Trizol提取RNA用Trizol试剂盒抽提鱼肝脏RNA时,加入氯仿离心取出的上清加入异丙醇后,会出现大量絮状白色物质

求TRIZOL提取RNA的详细步骤

yeger1年前1

爱为谁留 共回答了19个问题 | 采纳率94.7%

厚百提供：
1、在提取组织RNA时,每50～100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解；提取细胞RNA时,先离心沉淀细胞,每5-10
╳106个细胞加1ml Trizol后,反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞.
2、将组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中,在室温15~30C下放置5分钟；在EP管中,按照每1ml
TRIZOL加0.2ml氯仿的量加入氯仿,盖上EP管盖子,在手中用力震荡15秒,在室温下（15℃～30℃）放置2～3分钟后,12000g（2℃～8℃）离心15分钟.
3、取上层水相置于新EP管中,按照每1ml
TRIZOL加0.5ml异丙醇的量加入异丙醇,在室温下（15℃～30℃）放置10分钟,12000g（2℃～8℃）离心10分钟.
4、按照每1ml
TRIZOL加1ml 75%乙醇进行洗涤,涡旋混合,7500g（2℃～8℃）离心5分钟,弃上清；让沉淀的RNA在室温下自然干燥；用Rnase-free
water
溶解RNA沉淀.
Ps:在收集到生物材料之后,最好马上进行RNA制备工作.若需暂时储存,则应以液氮将生物材料急速冷冻后,储存于-80℃冷冻柜.在制备RNA时,将储存于冷冻柜的材料取出,立即以加入液氮研磨的方式打破细胞,不可以先行解冻,以避免RNase的作用.

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请问用TRIzol提取总RNA蛋白质除不尽的原因及解决办法?

请问用TRIzol提取总RNA蛋白质除不尽的原因及解决办法?
这个是我提取的方法：
a）细胞或组织加入Trizol后（10cm2加1mlTrizol）,室温放置5分钟,使之充分裂解.
b）12000转离心5分钟,弃掉沉淀.
c）按照200µl氯仿每毫升Trizol的比例加入氯仿,涡旋混匀后在室温放置15分钟.
d）4℃,12000转离心15分钟.
e）将上层水相吸出,至另一个离心管中,注意,千万不要息道中间的界面；如果DNA和蛋白要同时提取,要保留下层酚相.
f）按照每毫升Trizol一毫升75%乙醇的比例,涡旋震荡离心管,悬浮沉淀.
g）4℃,12000转离心15分钟.弃上清.
h）室温晾干.注意：RNA样品不能凉得过干,这样的话很难溶解.
i）用合适量的去离子水或者TE缓冲液回溶RNA.注意：这里提到的水和TE都需要用DEPC水处理,并且高温高压灭菌.
j）测定RNA的OD值,定量RNA的浓度.
提取时氯仿用的是“电子清洁剂”,然后掉了异丙醇沉淀
不过老板说这都不是问题

我是孤岛1年前1

海边的红树林1 共回答了25个问题 | 采纳率92%

1、室温放置5分钟是不可能使之充分裂解的,要充分振荡10-15s；
2、显然是DNA污染,蛋白不会跟RNA同时显色吧,这张图上有你也看不到.

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trizol法提取RNA分成的三相分别是什么

4356436341年前1

村里我最帅no1 共回答了11个问题 | 采纳率90.9%

上层无色,接近透明色的为RNA；中层白色（很薄）的为DNA；下层红色的为蛋白质.基本的层次和颜色是这样的,但是植物材料考虑到色素的问题,颜色会有细微的差异.三相中DNA最薄,另外两相差不多,RNA相比蛋白质厚一点.

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Trizol法提RNA,用DEPC水重溶RNA时,不能完全溶解,68摄氏度热溶,静置后下层仍浑浊,请问需要取上清吗?

renjingbo_20461年前3

发烧不如喝醉 共回答了21个问题 | 采纳率90.5%

你的情况可能有两种可能：1.像二楼说的那样,在用酒精洗完沉淀后,干燥过程时间太长,导致RNA不好溶解.但这种情况可像你那样在水浴中加热溶解个10min,一般是会溶的.所以你的问题看起来更像是第二种情况：2.剩下的不溶沉淀根本不是RNA,而是在提取过程中没有去干净的杂质或蛋白.这种东西是不会溶的.而且有时不会影响RNA的质量,瞬时离心一下把沉淀甩到管底,吸上面的清液就行了；但如果提取过程中RNA发生了降解,这时即便是上面的上清液也是不能用的了.你可以先用上面的上清液跑个胶看看完整性如何.如果两条或三条带就不妨碍使用.祝顺利!

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TRIzol法提取动物组织总RNA,A260/280>2是为什么?

TRIzol法提取动物组织总RNA,A260/280>2是为什么?
A260/2802是什么问题呢?

lyx东边日出1年前2

丁上 共回答了18个问题 | 采纳率94.4%

2.0到2.1都是正常的数值.也有说法说生物越高等,这个比值也相应会大一些,再大那就是有RNA降解了,导致A260升高.你可以看看《RNA分离与鉴定试验指南——RNA研究方法》.这本书对于RNA质量评价有比较详细的叙述,紫外吸收是其中的第二部分.

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trizol裂解时间会不会影响RNA提取结果

2008409491年前1

亨猫 共回答了15个问题 | 采纳率86.7%

保持低温的话没有太大的影响.
曾经试过低温（4度）裂解过夜,第二天早上抽提,结果没发现什么影响.

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我从骨髓中提取RNA后加入Trizol中,如果放入-80℃冰箱中将来PCR用,请问可以保存几个月?

冰雪版红包51年前3

九月鸿飞 共回答了16个问题 | 采纳率81.3%

只要是纯度高的RNA可以保存很久的,我有保存过1年零两个月的,在做实验的时候基本没有降解,只是放时间常了需要进行下处理.不过正常实验用没问题.

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用Trizol提取蛋白

hxxlxhksl1年前1

xzhff 共回答了16个问题 | 采纳率87.5%

tri reagent 可以从各种样本（动植物人细菌,病毒等物种的不同类型的生物样本中同时抽提RNA DNA 和蛋白质,

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请问Trizol试剂提取RNA相关问题,

请问Trizol试剂提取RNA相关问题,
请问下为什么在Trizol试剂提取RNA时,加入氯仿离心后RNA在上层水相,DNA在中间层,蛋白质在下层有机相,但用CTAB提取DNA时,加入氯仿后DNA却在上层水相而非中间层呢?

qianchengehai1年前2

NetLion 共回答了17个问题 | 采纳率82.4%

我记得是pH值的关系
不过也没那么严格,实际上提取RNA后如果可能,还是需要一步加入DNase消化的过程

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trizol成分作用是什么最近用trizol 法提取了RNA但不知道它为何物,

何月儿1年前1

老割 共回答了15个问题 | 采纳率93.3%

在收集到生物材料之后,最好能即刻进行RNA制备工作.若需暂时储存,则应以液氮将生物材料急速冷冻后,储存于-80℃冷冻柜.在制备RNA时,将储存于冷冻柜的材料取出,立即以加入液氮研磨的方式打破细胞,不可以先行解冻,以避免RNase的作用.
1.提取组织RNA时,每50～100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解；提取细胞RNA时,先离心沉淀细胞,每5-10 ╳106个细胞加1ml Trizol后,反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞；
2.将上述组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中,在室温15~30C下放置5分钟；
3.在上述EP管中,按照每1ml TRIZOL加0.2ml氯仿的量加入氯仿,盖上EP管盖子,在手中用力震荡15秒,在室温下（15℃～30℃）放置2～3分钟后,12000g（2℃～8℃）离心15分钟；
4.取上层水相置于新EP管中,按照每1ml TRIZOL加0.5ml异丙醇的量加入异丙醇,在室温下（15℃～30℃）放置10分钟,12000g（2℃～8℃）离心10分钟；
5.弃上清,按照每1ml TRIZOL加1ml 75%乙醇进行洗涤,涡旋混合,7500g（2℃～8℃）离心5分钟,弃上清；
6.让沉淀的RNA在室温下自然干燥；
用Rnase-free water 溶解RNA沉淀.

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TRIZOL法提取RNA中,TRIZOL这个词该怎么念啊?

马踏飞雁1111年前1

dddkof 共回答了17个问题 | 采纳率82.4%

我一般念作：chui- zou/（吹奏,一二声）

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有关RNA提取的问题用TRIZOL提取RNA时,为什么每次都要在冰上孵育一会,常温下不行吗?

荒原狼11年前3

杀牛的刀 共回答了17个问题 | 采纳率70.6%

冰能提供低温环境,降低几乎无处不在的RNA酶的活性,防止其对所提取的RNA的降解!

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TRIZOL提取阳性细菌前是否需要用溶菌酶破壁

TRIZOL提取阳性细菌前是否需要用溶菌酶破壁
就如题目所困扰,本人想用TRIZOL提取双歧杆菌的RNA.
双歧杆菌是革兰氏阳性细菌,细胞壁比较厚,在提取双歧杆菌DNA之前,是需要用溶菌酶破壁,不知道TRIZOL的成分是什么,是否再提之前也需要破壁?
"是否'再'提之前也需要破壁？"应该是“是否‘在只提RNA’之前也需要破壁？”

oims1年前3

右手的温度 共回答了16个问题 | 采纳率87.5%

可以用溶菌酶破壁也可以用玻璃微珠液氮研磨

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trizol提取烟草叶片总RNA,在液氮研磨后加入1ml的trizol变成糊状而不是溶液状

trizol提取烟草叶片总RNA,在液氮研磨后加入1ml的trizol变成糊状而不是溶液状
会不会影响提取结果,为什么会出现这种现象,求解

天上掉个猪1年前3

tyhj2880 共回答了16个问题 | 采纳率81.3%

可能是叶片中的多糖捣乱.
对提取结果不会有太大影响,只要你加入氯仿离心后能分开水相和有机相就行.宁可损失点,别把界面的沉淀物吸出来

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贴壁细胞提取RNA时,trizol试剂在培养皿里加还是把细胞消化好放入离心管里加?

flygo826191年前2

本人招租 共回答了14个问题 | 采纳率100%

这个都可以,直接加的话,会带有更多的培养液到下一步.而离心后,去掉培养液后再加,提的效率更高.培养盘上基本没残留

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提取同一动物组织中DNA和RNA的方法,要求不使用匀浆机和TRIZOL

提取同一动物组织中DNA和RNA的方法,要求不使用匀浆机和TRIZOL
提取同一动物组织中DNA和RNA,打碎组织不使用匀浆器,只能研磨破碎,不使用TRIZOL,有什么具体方法能提取分离DNA,RNA（请从研磨开始说） 多谢

若渝1年前1

90poiuyt09 共回答了13个问题 | 采纳率76.9%

有一种可从少量组织和细胞中同时回收DNA、RNA和蛋白质的一步法,这种方法包括用含异硫氰酸胍和酚的一种单相液来裂解细胞,加入氯仿产生第二相,DNA和蛋白质在有机相中被抽提,RNA则被留在上层水相中.用乙醇和异丙醇连续...

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我做 RT-PCR,研磨新鲜组织想用 手动玻璃匀浆器,直接加trizol研磨,行么

我做 RT-PCR,研磨新鲜组织想用 手动玻璃匀浆器,直接加trizol研磨,行么
因为就做4个样,没订液氮所以没用研钵,我想知道玻璃匀浆器 不用depc水处理的话,还有什么方法可以消毒.高压行么?需要管和把手分开么,还是安在一起,包在布里高压然后烘干么?

新鲜油麦菜1年前1

上帝他爷 共回答了16个问题 | 采纳率81.3%

RNA提取用的玻璃器皿洗干净后可以用烘箱在180度条件下烘烤3个小时就可以直接用了.不需要depc处理,depc是用来处理塑料等不耐热的工具的.烘烤的时候把匀浆器分开,分别用锡纸包好了放到烘箱里烤,因为用别的东西（报纸、塑料、布）包的话会被烤焦的.别忘了把手和管要对上号,别弄混了,要不然不配套研磨效果就不好.

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用trizol提RNA时,氯仿分相后最下面的蛋白质能不能保存下来将来做western呀,怎么保存呢,直接吸出来放-70

musicleecn1年前2

Caluier 共回答了10个问题 | 采纳率80%

不可以,分相界面的蛋白层含有大量的酚,严重干扰western.

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Trizol法提血中的总RNA,跑胶后有的可以显示18S和28带,而有的却什么也没有?为什么呢?

Trizol法提血中的总RNA,跑胶后有的可以显示18S和28带,而有的却什么也没有?为什么呢?
曾经用什么条带也没有的RNA样品做RT-PCR后跑胶,结果却有正确的条带显示.是不是与RNA浓度有关呢?
同一批血样提的RNA，操作都是一样的，怎么还会出现这么明显的差异呢？还有就是如果RNA纯度不高，那放入-80度保存后，多长时间内能保证RNA的纯度和当时提出来的一样呢？

jenny_621年前1

wl0611 共回答了24个问题 | 采纳率79.2%

跟浓度有一定的联系 还有就是你的RNA质量并不是很好 但是一般的RT对RNA的质量要求不算是很高的!

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trizol提取的蛋白质能做ELISA

方子菲1年前1

娃哈哈cqf53 共回答了23个问题 | 采纳率91.3%

理论上是可以的,我们做过,没问题的.
你要是再纯化一下就跟好的

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Trizol提取RNA时异丙醇放入过量一倍,会造成什么影响,能否补救

Trizol提取RNA时异丙醇放入过量一倍,会造成什么影响,能否补救
如题 急

ahung1年前4

飞翔的小鸟在吟唱 共回答了17个问题 | 采纳率94.1%

异丙醇是沉淀核酸用的,作用和乙醇一样.只不过用量少一点,0.6V~1V就够了,不像乙醇沉淀需要至少2V,一般需要2.5倍体积.在水相很多,离心管容积有限,加不下太多乙醇的时候一般会用异丙醇沉淀.
异丙醇的作用是通过-OH的疏水作用使得RNA 或者DNA链中的亲水基团受到保护,等同于沉淀,加多就加多了,不需要补救

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trizol法提取RNA时在哪一步加入DNase来去除gDNA?

hahaa20051年前1

bazzi23prettyboy 共回答了17个问题 | 采纳率70.6%

如果操作得当,一般RNA产物很少有DNA污染的.如果OD比值显示有污染,可以尝试在重悬RNA团块时用含DNase I的buffer切一会儿试试,最后重新用酚氯仿异戊醇抽提一次,最后用无水乙醇沉淀再离心重悬,但是不建议重新抽提,最好从优化正常步骤入手,否则可能产物损失很大

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trizol提取RNA时,最后的RNA为什么不能完全干燥,其干燥后不易溶解的原理是什么?

bigbirdwwb1年前2

xiaolong1990522 共回答了15个问题 | 采纳率93.3%

最后的到RNA的上一步是酒精洗涤,提取的RNA当然不是完全干燥,提取后可以用小号枪头洗出较多的液体,剩下就在空气中自然干燥；但是太干就不容易溶解,因为太干的话RNA之间就结合的非常紧密.

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trizol裂解细胞为什么冲洗时用'冷'的PBS

trizol裂解细胞为什么冲洗时用'冷'的PBS
是为什么用冷的

vivian3071年前1

lucydxp 共回答了14个问题 | 采纳率92.9%

pbs 磷酸缓冲液
调节溶液ph值,增加溶液稳定性.
其他的不太清楚.

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做荧光定量时提取的RNA必须纯化吗?我用的是trizol法提的,

几得帅了滴1年前2

youyouyu912 共回答了14个问题 | 采纳率85.7%

你意思是做定量PCR吗?提RNA用trizol是可以的,只要提取步骤没问题,可以不需要RNA纯化.如果是要求更高的实验比如microarray,RNA-seq,那必须是纯度高的RNA

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trizol提取烟草组织100mg叶片总RNA,最终浓度大概多少?30ul溶解RNA.每次提的OD260/OD280较低

trizol提取烟草组织100mg叶片总RNA,最终浓度大概多少?30ul溶解RNA.每次提的OD260/OD280较低,

荣俊标1年前1

默默无闻中 共回答了17个问题 | 采纳率94.1%

我做过Trizol法提取RNA实验,在这方面之前也有困惑,不过查了很多资料后才知道：Trizol提取的RNA用DEPC处理的水溶解的话,A280/A260比值为1.4、1.5左右比较正常,若用TE溶解的话,其比值≥1.8.不知道你的OD260/OD280较低,是不是因为溶解RNA的溶液用的是水.若是,没关系,继续往下做,会有结果的.

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