平板菌落计数法在操作时稀释度为10^－3时菌落数为0,再稀释10倍,菌落数在200左右,这是什么原因?

1.太高温度的培养基会杀伤细菌,2.涂布法：（培养基时固态的)适用于好氧微生物的菌落观察.涂布法使用较多,但有时不均匀,菌落一般在表面.
倒平板法：（培养基一般温度较高,是液态的）适用于厌氧,兼性厌氧的微生物,稀释倒平板法操作相对麻烦,不适合好氧和对热敏感的细菌培养 .3.培养较长时间(48h)后,菌落特征才明显

一般过程就是十倍倍比稀释以后倾注平板,规定条件培养.这是最常用的,只是容易混淆食物残渣.如果涂布平板的话好处就是全部长在表面,是不是残渣很清楚菌落形态也看得清楚但是只滴了一滴取样代表性差一点.另外还有点滴平板.这种菌落计数的方式只能找出能在一般培养基生长的需氧或兼性厌氧的菌.0的是没长菌么那过程肯定有问题,原因太多了,刚开始没混匀刚好没取到菌,培养基配的不对,检样开始稀释到倾注完过了太久菌已经死了,规定不能超过20分钟或者倾注平板的时候培养基太热把菌都烫死了也说不定.这种出现逆反现象的照理不能用要重做.

1.先将微生物制成菌悬液
2.梯度稀释
3.涂平板
4.培养,计算菌落数,然后算出菌悬液单位体积的活菌数

微生物显微镜直接计数法随机性大,所以对菌体数量不能做出较为宏观,全面的反应.显微镜直接计数法一般与血球计数板配套使用.但显微镜直接计数法的优点是快速,观察到马上可以计数.
平板菌落计数法最大的缺点是速度慢,需要平板上长出菌落一段时间后才能计数.但是由于平板菌落计数法通常做梯度稀释,所以计数的线性范围大.由于是菌悬液涂布,所以比较均匀,能较好的反应菌落的疏密程度.重复性,平行性很好,是经典的计数方法.

1、平板倾注法x05x05
1）、以无菌操作,将检样25g（或25ml）剪碎放于含有225ml灭菌生理盐水的广口瓶内（瓶内置有适量玻璃珠）或灭菌研钵内,经充分振摇或研磨用成1：10的均匀稀释液.
2）、用1.0ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1.0ml,沿管壁徐徐注入含有9.0ml灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内液面）,振摇试管混合均匀,作成1：100的稀释液.
3）、另取1.0ml灭菌吸管,按上述操作作10倍稀释,如此每递增稀释一次,即换1支1.0ml吸管.
4）、根据食品卫生要求或对标本污染程度的估计,选择2-3个适宜稀释度,分别作10倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释液的吸管移1.0ml稀释液于灭菌平皿内,每个稀释度作两个平皿.
5）、稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃营养琼脂（可放于46×1℃水浴保温）注入平皿约15ml,并移动平皿使混合均匀.同时将营养琼脂培养基倾入加有1.0ml灭菌生理盐水的平皿内作空白对照.
6）、待稀释液入平皿后,翻转平板,置36×1℃温箱内培养24±2h（肉、水产品、乳和蛋品为48±2h）取出,计算平板内菌落数,乘以稀释倍数,即得每克（或ml）样品所含菌落总数.
2、平板表面涂布法
将营养琼脂制成平板,经50℃l一2小时或35℃18—20小时干燥后,于其上滴加检样稀释液0．2ml,用L捧涂布于整个平板的表面,放置片刻(约lO分钟),将平板翻转,移至36±1℃温箱内培养24±2小时(水产品用30℃培养48±2小时),取出,按前述方式进行菌落计数,然后乘以5(由O．2m1换算为1m1),再乘以样品稀释的倍数,即得每g或m1 检样所含菌落数.此法较上述倾注法为优,因菌落生长在表面,便于识别和检查其形态,虽检样中带有食品颗粒也不会发生混淆,同时还可使细菌不必遭受融化琼脂的热力,不致因此而使菌细胞受到损伤而不生长,从而可避免由于检验操作中的不良因素而使检样中细菌菌落数降低.但是本法取样量较倾注法为少(仅倾注法的五分之一),代表性将受到一定的影响.
3、平板表面点滴法 与涂布法相似.所不同者,只是用标定好的微量吸管或注射器针头按滴(使每滴相当于0．025mi)将检样稀释液滴加于琼脂平板上固定的区域(预先在平板背面用标记笔划成四个区域),每个区域滴1滴,每个稀释度滴两个区域,作为平行试验.滴加后,将平板放平片刻(约5～10分钟),然后翻转平板,如前移入温箱内培养6～8小时后进行计数,将所得菌落数乘以40(由o.025ml换算为1ml),再乘以样品稀释的倍．数,即得每g或ml检样所含菌落数.李兆普等利用此方法,与倾注法进行对比试验,经过六种食品,1536件检样的考核结果,倾注法低于点滴法及涂抹法.本法具有快速、节省人力物力,适于基层单位和食品厂内部测定细菌总数用.但此法取样量少,代表性可能受到影响.又食品中细菌数少于3000/g（ml）者受到限制.

微生物显微镜直接计数法随机性大,所以对菌体数量不能做出较为宏观,全面的反应.显微镜直接计数法一般与血球计数板配套使用.但显微镜直接计数法的优点是快速,观察到马上可以计数.
平板菌落计数法最大的缺点是速度慢,需要平板上长出菌落一段时间后才能计数.但是由于平板菌落计数法通常做梯度稀释,所以计数的线性范围大.由于是菌悬液涂布,所以比较均匀,能较好的反应菌落的疏密程度.重复性,平行性很好,是经典的计数方法.