如题,细胞转染质粒24小时后能做免疫荧光实验吗?我们实验室一直是48小时候做,但是由于时间又冲突,我想提前做了,想问下转

PI肯定不行了 你是要做凋亡么 那就没办法了吧 Annexin 倒是可以用 如果是想染核的话还可以用DAPI 蓝色 加抗生素对细胞状态肯定有影响的 不过你只要保证要么一直加抗生素要么一直不加 不会对结果有大的影响

转染的质粒带有标记基因,比如EGFP.分析绿色细胞的比例就得到了转染效率了.

转染成功一般都会表达GFP蛋白,这个蛋白在流式上面可以用FL1通道检测到.转染成功的有表达,不成功的没表达,很容易算出细胞转染率.

制备（复制的~）
1.将冻存的菌种1：100接种于3ml的LB液体培养基中,37℃摇床过夜震荡培养.
2.取1ml活化菌种接种于100mlLB培养基中,37℃摇床培养1.5-2h.
3.将菌种在冰上放置10min.4℃、4000rpm下离心10min收集菌体.
4.弃上清,用事先冰浴的0.1mol/Lcacl2重新悬浮细胞,冰浴30min.
5.收集菌体,条件同上.
6.弃上清,在冰浴条件下加入0.1mol/Lcacl2溶液.
7.分装保存（40%甘油与感受态细胞1：1混合,使甘油的终浓度为20%）.
转化
1 连接产物加入感受态中
2 冰上放置30分钟
3 42° 90秒
4 冰上2-5分钟
5 涂板~
细胞转染（这里说的是脂质体转染,以六孔板为例,如果是电转或者病毒侵染的话再问我吧）
对于每一个孔
1 一管200ul OPTI+5ul lipofectin 静置5分钟
2 一管200ul OPTI+4ug 质粒
3 两管混合 静置20分钟
4 加入孔板中
5 4-6小时后换液

转染方法的选择对实验结果影响很大,不少转染方法都需对细胞数量,DNA与转染试剂比例,培养及检测时间进行优化.传统的转染技术,如DEAE右旋糖苷法,磷酸钙法,电穿孔法,脂质体法各有利弊,其主要原理及应用特点见下表：转染方法原理应用特点磷酸钙法磷酸钙DNA复合物吸附细胞膜被细胞内吞稳定转染
瞬时性转染不适用于原代细胞
操作简便但重复性差
有些细胞不适用DEAE-右旋糖苷法带正电的DEAE-右旋糖苷与核酸带负电的磷酸骨架相互作用形成的复合物被细胞内吞瞬时性转染相对简便、结果可重复
但对细胞有一定的毒副作用
转染时需除血清电穿孔法高脉冲电压破坏细胞膜电位,DNA通过膜上形成的小孔导入稳定转染瞬时性转染所有细胞适用性广但细胞致死率高,DNA和细胞用量大,需根据不同细胞类型优化电穿孔实验条件病毒介导法通过侵染宿主细胞将外源基因整合到染色体中稳定转染可用于难转染的细胞、原代细胞,体内细胞等逆转录病毒 特定宿主细胞但携带基因不能太大细胞需处分裂期
需考虑安全因素腺病毒通过侵染宿主细胞将外源基因整合到染色体中瞬时转染
特定宿主细胞可用于难转染的细胞
需考虑安全因素阳离子脂质体法带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞稳定转染瞬时性转染所有细胞适用性广,转染效率高,重复性好,但转染时需除血清.转染效果随细胞类型变化大Biolistic颗粒传递法将DNA用显微重金属颗粒沉淀,再将包被好的颗粒用弹道装置投射入细胞,DNA在胞内逐步释放,表达瞬时性转染可用于：人的表皮细胞,纤维原细胞,淋巴细胞系以及原代细胞显微注射法用显微操作将DNA直接注入靶细胞核稳定转染
瞬时性转染转染细胞数有限
多用于工程改造或转基因动物的胚胎细胞 除上述传统方法外,近年来国际上推出了一些阳离子聚合物基因转染技术,以其适用宿主范围广,操作简便,对细胞毒性小,转染效率高受到研究者们的青睐.其中树枝状聚合物(Dendrimers)和聚乙烯亚胺(Polyethylenimine,PEI) 的转染性能最佳,但树枝状聚合物的结构不易于进一步改性,且其合成工艺复杂.聚乙烯亚胺是一种具有较高的阳离子电荷密度的有机大分子,每相隔二个碳个原子,即每“第三个原子都是质子化的氨基氮原子,使得聚合物网络在任何pH下都能充当有效的“质子海绵”(proton sponge)体.这种聚阳离子能将各种报告基因转入各种种属细胞,其效果好于脂质聚酰胺,经进一步的改性后,其转染性能好于树枝状聚合物,而且它的细胞毒性低.大量实验证明,PEI是非常有希望的基因治疗载体.目前在设计更复杂的基因载体时,PEI 经常做为核心组成成分.线型PEI(Line PEI,LPEI) 与其衍生物用作基因转染载体的研究比分枝状PEI(Branched PEI,BPEI) 要早一些,过去的研究认为在不考虑具体条件,LPEI/DNA 转染复合物的细胞毒性较低,有利于细胞定位,因此与BPEI相比应该转染效率高一些.但最近研究表明BPEI的分枝度高有利于形成小的转染复合物,从而提高转染效率,但同时细胞毒性也增大.超高分枝的、较柔性的PEI衍生物含有额外的仲胺基和叔胺基,在染实验中发现这种PEI的毒性低,但转染效率却较高.GenEscort 是采用各种分枝状和超高分枝状的小分子PEI 与各种含有生理条件下可降解键的交联剂交联,合成出的一系列高分枝的可降解的PEI衍生物.

转染(transfection)指真核细胞由于外源遗传物质掺入而获得新的遗传标志的过程.如果掺入原核细胞叫转化,使用病毒作为载体的叫感染.
若此DNA未与宿主细胞DNA整合而获表达,称“瞬时转染(transient transfection)”；若与宿主细胞DNA整合并随后者的复制而复制称“稳定转染(stable transfection)”.

这个实验可以找威斯腾做,我以前也是在那里做的,效果很好.