 终产物.但是在许多情况下,我们所感兴趣的是未经 PCR 信号放大之前的起始模板量.例如我们想知道某一转基因动植物转基因的拷贝数或者某一特定基因在特定组织中的表达量.在这种需求下荧光定量 PCR 技术应运而生.所谓的实时荧光定量 PCR 就是 通过对 PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析.在实时荧光定量 PCR 反应中,引入了一种荧光化学物质,随着 PCR 反应的进行,PCR 反应产物不断累计,荧光信号强度也等比例增加.每经过一个循环,收集一个荧光强度信号,这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图.

异同?我觉得还是看你用的机器和试剂盒吧,主要是那个聚合酶的要求.有的推荐两步法,有的推荐三步法.比如,ABI,roche都推荐两步法,tiangen的推荐三步法.我觉得,如果引物设计时的Tm值如果接近60度（比如用ABI的primer exp...

sd是标准偏差

病毒定量属于低载量低复制状态,如果不是肝硬化病人,目前不需要治疗,但要定期复查.