免疫共沉淀和GST pull down技术各有何优势

Wuqilong2022-10-04 11:39:541条回答

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yimeng436 共回答了15个问题 | 采纳率100%: 都是用来研究蛋白质相互作用的技术
免疫共沉淀的话蛋白质是处于天然状态,蛋白质的相互作用可以在天然状态下进行,可以避免认为影响,还可以分离得到天然状态下相互作用的蛋白复合体.
但是问题是两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥梁作用；而且必须在实验前预测目的蛋白是什么,以选择最后检测的抗体,如果抗体选错了就没有结果.

GST pull-down是将GST融合蛋白作为探针固化到凝胶柱上,与溶液中的目的蛋白结合.可以用来确定融合（或探针）蛋白与未知（或靶）蛋白间的新的相互作用,证实探针蛋白与已知蛋白质间可疑的相互作用.
但问题是这个方法可能会出现假阳性.也就是也许是因为电荷作用的影响造成的吸附,而不是生理性的相互作用.; 1年前

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上样时要加loading buffer,煮沸.这时所有蛋白都变性,自然就分开了.也有人先将蛋白洗下来再电泳.

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pull-down assay和免疫共沉淀的区别 二个过路者1年前1: xjj323 共回答了19个问题 | 采纳率89.5%

GST pull-down一般指用一个带GST标签的重组蛋白,与目的蛋白进行孵育,最后用结合GST的Beads拉下相互作用复合物.
免疫共沉淀一般是用某一蛋白的抗体,在细胞裂解液中与相应的蛋白结果,用Protein A/G将抗原抗体复合物拉下,最后在拉下的复合物中检测目的蛋白的实验.
二者都是用于检测蛋白相互作用的实验.
区别是pull-down一般是验证体外相互作用；免疫共沉淀一般用于检测细胞水平的体内相互作用.

1年前查看全部

在免疫共沉淀过程中的问题~加蛋白标签 在免疫共沉淀过程中的问题~加蛋白标签 我用加了GFP或者Myc标签的表达质粒表达蛋白,然后做CO-IP! 用抗GFP抗体将复合物拉下来可以不? GFP会不会和细胞内其他蛋白相互作用也形成复合物而影响结果啊? 我表达的目的蛋白是想筛选相互作用蛋白，通过把GFP拉下来，GFP连接了我的表达蛋白A，蛋白A可以把未知的蛋白X一起拉下来么？ 加了GFP的会不会影响蛋白A的结构域啊？ peichangfu1年前2: apfnnji 共回答了19个问题 | 采纳率89.5%

你CO-IP的目的不是要目的蛋白么
GFP这种外源的一半不会和体内的蛋白相互作用
但是即使作用了你要的目的蛋白肯定会下来
管它其他的蛋白下不下来呢

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免疫共沉淀,就是IP,中用的琼脂糖珠是什么东西,比如说我要做A蛋白的相关蛋白, 免疫共沉淀,就是IP,中用的琼脂糖珠是什么东西,比如说我要做A蛋白的相关蛋白, 那么那个糖珠上就已经又A的抗体了是么?proteinA/G又是什么,这些糖珠是通用的么?还是每种包含抗体的糖珠都是原本就作为商品做好的,还有IP和pull down有什么不一样么?是一个是拉蛋白的抗原,一个是拉标签的区别么? 行者不辩1年前2: 风雨且从容共回答了15个问题 | 采纳率100%

IP是研究两个蛋白或者一个片段和一个蛋白之间有没有相互作用的 pull down是研究是否存在该蛋白的至于前面的问题我还不太确定应该是作为固相载体分离蛋白的

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已知两个蛋白有相互作用,用其中一个蛋白的抗体做免疫共沉淀,SDS-PAGE胶电泳后出现几条带? 已知两个蛋白有相互作用,用其中一个蛋白的抗体做免疫共沉淀,SDS-PAGE胶电泳后出现几条带? 出现两条带为什么免疫共沉淀结果跑出的带比直接跑western的带要粗? 是不是因为跑出的带粗才说明这两个蛋白（ANO1和IP3R1）之间有相互作用? burninglake1年前1: 嫩冰共回答了24个问题 | 采纳率83.3%

co-ip跑出来的两个蛋白,如果大小不一样,肯定是两条带的,跑WB前会让蛋白质变性,他们之间的结合不存在了
跑出来粗是因为co-ip相当于一个纯化的过程,没有co-ip的样是检测一大堆蛋白里面你需要的蛋白的量,而co-ip是就这两个纯化的蛋白的样,一般都会粗很多的.

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