做western bloting 如何确定蛋白样品的体积

做WB关键不是确定样品体积,而是确定样品的蛋白量吧.
如果每个样品浓度不同,则需要统一一个上样量,体积上就会发生变化.所以最先需要先测定样品中的蛋白浓度,根据之前的经验先确定需要的总上样量,例如是15ug还是25ug蛋白,然后计算每个样品需要多少ul才能达到同样的蛋白量.
为了保证泳道间均一度,可以补水,让所有的样品都在同样的体积,再加loading实验.
当然,最后还需要根据WB的结果判断,用这些上样量不足还是过多.

测定蛋白的浓度，然后根据浓度确定上样量，一般15ug蛋白质吧