5×上样缓冲液 5倍浓缩 还是 5倍稀释呀?SDS-PAGE 中就用的是5×loading buffer~

琼脂糖凝胶电泳时上样孔有气泡对电泳结果有什么影响

kaka22king1年前1

mzl007007 共回答了13个问题 | 采纳率100%

不利于混合液沉降到点样空中,容易导致电泳时有拖尾

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怎样2X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液浓缩了?

怎样2X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液浓缩了?
如题.还有2X和5X指的是sds浓度吗?5倍是把什么变成5倍了呀

l恩芳1年前1

iknow_sz 共回答了15个问题 | 采纳率93.3%

这个倍数是指你的缓冲液母液相比上样时最终浓度的倍数.母液总是要比你的最终浓度高,因为它会被你的蛋白质样品稀释.所以2X就是2倍的母液,与同体积的蛋白质样品混合以后上样.
实际操作上,当然不是根据缓冲液体积来确定样本体积,而是看样本有多少,然后加相应分量的上样缓冲液.2倍的缓冲液就加样本同等体积,5倍的就加样本1/4体积.

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线粒体dna拷贝数 dna上样多少

zhanghrhr1年前1

xx亲历 共回答了17个问题 | 采纳率88.2%

上扬许多

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求WB高手解惑：我的蛋白分子量91KD,该用多少浓度的胶,上样量多少啊?

菩萨满1年前2

hubin082oo 共回答了13个问题 | 采纳率92.3%

10%的分离胶,上样量一般10微升-15微升

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5*SDS-PAGE蛋白上样缓冲液 之前需要细胞裂解液吗

TT訥1年前1

DDRYO 共回答了15个问题 | 采纳率86.7%

一般最好使用专用的蛋白提取液,里面有蛋白酶抑制剂,可以防止蛋白降解.
另外,你的目的蛋白的位置不同可能也需要不同的提取液比较好.
而且如果是磷酸化的蛋白最好还需要加入磷酸化酶抑制剂.
如果,现下都没有这些东西,只是看下预实验!
可以加上样缓冲液后煮沸5分钟来裂解细胞,之后离心取上清上样,注意离心要充分!

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用PAGE胶跑DNA的话,那和western blot中跑蛋白的胶有何不同?例如胶的配法、浓度、上样量、用多少电压等,而

用PAGE胶跑DNA的话,那和western blot中跑蛋白的胶有何不同?例如胶的配法、浓度、上样量、用多少电压等,而且marker没有颜色,怎么知道跑到了哪里?

潜水潜惯了1年前1

vhsq 共回答了18个问题 | 采纳率94.4%

首先原理差不多,具体细节差异还是有的.
跑DNA的话,可以参见 人家做AFLP的protocol,当然也要看你想分离的片断大小咯.
两者都要用到丙烯酰胺、甲叉丙烯酰胺、TEMED、APS（10%）
但是跑DNA一般用 TBE（Tris 、硼酸、EDTA）,还含尿素
用于western的蛋白胶多用 Tris-HCl,SDS buffer.蛋白较一般有分离胶和浓缩胶.
浓度看分离的东西；上样量的话其实没法比较,染色的方法不一样,DNA银染的话少上点,具体多少我也记不清了,自己查一下吧；如果说是上样体积,看你的梳子大小咯
电压：AFLP要求DNA要预电泳,冲洗掉尿素后再插梳子,60W 2h；当二甲苯青跑到底部约1/3处终止电泳.
DNA的loading buffer含染料 溴酚蓝、二甲苯青等来指示跑到哪里呢.

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使用硅胶柱层析的硅胶分离同样的样品,洗脱结束后,可以在此硅胶柱上继续上样吗?能重复上样几次

jade111年前1

说句良心话 共回答了15个问题 | 采纳率100%

实验室实在没条件,我觉得可以重复使用的,但是在使用前我觉得应该用极性高于洗脱液极性的洗脱剂清洗,好洗脱上次样品中的杂质.

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DNA与上样缓冲液混和后点样时总是往上飘是怎么回事

DNA与上样缓冲液混和后点样时总是往上飘是怎么回事
上样缓冲液是我自己按照分子克隆上配的，结果呈绿色，买的成品都是蓝色的，所以应该是上样缓冲液的问题，但我也不知道哪里不对，

winton1231年前1

龙城ff 共回答了16个问题 | 采纳率81.3%

提几个建议
1.稍稍多加一点BUFFER,它的作用就是增加样品的密度,叫样品刚好的下沉
2.点样的时候,枪头稍稍进到孔深一点,加样的时候一定要缓慢一点
3.上样的体积最好不要超过孔容积的80%
注意这3点,应该不会飘了

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western blot实验怎么上样

western blot实验怎么上样
western blot实验怎么进行上样呢?就是每个孔该加些什么,因为从来没接触过这个实验,所以很迷茫呀!

nsytg1年前1

hyjhyy 共回答了22个问题 | 采纳率81.8%

首先要设计上样的顺序,一般是让与抗体有反应的样品和没有反应的样品间隔开,这样条带之间反差比较明显.比如你的检测样能够与抗体反应,上样就是maker—阳性对照—阴性对照—检测样(N个),如果检测样比较多,可以在检测样后再加上一个阴性对照和阳性对照.
上样量一般5-20微升(样品与上样buffer混合后),可以先做个普通的染色,看看条带有没有溢出,如果溢出了就上少点,太浅就上多点.
都调整好了再继续做转印.

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快速柱层析谁能给我一个在实验中快速柱层析的实例，是实例，从样品，上样，到洗脱剂，收集体积等等，我们是考试要用，最后一个论

快速柱层析
谁能给我一个在实验中快速柱层析的实例，
是实例，从样品，上样，到洗脱剂，收集体积等等，
我们是考试要用，最后一个论述题，所以就是要自己做的不一样的实例，

初三月1年前1

熊猫护卫神葱 共回答了13个问题 | 采纳率92.3%

http://www.***.com.cn/Article/CJFDTotal-ZHOU199302017.htm

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蛋白质SDS-PAGE电泳分离胶和浓缩胶的浓度如何确定?上样缓冲液的倍数如何确定?

icekiller1年前2

13264802892 共回答了18个问题 | 采纳率94.4%

1,看目的蛋白的大小
一般actin以下的可以跑12胶
红线左右可以用12或10跑
几百的很大的用6的胶
小蛋白12的10的一般都能跑
如果不考虑效率的话...能跑多慢跑多慢,越慢跑的越好看
2,看样品浓度多少,以及你想用几次
通常我们是定到4微每微,总量100微,用10次
如果浓度小的话定到2用5次

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Western-blot实验中,蛋白上样一般多少含量

pokemon4301年前1

明月弯道 共回答了21个问题 | 采纳率100%

看你的蛋白样品是纯度很高的单一条带样品还是未经纯化较多杂带的样品.
如果是单一条带的样品10微克的上样量就足够了,如果是细胞裂解液这样的样品可以提高一些上样量30~80微克的样子.
Western-blot的理论检出限很低,可以低至皮克级,但是实际应用还需要考虑抗体的效价等影响因素.

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为什么在DNA电泳上样是要加六倍的上样缓冲液

watercat1年前1

我想我不是海才怪 共回答了19个问题 | 采纳率94.7%

加的是6*的loading buffer,不是说要加6倍的缓冲液,而是说加5微升的DNA样品,需要加1微升的6*上样缓冲液,这样6*的缓冲液被稀释成1*的了,1*才是缓冲液的工作浓度.
不懂的话再追问啊

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切胶回收样品上样时会和溴酚蓝一起漂浮起来,无法电泳检测,是怎么回事呢?

切胶回收样品上样时会和溴酚蓝一起漂浮起来,无法电泳检测,是怎么回事呢?
今天做了一把切胶回收遇到了奇怪的现象：回收后的样品准备跑电泳,但上样时发现样品和上样缓冲液混合物沉不下去,会浮起来,这样就没办法电泳,是怎么回事呢?
我用的TIANGEN的切胶回收试剂盒,回收前电泳上样时150~200uL的PCR产物,洗脱回收液使用的是专门把pH值配到7.8.0之间的去离子水,第一步溶胶液离心时有发现离不下去的现象,但再加一点PN溶胶液也都能离下去,PW漂洗了两次,但漂洗后没有空转离心去除残留的PW.切胶回收样品上样时发现样品会和溴酚蓝一起漂浮起来,无法沉降到胶孔底部,无法进行电泳检测.是什么引起回收样品无法上样的呢?真是怪了.

蚊子在火星1年前1

vanessa0_0 共回答了12个问题 | 采纳率100%

1、Loading Buffer建议用takara配送的,稀释到2X用；
2、回收后的样品里的酒精可能没有去除完全

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在向凝胶柱加入样品时,为什么必须保持胶面平整?上样体积为什么不能太大?

mypreciouss1年前1

mindeze 共回答了26个问题 | 采纳率88.5%

第一个问题：胶面平整,可以保证你的样品中,不同组分分离时,各组分都在一个平面上,不同组分之间不会混到一起,如果胶面一边高一边低（假设有组分A）,同一时间内,高低两边组分A位置不同,横向扩散的话,就和其它组分混一起了,达不到分离的目的.
第二个问题：如果上样体积过大,组分A浓度很大,那么在柱子里会占据很大体积,而柱子的体积是一定的,会和其它组分混了.

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急,201×4(711)强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂与上样溶液电导有关系吗?其吸附和解吸附的机理和条件各有

偷走你的忧伤1年前3

城市木头虫 共回答了14个问题 | 采纳率78.6%

与电导当然有关系,吸附原理就是通过官能团的OH根置换了溶液中的阴根离子,置换饱和后,再用4%NaOH料液再生

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SDS-PAGE电泳检测灵敏度一般对于SDS-PAGE上样量都是说上样多少ul，我想问下，SDS-PAGE能检测到的蛋白

SDS-PAGE电泳检测灵敏度
一般对于SDS-PAGE上样量都是说上样多少ul，我想问下，SDS-PAGE能检测到的蛋白质的最少质量是多少，也就是样品中至少要含有多少mg的蛋白质我们才能检测到。

jeery25661年前4

zhan3114 共回答了20个问题 | 采纳率95%

一般认为是 ug 量级.以每条带 能观察到的蛋白质总量为比较对象.
1.跟你的样品纯度有关.如果是一个纯蛋白,需要上样量就极少,可以到1ug 甚至更少.如果有10条带的话,那就增加总量大概10倍（10种蛋白含量相当的话）,使你的目标能看到为止,实践中需要摸索尝试.
2.跟染色方法有关,银染色比考马斯亮蓝法染色敏感100-1000倍.

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如何确定离子交换法分离蛋白质过程中的上样量和洗脱速度?

破破熊1年前1

寒夜独狼 共回答了22个问题 | 采纳率100%

看你scx柱子的结合能力吧,建议你在合适的范围内选用一组不同浓度的标准蛋白混合物来上样,通过比较起结果来确定上样量

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蛋白质分子量测定过程中,样品上样前为什么要进行沸水处理

yuexinziwu1年前2

不激活也送红包啦 共回答了21个问题 | 采纳率81%

你是用什么方法测定蛋白质分子量?
测定蛋白质分子量的方法有聚丙烯酰胺凝胶电泳,高效凝胶过滤色谱,电喷,雾离子化质谱法等,大部分都不需要煮沸!
如果你只是简单的使用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法,那么煮沸的作用一个是使得蛋白质形成单亚基,另一个是与SDS充分结合,形成性状规则的长棒状结构.
但是实际上聚丙烯酰胺凝胶电泳还有一种是非变性电泳,是不需要煮沸的!
请酌情考虑

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有谁做过高效液相色谱测DNA的甲基化,请问上样的DNA有什么要求,还有样品需要过滤膜吗,

liangleonba1年前2

liuhaib 共回答了12个问题 | 采纳率100%

这个我正在做,对dna要求的纯度是比较高,尽量用试剂盒提取吧,有蛋白的话,紫外有吸收峰,影响结果,而且容易堵柱子啊.毕竟进样的时候都是几微克的东西,你稍微有点蛋白或者其他物质,就有可能影响5-甲基胞嘧啶的峰,结果就不准确了.

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sds-page蛋白上样缓冲液(1x)如何定量蛋白?

所_以1年前1

nusan311 共回答了18个问题 | 采纳率83.3%

已经加了蛋白上样缓冲液就很难定量了,因为里面有溴酚蓝,绝大部分的蛋白定量试剂测定的吸光值都会被溴酚蓝干扰,无法准确定量.
你可以测测280试试,先测缓冲液的,如果不干扰再测样品的.
如果还是不行,我们以前实验室用的是一款Pierce 660nm的定量试剂盒,可以测在缓冲液里面的蛋白浓度.

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