质粒载体的应用是什么

我儿无名2022-10-04 11:39:542条回答

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yyq19850410 共回答了16个问题 | 采纳率93.8%
质粒载体应用于基因工程,即在由限制性核酸内切酶修饰过的质粒DNA序列中插入外源的目的基因,以质粒为载体,将目的基因通过转化或转导的方法导进宿主细胞,进行重组、筛选、扩增的过程.
1年前
sunlandlaoshi 共回答了6个问题 | 采纳率
转基因。
1年前

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谁说说质粒载体pet 22b的一些特点以及它作为质粒载体在DNA克隆中的优势?
萤火虫1131年前1
折翼的天使aa 共回答了16个问题 | 采纳率87.5%
1.pEt22b is a bacterial expression vector from Novagen.
2.T7 promoter.
3.Amp resistant.
4.N-terminal pelB signal sequence for potential periplasmic localization.
5.optional C-terminal His tag.
6.lacIq.
7.multiple cloning sites.
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质粒载体中的复制原点的本质是什么,
langqiulei1年前2
买93只阿迪鞋 共回答了20个问题 | 采纳率90%
是碱基对.复制的起始需要启动子,启动子就是基因序列上的碱基对,就像复制或者转录终止需要终止密码子一样,终止密码子也是碱基对.
目前基因工程所用的质粒载体主要是以天然细菌质粒的各种元件为基础重新组建的人工质粒,pBR322质粒是较早构建的质粒载体,
目前基因工程所用的质粒载体主要是以天然细菌质粒的各种元件为基础重新组建的人工质粒,pBR322质粒是较早构建的质粒载体,其主要结构如图一所示.请回答以下基因工程技术操作中的问题:

(1)构建人工质粒时不光要有抗性基因、复制原点等,还应该具备RNA聚合酶识别和结合的部位,以驱动目的基因转录,该部位称为______.
(2)获取目的基因后可以用PCR技术扩增.PCR仪器可以模拟DNA双链在体内的复制,所不同的是,PCR过程中的DNA聚合酶(taq酶)的______性比体内的DNA聚合酶强;而在PCR过程中通过加热(90-95℃)达到的结果,和体内DNA复制时所需______酶的作用相同.
(3)受体细胞不同,导入目的基因的方法也不同.如受体细胞是植物细胞,可选用
______转化法;如受体细胞是细菌,则先用Ca2+处理,将其转化为一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态,这种细胞称为______细胞.将人胰岛素基因导入大肠杆菌内且成功表达后,提取的产物还需进行体外加工和改良,因为大肠杆菌缺乏______(细胞器),无法加工形成胰岛素.
(4)pBR322分子中另有单个的BamHⅠ限制酶作用位点,现将经限制酶BamHⅠ处理后的质粒与用另一种限制酶BglⅡ处理后得到的目的基因,通过DNA连接酶作用恢复
______键,成功地获得了重组质粒,这说明限制酶BamHⅠ和限制酶BglⅡ的酶切产物具有______.
(5)为了检测上述重组质粒是否导入原本无ampR和tetR的大肠杆菌,将大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养,得到如图二的菌落.再将灭菌绒布按到培养基上,使绒布面沾上菌落,然后将绒布按到含四环素的培养基上培养,得到如图三的结果(空圈表示与图二对照无菌落的位置).与图三空圈相对应的图二中的菌落表现型是______,图三结果显示,多数大肠杆菌导入的是______质粒.
1255sk1年前1
小鱼天天游 共回答了16个问题 | 采纳率93.8%
解题思路:分析题图:菌落能在含有氨苄青霉素的培养基生存,说明了菌落含有抗氨苄青霉素基因;将沾上菌落绒布按到含四环素的培养基上培养,仍能生长,说明了菌落也含有抗四环素基因,不能生长的则不含抗四环素基因.

(1)基因表达载体的组成包括标记基因(如抗性基因)、复制原点、启动子、终止子和目的基因等,其中启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位,可以驱动目的基因转录.
(2)PCR过程是在较高环境中进行的,需要热稳定DNA聚合酶(taq酶);在PCR过程中通过加热(90-95℃)达到的结果,和体内DNA复制时所需解旋酶的作用相同.
(3)将目的基因导入植物细胞常用感受态细胞法;将目的基因导入微生物细胞,常用感受体细胞法,即先用Ca2+处理,将其转化为一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态,这种细胞称为感受态细胞.将人胰岛素基因导入大肠杆菌内且成功表达后,提取的产物还需进行体外加工和改良,因为大肠杆菌是原核生物,其细胞中缺乏内质网、高尔基体,无法加工形成胰岛素.
(4)DNA连接酶的作用是恢复磷酸二酯键;经限制酶BamHⅠ处理后的质粒与用另一种限制酶BglⅡ处理后得到的目的基因可以形成重组质粒,说明限制酶BamHⅠ和限制酶BglⅡ的酶切产物具有相同末端.
(5)图二中的菌落能抗氨苄青霉素,将灭菌绒布按到图二中培养基上,使绒布面沾上菌落,然后将绒布按到图三含四环素的培养基上培养,仍能生长的也能抗四环素,空圈为只能抗氨苄青霉素而不能抗四环素的.因此,图三结果显示,多数大肠杆菌既能抗氨苄青霉素,又能抗四环素,说明导入的是pBR322质粒,而不是重组质粒(重组质粒的四环素抗性基因被切断,不能表达,因此含重组质粒的大肠杆菌抗氨苄青霉素).
故答案为:
(1)启动子
(2)热稳定解旋酶
(3)农杆菌感受态内质网、高尔基体
(4)磷酸二酯相同末端
(5)抗氨苄青霉素不抗四环素(或只抗氨苄青霉素)pBR322

点评:
本题考点: 基因工程的原理及技术.

考点点评: 本题考查了基因工程的相关知识,意在考查考生理解所学知识的要点,把握知识间的内在联系的能力,及能会鉴别、选择试题给出的图表生物学信息,并能运用这些信息,结合所学知识解决相关的生物学问题.

用于重组DNA技术的质粒载体在结构上有什么特点?
用于重组DNA技术的质粒载体在结构上有什么特点?
急需答案江湖救急 谢谢各位
yuguanjihua1年前3
tt芳草520 共回答了13个问题 | 采纳率84.6%
特点如下:
1,环状DNA分子能够自我复制,或整合到染色体上,随染色体复制.
2,有多个限制酶切点(便于切割).
3,有标记基因(便于进行检验).
如果我把目的基因连接到质粒载体上,这个载体质粒又有多个启动子,我怎么知道它用那个启动的呢
舍身喂虎割肉喂鹰1年前3
gxgjb 共回答了21个问题 | 采纳率95.2%
启动子有自己的碱基序列 会进行识别
质粒载体是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行人工构建de
质粒载体是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行人工构建de
质粒载体是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行人工构建的.与天然质粒相比,质粒载体通常带有一个或一个以上的选择性标记基因(如抗生素抗性基因)
那么这个标记基因究竟是怎么用于选择,举个例子(就拿抗青霉素标记来说).
萧雅轩1年前2
wenyik 共回答了19个问题 | 采纳率89.5%
标记基因的作用很关键.
拿抗青霉素标记来说,只有对青霉素有抗性的菌体,才能在含有青霉素的培养基上生长繁殖.
其它的杂菌和没有转化成功的受体菌,都不能生长.
这样的话,用含有青霉素的培养基去培养,长出来的肯定就是含有抗性质粒的菌体了.
如果不含有标记基因,那就只能使用不含有青霉素的培养基来培养.那样的话,很多杂菌和没有转化成功的受体菌也会在上面生长繁殖,你就无法判断哪一个菌落是含有质粒的细菌.
这样的话,后续工作(提取和纯化质粒)就没法进行了.
(2011•闸北区模拟)目前基因工程所用的质粒载体主要是以天然细菌质粒的各种元件为基础重新组建的人工质粒,pBR322质
(2011•闸北区模拟)目前基因工程所用的质粒载体主要是以天然细菌质粒的各种元件为基础重新组建的人工质粒,pBR322质粒是较早构建的质粒载体,其主要结构下如图乙的一所示.

(1)构建人工质粒时要有抗性基因,以便于______.
(2)pBR322分子中有单个EcoRI限制酶作用位点,EcoR 1只能识别序列一GAATTC一,并只能在G与A之间切割.若在某目的基因的两侧各有1个EcoRI的切点,请画出目的基因两侧被限制酶EcoRI切割后所形成的黏性末端______.
(3)为了检测上述重组质粒中是否导入原本无ampR和tetR的大肠杆菌,将大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养,得到如图二的菌落.再将灭菌绒布按到培养基上,使绒布面沾上菌落,然后将绒布按到含四环素的培养基上培养,得到如图三的结果(空圈表示与图二对照无菌落的位置).与图三空圈相对应的图二中的菌落表现型是______,图三结果显示,多数大肠杆菌导入的是______.
捣捣捣米1年前1
chenjia_930724 共回答了23个问题 | 采纳率95.7%
解题思路:本题考查了标记基因的生理功能是便于鉴定受体细胞中是否导入目的基因.菌落能在含有氨苄青霉素的培养基生存,说明了菌落含有抗氨苄青霉素基因;将沾上菌落绒布按到含四环素的培养基上培养,仍能生长,说明了菌落也含有抗四环素基因.

(1)质粒上的抗性基因可作标记基因,便于鉴定受体细胞中是否导入目的基因.
(2)在目的基因的两侧各有1个EcoRⅠ的切点,即目的基因两侧有-GAATTC-,目的基因两侧被限制酶EcoRI切割后所形成的黏性末端为
(3)DNA连接酶能连接磷酸二酯键.经BamHⅠ处理后的质粒与用另一种限制酶BglⅡ处理得到的目的基因能连接起来,说明这两种酶切割获得的黏性末端相同.
(4)图二中的菌落能抗氨苄青霉素,将灭菌绒布按到图二中培养基上,使绒布面沾上菌落,然后将绒布按到图三含四环素的培养基上培养,仍能生长的也能抗四环素,空圈为不能抗四环素的(只能抗氨苄青霉素).图三结果显示,多数大肠杆菌既能抗氨苄青霉素,又能抗四环素,说明导入的是pBR322质粒,而不是重组质粒(重组质粒的四环素抗性基因被切断,不能表达,因此含重组质粒的大肠杆菌抗氨苄青霉素).
故答案为:
(1)筛选(鉴别目的基因是否导入受体细胞)
(2)
(3)能抗氨苄青霉素,但不能抗四环素 既能抗氨苄青霉素,又能抗四环素的pBR322质粒

点评:
本题考点: 基因工程的原理及技术.

考点点评: 本题考查了基因工程的相关知识,意在考查考生理解所学知识的要点,把握知识间的内在联系的能力,及能会鉴别、选择试题给出的图表生物学信息,并能运用这些信息,结合所学知识解决相关的生物学问题.

质粒载体与天然质粒相比有哪些改进
chenshi17431年前2
会友江湖 共回答了16个问题 | 采纳率87.5%
一般在细胞内能稳定存在,为松弛控制型质粒.有标记基因,能根据标记基因的特性来判断该质粒是否转录到宿主细胞中.在目的基因之前加入了强启动子.
花粉管通道法用不用质粒载体 基因枪法呢
y31521年前1
crasyboy 共回答了22个问题 | 采纳率90.9%
  花粉管通道法:需要用质粒载体,早期的花粉管通道法是将含目的基因的整个DNA分子直接导入,现在一般是将目的基因先插入到质粒等表达载体上,然后再将带有目的基因的表达载体导入花粉管.
  基因枪法:这一方法是依靠一种基因枪来帮助导入外源基因.基因枪根据动力系统可分为火药引爆、高压放电和压缩气体驱动三类.其基本原理是通过动力系统将带有基因的金属颗粒(金粒或钨粒),将DNA吸附在表面,以一定的速度射进植物细胞,由于小颗粒穿透力强,故不需除去细胞壁和细胞膜而进入基因组,从而实现稳定转化的目的.它具有应用面广,方法简单,转化时间短,转化频率高,实验费用低等优点.对于农杆菌不能感染的植物,采用该方法可打破载体法的局限.