双缩脲法测定蛋白质含量需注意哪些问题?
BILL_corn2022-10-04 11:39:542条回答
双缩脲法测定蛋白质含量需注意哪些问题?
哪些情况下会造成误差?
哪些情况下会造成误差?
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- sultana 共回答了19个问题
|采纳率84.2% - 0.1g/mL的 NaOH 0.01g/mL CuSO4 先加 NaOH 造成碱性环境,约2mL 再加CuSO4,不能加多 3、4滴左右.太多CuSO4 的蓝色会对紫色实验结果造成影响.还有如果用蛋清,必须稀释,否则影响效果,实验后还会粘住试管壁.若用豆浆,也要稀释的清淡一些,效果才会好.~~
- 1年前
- jammypl 共回答了4个问题
|采纳率 - 先加碱,创造碱性环境,浓度也要注意~~
- 1年前
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双缩脲的原理
我是想对原理有深一步的理解.
因为
双缩脲法的原理双缩脲(NH2-CO-NH-CO-NH2)在碱性溶液中可与铜离子产生紫红色的络合物.
那么
如果我不加入硫酸铜,是否蛋白质也要和双缩脲试剂产生络合反映呢?是否也会增大吸光度呢?笨燕子1年前3 -
求求子 共回答了17个问题
|采纳率100%此鉴定反应叫双缩脲反应是因为双缩脲即你已知的(NH2-CO-NH-CO-NH2)在碱性溶液中可与铜离子产生紫红色的络合物.用该反应能鉴定蛋白质是因为蛋白质分子结构中有与双缩脲相同的结构-CO-NH-,那么你加入双缩脲A即NaOH溶液只是为蛋白质提供了一个碱性环境,但不加入双缩脲试剂B即铜离子的话,当然不会发生络合反应.因为正如原理所说碱性溶液和铜离子缺一不可.1年前查看全部
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downstar1年前1
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小猫睡懒觉 共回答了18个问题
|采纳率88.9%folin酚试剂法测定蛋白质含量是最灵敏的方法之一.此法的显色原理与双缩脲方法是相同的,只是加入了第二种试剂,即Folin—酚试剂,以增加显色量,从而提高了检测蛋白质的灵敏度.这两种显色反应产生深蓝色的原因是:在碱性条件下,蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物.Folin—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原,产生深蓝色(钼兰和钨兰的混合物).在一定的条件下,蓝色深度与蛋白的量成正比.
这个测定法的优点是灵敏度高,比双缩脲法灵敏得多.缺点是费时间较长,要精确控制操作时间,标准曲线也不是严格的直线形式,且专一性较差,干扰物质较多.对双缩脲反应发生干扰的离子,同样容易干扰folin-酚反应(Lowry反应).
双缩脲法是一个用于鉴定蛋白质的分析方法.双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液,呈蓝色,由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制.当底物中含有肽键时(多肽),试液中的铜与多肽配位,配合物呈紫色.可通过比色法分析浓度,在紫外可见光谱中的波长为540nm.鉴定反应的灵敏度为5-160mg/ml.1年前查看全部
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风中的钟声1年前1
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micky_0084 共回答了19个问题
|采纳率89.5%Folin—酚试剂法最早是由Lowry确定的测定蛋白质浓度的基本方法.以后在生物化学领域得到广泛的应用.此法的显色原理与双缩脲方法是相同的,只是加入了第二种试剂,即Folin—酚试剂,以增加显色量,从而提高了检测蛋白质的灵敏度.
Folin—酚试剂由甲试剂和乙试剂组成.甲试剂由碳酸钠,氢氧化钠,硫酸铜及酒石酸钾钠组成.蛋白质中的肽键在碱性条件下,与酒石酸钾钠铜盐溶液起作用,生成紫红色络合物.乙试剂是由磷钼酸和磷钨酸、硫酸、溴等组成.此试剂在碱性条件下,易被蛋白质中酪氨酸的酚基还原呈蓝色反应,其色泽深浅与蛋白质含量成正比.
由此可见是它们的显色灵敏度不同造成的.1年前查看全部
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态度是困难 共回答了21个问题
|采纳率90.5%用温水焯一遍,50多度,时间不要太长.5到10分钟为宜1年前查看全部
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zz1年前1
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魔鬼44 共回答了27个问题
|采纳率81.5%不可以的.双缩脲法是蛋白质的定性方法.
根据它的原理,必须得存在2个肽键以上的蛋白质才能起反应.
氨基酸在没有形成肽键前是不能起双缩脲反应的.1年前查看全部
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有A B液的版本上B液是没有酒石酸钾钠的,但是AB事先混合的是有酒石酸钾钠的,是不是这样的话就都可以SF32A1年前2 -
瑕雨无所谓 共回答了25个问题
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先将双缩脲试剂A加入组织样液,振荡均匀(必须营造碱性环境),再加入双缩脲试剂B,振荡均匀.如果组织里含有蛋白质,那么会看到溶液变成紫色1年前查看全部
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slyvan 共回答了20个问题
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