碱裂解法提取的质粒DNA琼脂糖凝胶电泳应该是什么样的?

jade10012022-10-04 11:39:542条回答

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leetaotao 共回答了11个问题 | 采纳率90.9%
一般都有3条带.据推测跑在最前边的是cccDNA(共价闭合环),中间的是OC(开环),最后的有点拖带,稍宽,早期多认为是线状的,但后来专家认为断链质粒发生几率很低,形不成条带,因此现在一般认为是处于复制过程中的1.5倍左右的条带.
以上均为推测,每人真的去证明.
但若将质粒提取液单酶切,将会得到整齐的一条带.我实验室经常用这种方法估计质粒的纯度.
1年前
yxbmm 共回答了2个问题 | 采纳率
提的好的话会是一条单一的条带,是超螺旋结构。有时会是两条带或三条带,就要看提的质量了。
1年前

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shirley1227 共回答了14个问题 | 采纳率85.7%
1)选择分子量 跟你的质粒接近的marker,最理想的是包含质粒分子量在内,但据我所知没有这样的marker.
2)你这个电泳图上样量太大了,一方面条带不整齐难以判断,另一方面你干嘛要纠结于几条带呢?一般说是3条带也是理论上的,但实际上,在菌体内复制的质粒就是一个连续的状态,什么样都有,电泳结果就可能造成条带的局部涂布.
所谓的三条带解释没有定论,现在一般认为是超螺旋、复制型(处于复制的半开环状态,即眼结构)和开环DNA(一条链断了),早先认为的 线状DNA后来被否,因为质粒很不容易断裂成线状的.顺序应该是超螺旋在最前边,开环在后边.
凭经验,我估计你的超螺旋和复制型合并成你那个粗的涂抹带了,后边那个细的是少量的开环DNA.
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Alkaline denatured bacterial chromosomal DNA and most of RNA,since they are much much bigger than plasmid DNA.Plasmid is still soluble and is in the solution under the same condition.Proteins also get denatured,also,chromosomal DNA is linked to the bacterial proteins,therefore they all are precipitated when you include the 3 M potassium acetate.
The principal is that alkaline denatures proteins,chromosomal DNA and most of RNA,but leave plasmid in the solution,then potassium acetate precipitates those denatured materials.Finally,alcohol (usually isopropanol ) is used to precipitate plasmid DNA.Plasmid DNA is obtained.
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风如一叶 共回答了14个问题 | 采纳率92.9%
还有可能是你的琼脂糖凝胶浓度太高了,浓度越高,分子筛效应越大,质粒又比较大,当然容易拖尾了.其次也可能是你的电泳电压过大;还有就是RNA污染,你提完质粒后没有用RNase降解,不过这就不叫拖尾了,称作有杂带.
至于注意事项,你搞清每一步的原理后自己仔细想想就知道了.时刻记住不要让质粒因为机械损伤而打断,不要让质粒被降解,尽量除去质粒内残存的乙醇,因为这会对接下来的酶切造成很大的影响.
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