配胰酶 用edta二钠盐可以么实验室的配方是1000ml+EDTA四钠盐 1.522g或者2.0g但是现在找不到四钠盐

博凌科为生物科技-为你胰酶使用注意：1、在使用胰酶细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染.2、胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长,否则细胞铺板后生长状况会较差.贴壁细胞的消化：1、吸去培养液,用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清2、加入少量胰酶细胞消化液,略盖过细胞即可,根据胰酶效率差异可以增加惑减少胰酶用量.室温放置30秒至2分钟（不同的细胞消化时间有所不同）3、显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化呈白茫状；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来.4、此时吸除胰酶细胞消化液.加入含血清的完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验如果发现消化不足,则加入胰酶细胞消化液重新消化.如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落,直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来.1000-2000g离心1分钟,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验.常用的细胞消化液为胰蛋白酶（Trypsin）,EDTA等,其功能主要是使细胞间的蛋白质（如细胞外基质）水解,改变细胞间的连接,使组织或细胞片分散成单个细胞,制成细胞悬液用于进一步的实验.影响消化速度的因素较多,主要有胰酶溶液的活性（配制条件、冻存或4℃保存时间长短、是否反复冻融、化冻后存放时间及温度等）、消化时的温度（气温、细胞培养瓶及胰酶溶液的温度）以及所加胰酶溶液的多少等 .加入胰蛋白酶-EDTA溶液,视细胞瓶的大小加入体积为2ml或更多（依培养器皿的大小而定）,以使充分浸润；一般消化时间约为1至3分钟,肉眼观察瓶底由半透明（细胞单层连接成片）转为透明、点状（出现细小空隙）时,弃去细胞消化液,或看见培养瓶壁呈白茫 状即可.并加入适量的完全培养液终止消化,吹打分散；如见大量细胞片状脱落,已消化过头,则不能顷倒消化液而直接进行下一步操作.（消化过头,可造成大量 细胞从瓶壁上脱下,甚至造成细胞破碎.由于血清含有非特异性胰蛋白酶抑制剂,所以加入完全培养基可以终止反应.胰酶配置方法：1、培养液配制,方便好用,对细胞影响小,并且培养液的ph值正好适合胰蛋白酶的溶解2、生理盐水配制,要先调ph值7.2到7.4（①胰酶（1：250） 2.5 克②EDTA-Na 0.3克③NaCl 8.0克④KCl 0.4克⑤Glucose 1.0克⑥Phenol Red 0.005克⑦Water 1000 mL磁力搅拌2-3小时,调pH 7.8-8.0,过滤除菌.）3、pbs（0.1%胰酶溶液的配制：称取胰酶粉末0.1g,先用少许灭菌过的PBS调成糊状,然后补足到100ml.置室温搅拌4小时或冰箱内过 夜,过滤灭菌,分装,4℃保存备用.）; 或是hanks或是D-hanks液配制（1.称取胰蛋白酶粉末置烧杯中,先用少许D-Hanks 平衡盐溶液（pH7.2 左右）调成糊状,然后再补足D-Hanks 平衡盐溶液,搅拌混匀,置室温4 小时或冰箱过夜,并不断搅拌振荡；2.次日,先用滤纸粗滤,再进行过滤除菌,分装入瓶中,低温冰箱保存备用,常用浓度为0.25% 或0.125%.胰蛋白酶溶液偏酸,使用前可调用碳酸氢钠溶液调pH 至7.2 左右.）一般0.45微米的一次性滤器过滤除菌,至于作用效果,需要消化一次细胞感觉一下,因为不同厂家的酶不一样,有的作用温和,有的作用剧烈.4、是否需要四度放置过夜,取决于你的胰酶的纯度.过去的胰酶纯度不高,所以难以溶解,需要四度过夜.而现在的胰酶纯度都很高,就没有必要四度过夜.从理论上来说,四度放置过夜,给细菌生长的机会,尽管过滤可以出去细菌,可是出不掉其代谢产物.胰蛋白酶不溶,有絮状物的原因,考虑有：1、过期或是酶已经部分变性2、溶液ph值不对3、在没过滤之前的絮状沉淀是正常现象,因胰酶多取自动物胰腺,沉淀为组织块,过滤后即可

植物细胞不能用胰酶-EDTA消化,要用纤维素酶消化.
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应该是肿瘤细胞吧.正常的细胞,貌似都需要用胰酶或者胶原酶消化.
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EDTA-胰酶 不是常规的胰酶
楼主,你误解这个EDTA的作用了.EDTA-胰酶,只不过是在胰酶里加入了EDTA而已.
EDTA是乙二胺四乙酸,一种金属螯合剂.一般和胰蛋白酶配合使用.原因在于,钙,镁等金属离子会降低胰酶活力,故在使用胰酶消化液时要配合加入EDTA.它可以螯合这些离子,消除对胰酶的抑制.

组织是多细胞的,胰蛋白酶处理后,形成分散的多细胞,也就是分散成单个细胞了,便于制备细胞悬浮液

要看你加了多少PBS洗液,多了的话最好重新传代一次,少一点应该没什么问题,因为PBS洗液只是缓解溶液PH值,再就是除杂质.如果实验结果不重要还可以看看会有什么变化,再和我交流一下.非常欢迎一起讨论.

胰蛋白胨,又称胰酪蛋白胨（Casein Tryptone）、胰酶消化酪蛋白胨（Pancreatic digest of casein）,是一种优质蛋白胨,是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化,浓缩干燥而成的浅黄色粉末.

胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶,血清中含抗凝血酶Ⅲ,是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂.因此血清可抑制对胰戴白酶的消化作用.而胰脂肪酶的催化部位主要由催化三联体组成,即组氨酸,色氨酸,天冬氨酸,我目前没有查到血清对胰脂肪酶的抑制作用.希望共同探讨.

楼上说的有理,看情况的.不过一般T25用1ml,T75用2-3ml,T150用5ml,T300用8ml

和胰酶的颜色没关系,因为配试剂是用培养液,其中含有的指示剂有颜色,指示溶液的酸碱度

胰酶【主要分解蛋白质】清理后消除细胞在容器壁的粘连,将细胞彼此分离使观察更加方便