凝胶迁移实验 聚丙烯酰胺 EMSA 结合反应体系&特异性反应确认竞争反应体系

bmbx2022-10-04 11:39:541条回答

凝胶迁移实验 聚丙烯酰胺 EMSA 结合反应体系&特异性反应确认竞争反应体系
我想知道 EMSA 这个实验中 结合反应体系 和 特异性反应确认竞争反应体系 分别有什么作用啊?譬如说哪个是阳性的阴性的空白组对照组之类的?
还有这里需要的聚丙烯酰胺凝胶是6.5%的,其中成分里有5%甘油,TBE和40%的聚丙烯酰胺,那个40%的聚丙烯酰胺怎么配制啊?这样的一个凝胶有没有上下胶?TBE怎么配制?
请不要把文库里的各种长篇大论复制黏贴给我啊.我只想知道以上这些问题.

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专顶01年的贴子 共回答了23个问题 | 采纳率87%
40%的聚丙烯酰胺是你做试验的话水的比例和药的比例,100毫升水的话,配40%的聚丙烯酰胺
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回答者:匿名用户 时间:2009-03-05 去哪里找最出色的生命科学学术交流论坛?>>> 凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA-electrophoretic mobility shift assay)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析.这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用.通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温,在非变性的聚丙烯凝胶电泳上,分离复合物和非结合的探针.DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢.同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同,可是双链或者是单链.当检测 如转录调控因子一类的DNA结合蛋白,可用纯化蛋白,部分纯化蛋白,或核细胞抽提液.在检测RNA结合蛋白时,依据目的RNA结合蛋白的位置,可用纯化或部分纯化的蛋白,也可用核或胞质细胞抽提液.竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段(特异),和其它非相关的片段(非特异),来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性.在竞争的特异和非特异片段的存在下,依据复合物的特点和强度来确定特异结合.