流式细胞仪检测结果问题患者信息：男 45-59岁 骨髓细胞做流式细胞仪检查,结果如下：见异常细胞.CD33 80%,CD

MICA/B为膜蛋白,可以做活细胞的检测.
细胞分为2组.第一组先用抗MICA/B抗体孵育,洗脱,再用荧光二抗识别,洗脱.上机检测.
第二组用非特异性抗体（和抗MICA/B抗体同型）,洗脱.再用荧光二抗识别,洗脱.上机检测.
荧光阈值按照第二组设置.第一组超过阈值的部分为阳性细胞.

不是
流式细胞仪就是进行流式细胞分析的仪器,它集电子技术、计算机技术、激光技术、流体理论于一体,是一种非常先进的检测仪器,被誉为试验室的“CT”.
流式细胞术（Flow CytoMeter,FCM）是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段,它可以高速分析上万个细胞,并能同时从一个细胞中测得多个参数,与传统的荧光镜检查相比,具有速度快、精度高、准确性好等优点,成为当代最先进的细胞定量分析技术.

细胞的筛选是通过分离含单细胞的液流实现的,此液流就是鞘液.流动室的超高频电晶体充电后振动,使鞘液断裂为均匀液滴,细胞均匀分布在其中,当通过几千分特的偏转板时,在高压电压下偏转,根据带电情况不同落入不同的收集器中.
“根据选定的某个参数由逻辑电路判明是否将被分选,而后由充电电路对选定细胞液滴充电,带电液滴携带细胞通过静电场而发生偏转,落入收集器中”.

最好贴个图看看.
我估计是在FSC上看到的大小两群?有时候光凭这个参数来判断大小是不很特异的.建议Gate细胞后（排除了debris后）,再gate一下,以SSC-H和SSC-A作为X和Y的指标,正常情况下应该是比较紧密的直线,如果有散点在SSC-A的方向发散,说明有2个细胞聚集了,样本没有充分制备为单细胞悬液.
还有就是药物处理,生长时间长等（处于非指数生长期）有时是会改变细胞形态的,可以导致流式散点图的switch,这个情况也很常见.

1. 细胞分为2组.
2. 购买CD147的特异性抗体,和另外一个同型,非特异性抗体.比如抗CD147是IgG,那就买一个非同一的IgG.
3. 按照厂家推荐的浓度和时间染细胞,包括二抗
4. 先用非特异抗体染色的那个细胞调机器,设置阴性阈值.
5.在测量用特异性抗体染色的那个,得到阈值上计数

转染的质粒带有标记基因,比如EGFP.分析绿色细胞的比例就得到了转染效率了.

根据你所购买的试剂盒而定,一般是先用70%乙醇先固定,然后加RNA酶和PI,半个小时左右上机检测就可以了.需要注意的就是加酒精固定的时候要用四度预冷的酒精,缓慢的加,边加边晃动细胞,避免细胞黏连在一起.

可以.这个是流式细胞仪一个常见的应用.
上流式细胞仪以前,需注意的是
1.细胞打散到单细胞的悬液,没有聚团成块.如果有顾虑的话用纱网过滤一次才用.
2.细胞悬液的浓度不能过高和过低.详请参考你的仪器说明建议值.我的经验每毫升一百万足足够了.少些读取慢些也没有大问题,一支样品少过十万的话,就很容易得不到足够的数据.太多则读取过快,准确性可能降低,更多更危险,可能造成仪器管道堵塞.
3.如果上机时间能保证,细胞直接打散均匀在PBS里面就可以上机了,除了贴壁细胞需要的胰酶处理按照普通传代步骤来做,之后洗一次,没有什么其他处理.如果细胞悬液制好后可能需要等待（超过半小时）,则用1-2%多聚甲醛或福尔马林溶液保存细胞.注意避光避免丢失荧光信号.这样保存放4度冰箱一两个礼拜之后也还是可以上机,误差不大.

建议你看下：细胞生物学-研究方法与技术,这本实验教材.
主要原理是通过荧光染料对DNA进行标记,处于不同细胞周期的细胞有不同的DNA含量（2C和4C及介于2C-4C）,流式细胞仪通过检测荧光,对样品中不同时期的细胞进含量行分析.
染DNA染料有Hoechst和PI,流式细胞仪主要有BD FAS Calibur.
具体流程建议你参考相关文献.祝好运!

就是说这个机器配置了一个激光（大多数是波长488nm）,在信号采集区有5个滤色镜,可以同时检测5种不同波长被激发的荧光

你是用AnnxinV/PI双染来检测凋亡的吗?PBS似乎不能处理掉自发荧光的问题,你查询一下阿霉素和PI的激发波长和发射波长是否完全一致,若不一致就不会影响,但是一致的话就会有影响.但是药物染的是胞质而PI染的是细胞核,所以还是可以从形态上区分

计数板

一 般来说都是将细胞悬液离心并弃上清后加入固定液,我们加的是70％的冰乙醇,加的量根据你细胞的多少.你这个涉及的测蛋白,那么加多聚甲醛的量和时间可能 要控制得严一些才能保证最低限度不破坏a－SMA的结构.如果单测细胞凋亡和周期的话固定液多一点和固定时间长一点都影响不是太大.x0d其实无论是做细胞周期 的乙醇固定,还是做蛋白染色的多聚甲醛固定,固定液加1mL就可以了,一般每个样品的细胞数都在106左右.固定液太少了不好,因为固定液的实际作用浓 度一定程度上受弃上清后管内残留液体量的影响,但太多了也没有意义.也正是这个原因,实际上多聚甲醛的浓度用4%的多一些,而且因其有挥发性,时间长浓度 会有所降低.至于固定时间,一般4度30min固定作用就已经比较完全了,但是也可以放置过夜,这样有时有利于时间安排.

这里有篇文献,希望能帮到你
http://pubs.nrc-cnrc.gc.ca/ispmb/ispmb23/r05-012.pdf

有几个问题需要考虑:

胰酶消化,是否会破坏细胞表面的抗原,导致无法被抗体识别?
一般不建议使用二抗,流式大多使用标记的一抗.同时使用同型非特异性抗体作为对照

你的写法肯定有误,不可能CD45+后面直接就是dim,是不是CD34+CD45-/dim?
要知道+在这里就是表达的意思,dim是低表达的意思,两者是相悖的.

1.分析细胞表面标志
2.分析细胞内抗原物质
3.分析细胞受体
4.分析肿瘤细胞的DNA、RNA含量
5.分析免疫细胞的功能

应该是平均荧光强度.

PBS是一种缓冲液,他的渗透压与一般细胞的相同,在做细胞试验或者活体组织实验中,一般就把PBS当做水来用,各种冲洗的过程什么的都是用它.这样不会改变细胞形态~

你需要6种抗体：
CD4-标记荧光1
CD25-标记荧光2
CD127-标记荧光3
加上标记了三种对应荧光的同型非特异抗体.
先用同型非特异抗体分别染色的细胞调节阴性阈值.然后再用已知阳性（或者是对应荧光相同的珠子）的细胞调节机器的光谱代偿.
然后检测染色的样本.先在点阵图设好CD4,CD25双阳性,然后再柱状图到处双阳性的看CD127的分布,得到读数
尽量选新鲜血液.

二维点图以双参数显示结果,每个点表示一个或多个细胞.图5-6为阴性对照图,用于设定阴性对照边界,全图划分为四个象限,以区分阴性细胞、单阳性细胞以及双阳性细胞.左下象限（LL）为双阴性细胞,左上象限（UL）为Y轴阳性细胞（CD19 PE）,左下象限（LR）为X轴阳性细胞（CD3 FITC）,右上象限（UR）为双阳性细胞（CD19+/CD3+）.

如果转染的载体同时带有荧光蛋白的序列,直接检测荧光蛋白阳性的细胞就可以了.或者有荧光的tag也可以.

流式细胞仪的结构 流式细胞仪是进行流式细胞分析的仪器,集电子、计算机、激光、流体理论于一体,被誉为试验室的“CT”.
流式细胞术（Flow CytoMeter,FCM）是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段,它可高速分析上万个细胞,并能同时从一个细胞中测得多个参数,与传统荧光镜检查相比,具有速度快、精度高、准确性好等优点,成为当代最先进的细胞定量分析技术.
工作原理
将待测细胞染色后制成单细胞悬液.用一定压力将待测样品压入流动室,不含细胞的磷酸缓冲液在高压下从鞘液管喷出,鞘液管入口方向与待测样品流成一定角度,这样,鞘液就能够包绕着样品高速流动,组成一个圆形的流束,待测细胞在鞘液的包被下单行排列,依次通过检测区域.
流式细胞仪通常以激光作为发光源.经过聚焦整形后的光束,垂直照射在样品流上,被荧光染色的细胞在激光束的照射下,产生散射光和激发荧光.这两种信号同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管接收.光散射信号在前向小角度进行检测,这种信号基本上反映了细胞体积的大小；荧光信号的接受方向与激光束垂直,经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离,形成多个不同波长的荧光信号.
这些荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原的强度或其核内物质的浓度,经光电倍增管接收后可转换为电信号,再通过 A／D转换器,将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号.计算机把所测量到的各种信号进行计算机处理,将分析结果显示在计算机屏幕上,液可以打印出来,还可以数据文件的形式存储在硬盘上以备日后的查询或进一步分析.
检测数据的显示视测量参数的不同由多种形式可供选择.单参数数据以直方图的形式表达,其X轴为测量强度,Y轴为细胞数 目.一般来说,流式细胞仪坐标轴的分辨率有512或1024通道数,这视其模数转换器的分辨率而定.对于双参数或多参数数据,既可以单独显示每个参数的直方图,也可以选择二维的三点图、等高线图、灰度图或三维立体视图.
细胞的分选是通过分离含有单细胞的液滴而实现的.在流动室的喷口上配有一个超高频电晶体,充电后振动,使喷出的液流断裂为均匀的液滴,待测定细胞就分散在这些液滴之中.将这些液滴充以正负不同的电荷,当液滴流经带有几千伏特的偏转板时,在高压电场的作用下偏转,落入各自的收集容器中,不予充电的液滴落入中间的废液容器,从而实现细胞的分离.
应用范围
用于白血病的分型、肿瘤细胞染色体的异倍性测定,以及免疫学研究,并已开始用于细菌鉴定,病毒感染细胞的识别和爱滋病感染者T4、T8细胞的记数.
70年代以来,随着流式细胞技术水平的不断提高,其应用范围也日益广泛.流式细胞术已普遍应用于免疫学、血液学、肿 瘤学、细胞生物学、细胞遗传学、生物化学等临床医学和基础医学研究领域.
技术特点
流式细胞仪作为一种先进的细胞定量分析检测仪器,设计上采用了许多独特的技术,其中涉及到液流系统、光路系统、信号测量和细胞分选等4个方面.
展望
流式细胞仪从细胞技术开始发展到今天,60至70年代是其飞速发展时期,激光技术、喷射技术以及计算机的应用使流式细胞仪在原理和结构上形成了固定的模式.
80年代则是流式细胞仪的商品化时期,这期间不断有新型号的仪器推出,在多参数检测技术上不断提高.
进入90年代,随着微电子技术特别是计算机技术的发展,流式细胞仪的功能也越来越强大.在数据管理、数据分析方面有了长足进步.但是,在技术原理和设计方面并没有突破性的进展.人们的注意力开始转向流式细胞仪的应用,新的荧光探针、新的 荧光染料、新的染色方法不断推出,使流式细胞技术在新的细胞参数分析方面日益发展.
从新推出的仪器看,流式细胞仪会在硬件上不断更新,采用更新的器件（如半导体激光、大规模集成电路）,以实现小型化；用数字电路取代模拟电路,充分发挥微处理器的功能以实现简单化；在软件上提高数据自动分析能力,充分发挥图形界面的优点,使操作更加简便.