限制性核酸内切酶酶切后,再用连接酶连接,同一限制性内切酶酶切位点还能否产生?

A、图中①④是同一种限制酶切割形成的，因此以上DNA片段是由4种限制酶切割后产生的，A错误；
B、DNA连接酶可将具有相同末端的DNA片段连接起来，B正确；
C、图中①④具有相同的黏性末端，可被DNA连接酶连接形成，C正确；
D、限制酶和DNA连接酶作用的部位都是磷酸二酯键，其中限制酶能将磷酸二酯键切断，而DNA连接酶能将磷酸二酯键连接起来，D正确．
故选：A．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题结合几种不同限制性核酸内切酶切割DNA分子后形成的部分片段，考查基因工程的相关知识，重点考查基因工程的工具，要求考生识记限制酶的特点及作用部位；识记DNA连接酶的作用，能根据图中信息准确判断各选项．

A、由于Y表示C或T，R表示A或G，说明一种限制性核酸内切酶能识别一种或多种特定的脱氧核苷酸序列，A错误；
B、限制酶的切割位点不一定在识别序列的内部，如Sau3A，B错误；
C、不同限制酶切割后形成的黏性末端不一定相同，如EcoRⅠ、HindⅡ、KPn、Sma切割后形成的黏性末端各不相同，而BamHⅠ和Sau3AⅠ切割后形成的黏性末端相同，C错误；
D、限制酶切割后不一定都形成黏性末端，也有平末端，如HindⅡ、Sma，D正确．
故选：D．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题结合限制酶的识别序列和切割位点，考查限制酶的相关知识，意在考查考生从表中获取有效信息的能力；识记能力和理解所学知识要点的能力．

A、SmaⅠ切割位点为CCC↓GGG，形成的是平末端，A正确；
B、Sau3AⅠ的切割位点位于识别序列的一侧，B错误；
C、BamHⅠ和Sau3AⅠ切割后形成的相同的黏性末端，C错误；
D、因为Y=C或T，R=A或G，所以HindⅡ限制酶可识别多种序列，D错误．
故选：A．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题考查限制酶的作用，考查学生分析图形和从图中获取信息的能力．

A、将目的基因从外源DNA上切割出来，A错误；
B、限制酶能识别并切割特定的DNA核苷酸序列，形成黏性末端和平末端，B正确；
C、DNA连接酶将目的基因与运载体结合，即连接的是连个核苷酸之间的磷酸二酯键，C错误；
D、运载体将目的基因导入受体细胞，D错误．
故选：B．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题考查限制酶的功能，意在考查学生识记和理解限制酶、DNA连接酶和运载体的功能，属于中档题．

A、BamHⅠ酶在目的基因的1处和3处有切割位点，因此目的基因两端将被切割成相同的黏性末端，这将会导致自身环化，A错误；
B、EcoRⅠ酶只在目的基因的2处有切割位点，只用这一种酶无法切割目的基因，B错误；
C、表格中可以看出，BamHⅠ酶和EcoRⅠ酶识别序列和切割位点不同，并且EcoRⅠ酶的切割位点在2处，即两种酶处理后目的基因的2处和3处被切割，并形成不同的黏性末端，可以防止目的基因自身环化，C正确；
D、PstⅠ酶的切割位点在4处，即不影响BamHⅠ酶3处的切割位点，因此用这三种酶处理后，目的基因仍在2处和3处被切割，因此可以防止目的基因的自身环化，D正确．
故选：CD．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题具有一定的难度，属于考纲中理解层次的要求，着重考查了限制酶的特点及应用，在基因工程中，一般为防止质粒或目的基因自身环化，一般选择不同的限制酶分别切割目的基因和质粒，以形成不同的黏性末端．

A、反转录酶能催化反转录过程，但其作用部位不是磷酸二酯键，A错误；
B、RNA聚合酶的作用是催化转录形成RNA，能形成RNA上的磷酸二酯键，而限制酶是作用于DNA上的磷酸二酯键，B错误；
C、DNA连接酶连接的是两个DNA片段之间的磷酸二酯键，作用于与限制性核酸内切酶相对的部位，C正确；
D、DNA解旋酶能解开双链DNA，破坏的是碱基对之间的氢键，D错误．
故选：C．

点评：
本题考点： DNA分子结构的主要特点；DNA分子的复制．

考点点评： 本题考查限制性核酸内切酶和DNA连接酶的作用部位，此题容易混淆，需要考生具备比较扎实的基本知识，明确反转录酶、RNA聚合酶、DNA连接酶、DNA解旋酶和限制酶的作用部位，并进行区分，选出正确的答案，属于考纲识记和理解层次的考查．

A、该片段具有两个EcoRⅠ酶的酶切位点，用EcoRⅠ酶切割会得到200bp和800bp两种长度的DNA分子，故A符合题意；
B、该片段具有一个EcoRⅠ酶的酶切位点，具有两个KpnⅠ酶的酶切位点，切割结果完全题中结果，故B不符合题意；
C、该片段在KpnⅠ酶的一种酶切割下会获得200bp和600bp两种长度的DNA分子，故C符合题意；
D、该片段在EcoRⅠ酶的一种酶切割下会获得200bp和800bp两种长度的DNA分子，故D符合题意．
故选：ACD．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题通过图解考查了限制酶切割位点及结果等知识，意在考查考生能分析图中酶切位点、并理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力．

A、如果用BglⅡ和Sau3A I切割目的基因，目的基因两端将形成不同的黏性末端，同样用BglⅡ和Sau3A I切割Pl噬菌体载体也形成这两种相同的黏性末端，因此它们可构成重组DNA，故A正确；
B、由于Sau3A I的切割位点在EcoR I的左侧，因此用EcoR I和Sau3A I切割目的基因，目的基因两端将形成不同的黏性末端，同样用BglⅡ和Sau3A I切割Pl噬菌体载体也形成这两种相同的黏性末端，因此它们可构成重组DNA，故B正确；
C、P1噬菌体载体为环状DNA，其上只含有一个SmaⅠ的切点，因此用EcoR I切割后，该环状DNA分子变为线性双链DNA分子，因每条链上含有一个游离的磷酸基团，因此切割后含有两个游离的磷酸基团，故C正确；
D、从图甲看出，用EcoR I切割目的基因后两端各有一切口，与图乙中EcoR I切口对接时，可有两种可能，即可产生两种重组DNA，故D错误．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题考查基因工程的相关知识，意在考查考生获取图示信息的能力、审题能力以及分析能力；能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力．

分析图解可知，限制酶Ⅰ在该质粒上有三个限制酶切点，限制酶Ⅱ在该质粒上只有一个酶切位点，如果同时用两种限制酶切割，质粒将会切割形成四种片段，即200（酶Ⅰ和酶Ⅱ切割，黏性末端不同）、200（酶Ⅰ切割，黏性末端相同）、80（酶Ⅰ切割，黏性末端相同）、50（酶Ⅰ和酶Ⅱ切割，黏性末端不同）．
用DNA连接酶处理，要求得到的质粒碱基数目最少，则为形成的片段自身连接，要求具有相同的黏性末端，因此得到的质粒碱基数目最少为80个．
故选：B．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题考查了基因工程的有关知识，要求考生能够掌握限制酶和DNA连接酶的作用特点；能够结合题意和图解判断切割形成的片段类型；再根据DNA连接酶的作用特点进行判断，难度适中，属于考纲中理解、应用层次的考查．

根据题意可知，线性DNA含有限制性核酸内切酶EcoR I的1个酶切位点，因此经过该酶切割后会形成两个相同的黏性末端，但是黏性末端两侧的序列不同，可以分别用a和b表示．
由于a和b具有相同的黏性末端，因此利用DNA连接酶催化后，能够产生aa连接、bb连接、ab连接三种产物．
故选：C．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题考查基因工程的原理及技术，要求考生掌握基因工程的工具酶，重点掌握限制酶和DNA连接酶的特点及作用，明确DNA连接酶能够连接相同的黏性末端，最后选出正确的答案，考生易错选A项．

A、限制酶作用的化学键都是磷酸二脂键，故A正确；
B、由图可以看出a酶和b酶切割后产生的粘性末端相同，它们之间能相互连接，故B错误；
C、a酶可以把原有DNA切成4段，说明有该DNA分子上有3个切口，即a酶的识别序列有3个；b酶把大小是2100的DNA切成大小分别为1900和200两个片段，再把大小是1400的DNA切成大小分别为800和600两个片段，说明b酶在该DNA分子上有2个切口，即b酶的识别序列有2个，故C正确；
D、b酶的识别序列至少有2个，仅用b酶切割该DNA分子至少可得到三种DNA片段，故D正确．
故选B．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题结合图表，考查限制性核酸内切酶的相关内容，意在考查考生获取图示信息的能力、分析能力和理解判断能力，属于中等难度题．

限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，即限制性内切酶进行的是DNA的剪切．
故选：A．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题知识点简单，考查基因工程的相关知识，重点考查基因工程的操作工具，明确限制酶的作用是剪切DNA，再根据题干要求作出准确的判断，属于考纲识记层次的考查．

A、反转录酶能催化反转录过程，但其作用部位不是磷酸二酯键，A错误；
B、RNA聚合酶的作用是催化转录形成RNA，能形成RNA上的磷酸二酯键，而限制酶是作用于DNA上的磷酸二酯键，B错误；
C、DNA连接酶连接的是两个DNA片段之间的磷酸二酯键，作用于与限制性核酸内切酶相对的部位，C正确；
D、DNA解旋酶能解开双链DNA，破坏的是碱基对之间的氢键，D错误．
故选：C．

点评：
本题考点： DNA分子结构的主要特点；DNA分子的复制．

考点点评： 本题考查限制性核酸内切酶和DNA连接酶的作用部位，此题容易混淆，需要考生具备比较扎实的基本知识，明确反转录酶、RNA聚合酶、DNA连接酶、DNA解旋酶和限制酶的作用部位，并进行区分，选出正确的答案，属于考纲识记和理解层次的考查．

A、一种限制酶能识别某种特定的脱氧核糖核苷酸序列，A错误；
B、酶的作用条件温和，其活性受温度、pH的影响，B正确；
C、限制性核酸内切酶能识别特定的核苷酸序列，并在特定的脱氧核苷酸之间切割磷酸二酯键，C正确；
D、限制酶主要来源于原核生物，D正确．
故选：A．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题考查基因工程的原理及技术，重点考查限制酶的相关知识，要求考生识记限制酶的来源、特点及作用，能结合所学的知识准确判断各选项，属于考纲识记层次的考查．

由于该DNA分子为环状，此时分三种情况讨论：
只被其中一种酶切割：无论被那种酶切割，均是长度为1的环状变成长度为1的链状；
被其中两种酶切割：AB切割，产生0.3和0.7长度的线状DNA；AC切割，产生0.2和0.8长度的线状DNA；BC切割，产生两个0.5长度的线状DNA；
被三种酶同时切割时，产生0.2、0.3、0.5三种不同长度的线状DNA．
综上所述，这些DNA分子最多能产生：0.2、0.3、0.5、0.7、0.8、1六种长度不同的线状DNA．
故选：D．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题考查了基因工程的工具酶，意在考查考生的分析能力和综合运用能力，难度适中．解题关键是考生能够根据题意分三种情况讨论切割产生的不同长度的片段，然后综合三种情况进行相加即可．