MboI 内切酶的酶切位点保护碱基?

内切酶与拓扑异构酶的区别两种酶都能剪切DNA序列,有什么不同吗?

细听风雨声1年前3

pccb 共回答了16个问题 | 采纳率87.5%

内切酶主要是切外源DNA的,拓朴异构酶主要是解旋时用的,因为DNA解旋时速度很快,所以要用拓朴异构酶,否则刚解开以缠到一起了.

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做克隆时,请问在引物前加的一段保护碱基和内切酶序列需要和cDNA互补吗?

bzhang691年前2

-黄泉 共回答了20个问题 | 采纳率100%

不需要,引物的5‘端可以进行修饰,3’端需要严格保证与cDNA互补.举个例子
cDNA：ATGatcgatcgatcgTAA
引物：gg catatg TACtagcta
其中gg为保护碱基,catatg为NdeI酶切位点,都无须与模板配对,引物后面序列需要保证配对.

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AFLP选扩2%琼脂糖检测没条带,呈现全带弥散,有此经历的帮下忙,用的内切酶是Ecor1 跟Mse1

ooooo冷oo水ooooo1年前2

艾冰雪儿 共回答了16个问题 | 采纳率81.3%

片段集中在多大?若是从样品孔就开始弥散就要重新优化选扩体系.若是在你要的片段大小范围内可以跑大板看看,但多态性片段不会多.

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肽链外切酶和肽链内切酶的作用位点分别在哪里?

小碧仙1年前2

elisa_lj 共回答了16个问题 | 采纳率93.8%

肽链外切酶是从肽链的一端开始,一个接一个把氨基酸水解下来； 作用位点 ——端点
核酸内切酶则从肽链中间特殊的肽链位点将多肽裂解成小片断； 作用位点 ——中间特殊的肽链位点

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逆转录酶作用位点是什么?为什么逆转录酶与“限制性核算内切酶”作用部位是不同的?我们老师说逆转录酶是催化逆转录这个过程,而

逆转录酶作用位点是什么?
为什么逆转录酶与“限制性核算内切酶”作用部位是不同的?
我们老师说逆转录酶是催化逆转录这个过程,而非作用磷酸二酯键,不懂!

bluegem801年前1

yeppline 共回答了18个问题 | 采纳率88.9%

逆转录酶是结合在单链RNA上,催化合成互补的DNA.它形成磷酸二酯键,将组成DNA的碱基一个一个搭起来.
（虽然它还有RNA酶以及以DNA为模板合成DNA的功能,高中应该不做要求）
限制性核酸内切酶是识别双链DNA的,然后切开DNA链上的磷酸二酯键.
（限制性核酸内切酶有三类,并不都是识别专一性位点的,高中这个应该也不做要求）

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谁有fermentas内切酶对应buffer的表格?

谁有fermentas内切酶对应buffer的表格?
我在做实验的过程中要用到Fermentas的Not 1 和Apa 1两种内切酶,我想知道这两种酶公用的Buffer是哪一种,特急!请知道的人马上告诉在下,在下感激不尽!

紫风铃1234561年前1

jielawyer 共回答了16个问题 | 采纳率81.3%

NOT1 用O 橙色buffer
APA1 用B 蓝色buffe

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买的是TAKARA的内切酶 Sal I BamH I ,但是最适合温度一个37一个30,BUFFER选的是1.5T,想问

买的是TAKARA的内切酶 Sal I BamH I ,但是最适合温度一个37一个30,BUFFER选的是1.5T,想问下温度怎么定

小华爷爷1年前1

sadrgrsth 共回答了14个问题 | 采纳率85.7%

建议使用37度,因为BamH I在37度活性也是很高的,只是不如30度稳定.你可以参见商品目录A-12页.

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请问DNA内切酶可以在-40保存吗?我们的低温冷柜设为-20时,温度总是在-19和-24间浮动,不知道对酶有没有影

请问DNA内切酶可以在-40保存吗?我们的低温冷柜设为-20时,温度总是在-19和-24间浮动,不知道对酶有没有影
我们的冷柜设为-40度时温度较为稳定，设为-20度时温度变化范围较大，不知道-19和-24间浮动是否影响酶的活性？

百竹园主1年前2

我喜欢吃米粉 共回答了12个问题 | 采纳率83.3%

我们的都保存在-20度或是0度,一般的DNA限制性内切酶反应温度为28-37度,酶是蛋白质,在0度左右可保持活性,所以,冰箱出现温度小范围波动时,是没有问题.

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基因工程当中,用相同的内切酶切割载体和目的基因是为了获得相同还是互补的粘性末端

cbjnq1年前4

噗萝萝 共回答了12个问题 | 采纳率91.7%

基因工程中,用相同的内切酶切割运载体和目的基因是为了获得相同的也是互补的粘性末端.

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在百度百科上限制性内切核酸酶定义1:原核生物中催化降解外源DNA的内切酶,通过识别DNA中特异碱基序列(一般为回文结构或

在百度百科上限制性内切核酸酶定义1:原核生物中催化降解外源DNA的内切酶,通过识别DNA中特异碱基序列(一般为回文结构或反向重复序列)将DNA双链切断,形成黏末端或平末端的片段.包括Ⅰ型(EC 3.1.21.3)、Ⅱ型(EC 3.1.21.4)和Ⅲ型(EC 3.1.21.5)三种.
请问 限制性内切核酸酶仅存在原核生物中吗?

sanny2121年前3

读不懂女人心 共回答了15个问题 | 采纳率86.7%

不是.
限制性内切核酸酶(restriction enzyes)简称限制酶,最初是从原核生物中分离纯化来的,是细菌用于抗噬菌体侵染的剪除和切割噬菌体DNA的特殊的内切核酸酶.到目前为止已经从300多种不同的微生物中分离出了约500种限制性内切核酸酶.
根据作用方式不同,限制性内切核酸酶又可分为I型、Ⅱ型、Ⅲ型酶.这三种不同类型的限制酶具有不同的特性,其中II型酶由于其内切核酸酶活性和甲基化活性是分开的,而且内切核酸酶作用又只有序列特异性,故目前在基因操作研究中应用广泛.

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限制性内切酶能识别特定的DNA序列并进行剪切，不同的限制性内切酶可以对不同的核苷酸序列进行剪切。现以3种不同的内切酶对6

限制性内切酶能识别特定的DNA序列并进行剪切，不同的限制性内切酶可以对不同的核苷酸序列进行剪切。现以3种不同的内切酶对6.2kb大小的DNA分子进行剪切，并用凝胶电泳分离各核苷酸片段，结果如图所示，则由此可推断该片断的酶切图谱是

[ ]

A． B． C． D．

人生需要彪悍1年前1

爱我不悔 共回答了18个问题 | 采纳率94.4%

D

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内切酶可以切割多种DNA序列和一种内切酶只能切割一个DNA序列两句话有什么数学关系.

helixuan1年前4

chw701 共回答了25个问题 | 采纳率96%

从逻辑上讲,前者包含后者.前者的“内切酶”是指所有的具有切割DNA分子能力的酶,后者的“一种内切酶”是指某一种具有识别某段特定的DNA分子序列的内切酶.

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PCR产物的酶切问题PCR产物进行taqI内切酶酶切鉴定 结果出现了几条杂带 分析原因可能为条带内切不完全导致 昨晚酶切

PCR产物的酶切问题
PCR产物进行taqI内切酶酶切鉴定 结果出现了几条杂带 分析原因可能为条带内切不完全导致 昨晚酶切的 4度过夜了 今天我能否对剩余酶切反应液进行二次酶切?若可以酶切反应只需加入内切酶 还是BSA Buffer都要加?若不行请问为什么?

toffeetree1年前1

wjlpop 共回答了19个问题 | 采纳率94.7%

可以继续.
只需补充加入内切酶便可.
因为你的buffer没有消耗,而BSA本身只是为了保护酶活性的杂蛋白,没有特别功能,量的多少本来关系也不很大.
同行,好运!

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写出EcoRI和 HindⅢ两种内切酶消化产物的末端序列

雪儿韩妆1年前1

nobody2003 共回答了24个问题 | 采纳率87.5%

G^AATTC EcoRI的识别序列和切割位点,粘性末端即：AATTC-
CTTAA^G G-
HindⅢ的识别序列为：A^AGCTT “^”为切割位点,黏性末端为：AGCTT-
A-

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磷酸二酯键的问题单个核苷酸上有磷酸二酯键吗?如果有,那内切酶切的时候断哪个?3'5'分别代表的是哪个?

wasteair1年前1

qifeng1114 共回答了20个问题 | 采纳率100%

因该是没有的.因为磷酸二酯键是由：两个核苷酸分子核苷酸残基的两个羟基分别与同一磷酸基团形成的共价连接键.

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PCR产物酶切遇到的问题选择的内切酶 酶切位点是CC/WGG 39

PCR产物酶切遇到的问题
选择的内切酶 酶切位点是CC/WGG
39 75
C C/AGG…… C C/TGG……
pcr产物 544 切割后出现40bp 36bp 468bp 酶切后如下图
较短酶切着产物看不清,而且电泳区分不开怎么办啊



上边的不是引物而据一，在另一个胶上跑了pcr产物和酶切产物，pcr产物的引物二聚体与这个条带不同。
左边那个条带是另一个试验的产物，不需要考虑。

dong8811年前2

张三就是某 共回答了16个问题 | 采纳率81.3%

能说一下你这样酶切的目的么?40bp和36bp的条带,只相差4个bp,基本上在琼脂糖胶上就不用考虑分清楚了.最好使用聚丙烯酰胺凝胶,很多用变性聚丙烯酰胺凝胶,可以分离到碱基数相差很少的条带,而某些变性梯度聚丙烯酰胺胶,甚至能分辨只相差一个碱基的核酸.
所以如果你一定要分清40和36bp的带,就用聚丙烯酰胺试试.

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基因工程中切割目的基因和运载体一定要用相同的内切酶吗

基因工程中切割目的基因和运载体一定要用相同的内切酶吗
是不是有相同的粘性末端就可以了呢?

myz831年前2

夏天之风雨 共回答了32个问题 | 采纳率93.8%

理论上这样,其实不是
只要能录出相同的粘性末端就行了……
举个例子
,CGAT
G,CGAT
这两个不同但能又相同的粘性末端
第一个一般且目的基因
第二个一般切质粒

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DNA同源重组过程到底是什么样的?需要内切酶外切酶和链接酶吗?

DNA同源重组过程到底是什么样的?需要内切酶外切酶和链接酶吗?
同源重组两DNA是同源,但不一定序列一样,那么这些序列不一样的部分怎么办呢?这些新的序列要保留在重组后的分子中就必须把原来的那部分无法配对的基因除掉,是所谓的“基因敲除”,还是像修复那样用内切外切酶来切掉原来的单链,再由聚合酶连接酶以重组后新序列的单链为模板重新合成对应的单链?

hsew1年前1

希儿薇亚 共回答了17个问题 | 采纳率88.2%

同源重组是由于dna发生双键断裂才启动的,dna双键断裂（dsb）修复的主要机制是同源重组,有些细胞则通过非同源末端连接（NHEJ）.
同源重组断机制：1两个同源dna分子的联会.
2引入断裂dna.
3在两条重组dna间形成碱基互补的段片段起始区.
4链入侵后两个dna分子相互交叉的dna链联系在一起.交叉结构称holliday junction
5holliday联接体的剪切
所以,重新形成的序列都是互补配对的,而最后不同的剪切方式则会决定遗传物质是否交换.

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限制性内切酶是否也会切坏基因?老是说用内切酶把DNA切成基因水平的片段.但是会不会切位点正好在基因里面然后直接就把它一切

限制性内切酶是否也会切坏基因?
老是说用内切酶把DNA切成基因水平的片段.但是会不会切位点正好在基因里面然后直接就把它一切两段了?.
另外 就算内切酶没有伤及基因片段.那切出来的目的基因一头一尾的 肯定会有一些不干净的地方吧.这些碱基对 就那么听话 就不会去影响目的基因的正确表达么?

极浦青萱1年前1

mandy_ding 共回答了15个问题 | 采纳率80%

1.不会切位点正好在基因里面然后直接就把它一切两段了?
有可能,所以酶切前要做序列分析,从而选择合适的内切酶,确保目的基因片段内部没有所选用的
内切酶的识别序列.
2.切出来的目的基因一头一尾的 肯定会有一些不干净的地方吧.这些碱基对 就那么听话 就不会去影响目的基因的正确表达么?
一般不会影响目的基因的表达.除非上面有转录或者翻译调控元件.

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下列有关基因工程中限制内切酶的描述，错误的是（　　）

下列有关基因工程中限制内切酶的描述，错误的是（　　）
A. 一种限制性内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列
B. 限制性内切酶的活性受温度的影响
C. 限制性内切酶能识别和切割RNA
D. 限制性内切酶可从原核生物中提取

一生的追求11年前1

eoco521 共回答了21个问题 | 采纳率85.7%

解题思路：限制酶主要从原核生物中分离纯化出来．限制酶具有特异性，即一种限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂．限制酶切割形成黏性末端和平末端两种．

A、限制酶具有特异性，一种限制性内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列，A正确；
B、酶的活性都受温度的影响，B正确；
C、限制酶只能识别和切割DNA，C错误；
D、限制酶可以从原核生物中提取，也可以从真核生物中提取，D正确．
故选：C．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题考查基因工程的原理及技术，特别是限制酶的相关知识，要求考生识记限制酶的来源、特性及影响酶活性的因素，相关知识点只需考生识记即可，属于考纲识记层次的考查．此类试题需要考生在平时的学习过程中，注意构建知识网络结构．

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