革兰氏染色为红色能否确定其含有大肠杆菌?

大肠杆菌为革兰氏阴性菌,染色后为红色,芽孢细菌用芽孢染色法,呈绿色,即可区别.x0d实验原理芽孢染色法是根据细菌的芽孢和菌体对染料的亲和力不同的原理,用不同的染料进行染色,使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别.芽孢壁厚,透性低,着色、脱色均较困难,当用弱碱性染料孔雀绿在加热的情况下进行染色时,此染料可以进入菌体及芽孢使其着色,进入菌体的染料可经水洗脱色,而进入芽孢的染料则难以透出.若再用番红复染,则菌体呈红色而芽孢呈绿色.

首先要确保你的染色液的有效性.可以用 已知的细菌进行对照(金黄色葡萄球菌为G+菌,大肠杆菌为G-菌).在确保无误后,标准操作则可以确保实验的正确性.
如果,由于操作问题,如初染时间过长,脱色时间过长等原因怕出现假阳性或者假阴性的错误结果而不确定实验结果时.可采用如下方法进行简易鉴定:
将单独菌株在4%KOH 中磨均匀,然后用玻璃棒放在菌液上向上提拉,如可拉丝则为G-菌,不拉丝为G+菌.

1.选用活跃生长期菌种染色,老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性.
2.涂片不宜过厚,以免脱色不完全造成假阳性.
3.脱色是革兰氏染色是否成功的关键,脱色不够造成假阳性,脱色过度造成假阴性.

1.菌体老化的情况下可能引起其染色结果改变,因此作涂片应选取幼龄菌
2.保证涂片质量,以透过涂片能看清书上印刷字体为宜.涂片自然干燥.
3.保证染液质量,无沉渣.
4.染色时间保证,媒染不能过长,脱色不宜太久,每次染液均要冲洗干净.

革兰氏染色主要是用于细菌染色,这类性质的染料一般都是有机分子,可以溶解于有机溶剂中.酒精是一种良好的有机溶剂,可以将物质上的有机分子溶解除去.

革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法,1884年由丹麦医师Gram创立.未经染色之细菌,由于其与周围环境折光率差别甚小,故在显微镜下极难观察.染色后细菌与环境形成鲜明对比,可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征,而用以分类鉴定.革兰氏染色属复染法,即将标本固定后,先用结晶紫染色1分钟后水洗,然后加革兰碘液媒染一分钟后用酒精脱色,再用稀释石炭酸复红复染.染色后除可以看到细菌形态外,还可将细菌分为两大类,即不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G＋）.被酒精脱色复染成红色者为革兰氏阴性菌（Gˉ）.革兰氏染色原理尚不肯定,可能与细菌所带核糖核酸、细菌壁结构通透性、等电点等因素有关.致病菌如金黄色葡萄球菌、绿色溶血性链球菌、肺炎球菌、白喉杆菌、炭疽杆菌等属革兰氏染色阳性菌.百日咳杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌、流行性脑膜炎双球菌、淋病双球菌等均属革兰氏阴性.所以根据细菌的革兰氏染色性质,可以缩小鉴定范围,有利于进一步分离鉴定,以对疾病做出诊断.又由于各种抗生素的抗菌谱不同,革兰氏染色尚可做为选用抗生素的参考.
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤,具体操作方法是：
1）涂片固定.
2）草酸铵结晶紫染1分钟.
3）自来水冲洗.
4）加碘液覆盖涂面染1分钟.
5）水洗,用吸水纸吸去水分.
6）加95%酒精数滴,并轻轻摇动进行脱色,30秒后水洗,吸去水分.
7）蕃红梁色液（稀）染10秒钟后,自来水冲洗.干燥,镜检.
染色的结果,革兰氏正反应菌体都呈紫色,负反应菌体都呈红色.
其重要的临床意义在于：1.鉴别细菌 2.选择药物 3.与致病性有关：：革兰氏阳性菌能产生外毒素,革兰氏阴性菌能产生内毒素,两者的致病作用不同.

这个需要有关科研机构来做

估计是光的折射原因.后一种情况我也偶尔遇到,但是再做有没有了.你最好问问老师吧!前者估计是氧化了吧!因为台盼蓝氧化后即是蓝色,但是我觉得可能是台盼蓝快变质了.这些都是猜测,因为基本都没遇到过.

不能`` 那阴性菌不就没有颜色了?``只有复染了才能看的到是 红色的吧.

乙醇脱水脱的时间过长,应该在从玻片流下的脱色液刚刚没有颜色时即停止脱色.

涂片的厚薄和脱色时间的掌握,是革兰染色成败的关键.

革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种重要的鉴别染色法.1884年由丹麦医师Gram创立.
细菌先经碱性染料结晶紫染色,再经碘液媒染（以增加染料与细胞的亲和力）后,用酒精或丙酮脱色,再用复染色剂染色.不被脱色而保持原颜色者为革兰纸阳性菌（G+）；被脱色后又被染上复染剂的颜色者为革兰氏阳性菌（G-）.此法可将细菌分为两大类.
革兰氏染色的机理主要是利用两类细菌的细胞壁成分和结构不同.革兰氏阴性菌的细胞壁中含有较多的类脂质,而肽聚糖的含量较少.当用乙醇或丙酮脱色时,类脂质被溶解,增加了细胞壁的通透性,使初染后的结晶紫和碘的复合物易于渗出,结果细胞被脱色,经复染后,又染上复染液的颜色；而革兰氏阳性菌细胞壁中肽聚糖的含量多且交联度大,类脂质含量少,经乙醇或丙酮洗脱后,肽聚糖层的孔径变小,通透性降低,因此,细胞仍保留初染时的颜色.

革兰氏阴性菌的细胞壁脂类含量较多,当以95％酒精脱色时,脂类被溶去,使细胞壁孔隙变大,尽管95％酒精处理能使肽聚糖孔隙缩小,但因其肽聚糖含量较少,细胞壁缩小有限,故能让结晶紫(或龙胆紫)与碘形成的紫色染料复合物被95%酒精洗脱出细胞壁之外,而被后来红色的复染剂染成红色.而革兰氏阳性细菌细胞壁所含脂类少,肽聚糖多,经95％酒精脱色时其细胞壁孔隙缩小到不易让结晶紫(或龙胆紫)与碘形成的紫色染料复合物洗出细胞壁外,而被染成紫色.

紫色会盖过红色,不管什么菌,染出来都是紫的.

BAAAB,AAABA.

可以的,我们在固定细菌的时候,细菌就已经死掉了吧.
革兰氏染色的原理是依靠不同细菌的不同细胞壁结构,而不是靠不同细菌的不同生物活性.

用真菌染色的方法,能看菌丝,插片就能在镜下看到不同的菌丝.

乳酸菌是革兰氏阳性菌,所以在视野里是紫色.乳酸菌属于乳杆菌科,所以是杆状.如果仅仅镜检应该是不能分别哪些是乳酸菌,哪些是杂菌!乳酸菌也是一大类,应该有200多种!

有可能的原因是 火焰固定的时间不够至使菌种没有很好的固定在玻璃片上 或者是 染色 脱色 复染的过程中所用试剂的流量过多把菌种冲掉了,切记要缓慢进行.

希望我的回答对你有所帮助.
原理
　　通过结晶紫初染和碘液媒染后,在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物,革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密,故遇乙醇或丙酮脱色处理时,因失水反而使网孔缩小,再加上它不含类脂,故乙醇处理不会出现缝隙,因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内,使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差,在遇脱色剂后,以类脂为主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出,因此通过乙醇脱色后仍呈无色,再经沙黄等红色染料复染,就使革兰氏阴性菌呈红色.
　　染色的差异主要是由于阴性与阳性细菌细胞壁的差异所应起的.
　　①革兰氏阳性细菌的细胞壁G＋细菌细胞壁具有较厚（20-80nm）而致密的肽聚糖层,多达20层,占细胞壁成分的60%～90%,它同细胞膜的外层紧密相连.有的G＋细菌细胞壁中含有磷壁酸（teichoic-acid）,也称胞壁质（murein）,它是甘油和核糖醇的聚合物,磷壁酸通常以糖或氨基酸的酯而存在.由于磷壁酸带负电荷,它在细胞表面能调节阳离子浓度.磷壁酸与细胞生长有关,细胞生长中有自溶素（autolysins）酶类起作用,磷壁酸对自溶素有调节功能,阻止胞壁过度降解和壁溶.
　　如果细胞壁的肽聚糖层被消溶,G＋细胞成为原生质体（protoplasts）,细胞壁不复存在,而只存留细胞膜.除链球菌外,大多数G＋细菌细胞壁中含极少蛋白质.
　　②革兰氏阴性细菌的细胞壁 G—细菌细胞壁比G＋细菌细胞壁薄（15～20nm）而结构较复杂,分外膜（outer membrane）和肽聚糖层（2～3nm）（图2-10）.在细胞壁和细胞质膜之间有一个明显的空间,称为壁膜间隙（periplasmic space）.
　　外膜 G—细菌细胞壁外膜的基本成分是脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）,它同细胞质膜相同之处也是双层类脂,但除磷脂外还含有多糖和蛋白质.
　　LPS的多糖部分包括核心多糖和O-特异多糖.O-特异多糖由重复分支的碳水化合物分子组成,含有已糖（葡萄糖、半乳糖和鼠李糖）和二脱氧已糖.由于糖的种类不同,使各种G—细胞具有不同特性的LPS.核心多糖（core polysaccharide）的主要组分是酮脱氧辛酸（ketodeoxyoctonate,KDO）.
　　外膜中还含有几种蛋白,如脂蛋白、通透蛋白.有些蛋白具有通孔作用（porin）,调控外界分子进入细胞；有的蛋白分子可以作为噬菌体的受体；许多G—细菌对高等生物有致病性是由LPS的成分决定的,它的毒性组分常称为内毒素（endotoxins）.
肽聚糖层
G—细菌细胞壁的肽聚糖层很薄,在大肠杆菌和其它细菌中仅有单层.肽聚糖层和外膜的内层之间通过脂蛋白连接起来.
壁膜间隙
G—细菌细胞壁的外膜与细胞质膜之间存在明显的壁膜间隙,一层薄的肽聚糖处于其间,肽聚糖层和细胞质膜之间的间隙较宽,肽聚糖层至外膜之间的间隙较窄.大肠杆菌的壁膜间隙宽度为12～15nm,呈胶胨态.其间含有三类蛋白质：水解酶,催化食物的初步降解；结合蛋白,启动物质转运过程；化学受体（chemoreceptors）,在趋化性中起作用的蛋白.
染色结果
　　革兰氏阳性菌都呈紫色,革兰氏阴性菌都呈红色.

无法分辨出来,这两种菌不用染色就可以看的为什么要染色呢?

乙醇处理时脂质溶解,细胞壁通透性增加,原先滞留在细胞壁中的碘-结晶紫复合物容易被洗脱下来,菌体变为无色,被复染剂染后变为复染剂的颜色.
当乙醇洗脱过度时,革兰氏阳性菌也可能被洗脱初染时的蓝紫色,被复染成复染剂的颜色,造成假阴性.
当乙醇脱色不够时,革兰氏阴性菌的细胞壁上的碘-结晶紫复合物没有被洗脱而保有原有的蓝紫色,造成假阳性.
选取适龄（一般为生长期）菌体主要是为了保证菌体有正常的形态,细胞壁有良好的通透性,老龄菌体有很大概率存在畸变而影响实验结果.

C、单染色 A为检测阴阳性菌

革兰氏染色必须在同一载玻片上做阴阳对照结果才才可信.
比如左边是阳性菌枯草芽孢杆菌,中间是未知菌,右边是阴性菌大肠杆菌.
一起同时做染色,芽孢杆菌紫色,大肠杆菌红色的情况下,说明染色操作没有问题,未知菌是阳性就是阳性,阴性就是阴性.
不过很多时候,由于操作技术问题,同一块菌斑中有的是阳性有的是阴性的情况也会发生.这种时候无法判断,就要重做.所以革兰氏染色法受到操作的影响太大,现在学术界判断革兰氏阴阳性也只是把传统的染色方法作为参考,到底阳性阴性以电子显微镜切片后的细胞膜亚显微结构照片作为主要依据.

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)球型,直径0.8 um左右；大肠杆菌大小0.0.7×1 3um；枯草芽孢杆菌单个细胞0.0.8×2～3um;
我有用革兰氏染色比较过大肠杆菌和枯草芽孢杆菌,枯草比大肠大；也一起观察过大肠和金黄色葡萄球菌,这两个不好比较,只能说,金黄色葡萄球菌比大肠宽,但没大肠长.

不可以.因为革兰氏碘液（媒染剂）的作用是增加结晶紫染料和细胞之间的亲和性或附着力,即以某种方式帮助染料固定在细胞上,使不易脱落.改变顺序可能会对效果有影响,所以最好按步骤做.
脱色后复染前,理论上革兰氏阳性菌呈紫色,阴性菌无色.复染的目的就是增加无色阴性菌与背景的反差,以便区别于紫色的阳性菌
革兰氏阳性菌细胞壁厚,肽聚糖网状分子形成一种透性障,当乙醇脱色时,肽聚糖脱水而孔障缩小,故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上.呈紫色.
革兰氏阴性菌肽聚糖层薄,交联松散,乙醇脱色不能使其结构收缩,其脂含量高,乙醇将脂溶解,缝隙加大,结晶紫-碘复合物溶出细胞壁,番红复染后呈红色.
革兰氏染色步骤：
1.涂片,火焰固定
2.结晶紫1min,使菌体着上紫色
3.水洗
4.碘液1min,碘和结晶紫形成脂溶性大分子复合物,分子大,能被细胞壁阻留在细胞内
5.水洗
6.酒精脱色30s,细胞壁成分和构造不同,出现不同的反应.
7.水洗
8.番红复染1min,增加脱色菌与背景的反差并区别于未脱色菌.
9.以吸水纸吸干,油镜观察

一般有EMB平板和MCK平板,都是利用致病菌不分解乳糖,所以肠道不致病菌如大肠埃希菌培养出来分别是紫黑色和深红色,致病菌如伤寒沙门菌就是无色透明的.
有可能培养出来肠道不致病菌和某些致病菌,这取决于老师给你的材料里有什么菌,是什么患者的分辨,有待检测.
至于浓汁,一般就是普通平板培养吧,一般为金黄色葡萄球菌
至于格兰染色,这取决于细菌细胞壁本身的性质,格兰阳性菌染色后为紫色,格兰阴性菌为红色.
格兰阴性菌为：奈瑟均属,霍乱弧菌,幽门螺杆菌,肠道杆菌,布鲁菌属,鼠疫耶尔森等
其余为革兰阳性菌

革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法,1884年由丹麦医师Gram创立.未经染色之细菌,由于其与周围环境折光率差别甚小,故在显微镜下极难观察.染色后细菌与环境形成鲜明对比,可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征,而用以分类鉴定.革兰氏染色属复染法,即将标本固定后,先用结晶紫染色1分钟后水洗,然后加革兰碘液媒染一分钟后用酒精脱色,再用稀释石炭酸复红复染.染色后除可以看到细菌形态外,还可将细菌分为两大类,即不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G＋）.被酒精脱色复染成红色者为革兰氏阴性菌（Gˉ）.革兰氏染色原理尚不肯定,可能与细菌所带核糖核酸、细菌壁结构通透性、等电点等因素有关.致病菌如金黄色葡萄球菌、绿色溶血性链球菌、肺炎球菌、白喉杆菌、炭疽杆菌等属革兰氏染色阳性菌.百日咳杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌、流行性脑膜炎双球菌、淋病双球菌等均属革兰氏阴性.所以根据细菌的革兰氏染色性质,可以缩小鉴定范围,有利于进一步分离鉴定,以对疾病做出诊断.又由于各种抗生素的抗菌谱不同,革兰氏染色尚可做为选用抗生素的参考.
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤,具体操作方法是：
1）涂片固定.
2）草酸铵结晶紫染1分钟.
3）自来水冲洗.
4）加碘液覆盖涂面染1分钟.
5）水洗,用吸水纸吸去水分.
6）加95%酒精数滴,并轻轻摇动进行脱色,30秒后水洗,吸去水分.
7）蕃红梁色液（稀）染10秒钟后,自来水冲洗.干燥,镜检.
染色的结果,革兰氏正反应菌体都呈紫色,负反应菌体都呈红色.

涂片是要注意不能过厚,影响制片的染色效果.
菌液过厚染色不均匀且菌体易重叠
染液厚了,不容易脱色,你会分不清紫色和红色的

在革兰氏染色中,枯草杆菌是革兰氏阳性菌,被染成紫（或紫红色）.而大肠杆菌是革兰氏阴性菌,被染成红色.
你的会不会是革兰氏阴性细菌啊,
由于细菌细胞壁的结构不同,革兰氏染色法可使有的细菌染上初染的的紫色,如革兰氏阳性细菌,但有的细菌染上复染的红色,就是革兰氏阴性细菌

设置一个对照组实验,具体操作可以如下,载玻片可以分为三个区域,从左到右,依次接种金黄色葡萄球菌,未知目的菌,大肠杆菌.然后进行革兰氏染色,对三种菌株来说,进行的是完整且相同的实验操作,而金黄色葡萄球菌是已知的革兰氏阳性菌,染色后呈紫色；大肠杆菌是革兰氏阴性菌,染色后是红色.这样,利用已知菌的性质,保证待测菌的染色所得结果可靠,准确.
希望对你有帮助,谢谢,有错误,欢迎指出.

操作步骤
1．涂片将培养14—16小时的枯草芽孢杆菌和培养24小时的大肠杆菌分别作涂片（注意涂片切不可过于浓厚）,干燥、固定.固定时通过火焰1—2次即可,不可过热,以载玻片不烫手为宜.
2．染色
（1）初染 加草酸铵结晶紫一滴,约一分钟,水洗.
（2）媒染 滴加碘液冲去残水,并覆盖约一分钟,水洗.
（3）脱色 将载玻片上面的水甩净,并衬以白背景,用95％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止,约20—30秒钟,立即用水冲净酒精.
（4）复染 用番红液染1—2分钟,水洗.
（5）镜检 干燥后,置油镜观察.革兰氏阴性菌呈红色,革兰氏阳性菌呈紫色.以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准,过于密集的细菌,常常呈假阳性.
（6）同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合制片,作革兰氏染色对比.
革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度,如脱色过度,则阳性菌可被误染为阴性菌；而脱色不够时,阴性菌可被误染为阳性菌.此外,菌龄也影响染色结果,如阳性菌培养时间过长,或已死亡及部分菌自行溶解了,都常呈阴性反应.

分离成单个菌体、在培养基中培养成菌斑,涂板、染色、显微镜就可以找到染色体非常清晰的染色菌体!

如果不进行固定,冲洗时就会把菌体洗掉

革兰氏染色的原理是：当用结晶紫初染后,像简单染色法一样,所有细菌都被染成初染剂的紫色.碘作为媒染剂,它能与结晶紫结合成一种结晶紫-碘的复合物,这种复合物增强了染料与细菌的结合能力.当用脱色剂脱色时,不至于很轻易就把紫色脱去,因此当用革兰氏染色法对某些菌染色时,如果这种菌本身能够与结晶紫结合的足够紧密,我们就可以省去媒染这一步.具体是哪种菌也不好说,具体情况具体分析,一般还是用媒染吧

革兰氏染色
一、x09目的：在细胞发放之前,利用标准的革兰氏染色法对即将发放的细胞悬液进行检测,判断细胞悬液中是否含有革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌.
二、x09原理：
通过结晶紫初染和碘液媒染后,在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物,革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密,故遇乙醇脱色处理时,因失水反而使网孔缩小,再加上它不含类脂,故乙醇处理不会出现缝隙,因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内,使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差,在遇脱色剂后,以类脂为主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出,因此通过乙醇脱色后仍呈无色,再经沙黄等红色染料复染,就使革兰氏阴性菌呈红色.
三、实验用品准备：
灭菌玻片、10-100ul移液器、10-100ul灭菌移液吸头、100ul-1000ul移液器、100ul-1000ul移液吸头、接种环、酒精灯、打火机、革兰氏染色液、吸水纸、显微镜、香柏油、擦镜纸、计时器
四、x09操作：
1 涂片：取灭过菌的载玻片于实验台上,用移液枪吸取10ul待检样品滴在载玻片的中央,用烧红冷却后的接种环将液滴涂布成一均匀的薄层,涂布面不宜过大.
2 干燥：将标本面向上,手持载玻片一端的两侧,小心地在酒精灯上高处微微加热,使水分蒸发,但切勿紧靠火焰或加热时间过长,以防标本烤枯而变形.
3 固定：固定常常利用高温,手持载玻片的一端,标本向上,在酒精灯火焰处尽快的来回通过2-3次,共约2-3秒种,并不时以载玻片背面加热触及皮肤,不觉过烫为宜（不超过60℃）,放置待冷后,进行染色.
4 初染：在涂片薄膜上滴加草酸铵结晶紫1-2滴,使染色液覆盖涂片,染色约1min.
5 水洗：斜置载玻片,在自来水龙头下用小股水流冲洗,直至洗下的水呈无色为止.
6 媒染：用100-1000ul移液枪吸取约300ul碘液滴在涂片薄膜上,使染色液覆盖涂片,染色约1min.
7 水洗：斜置载玻片,在自来水龙头下用小股水流冲洗,直至洗下的水呈无色为止.
8 脱色：斜置载玻片,滴加95%乙醇脱色,至流出的乙醇不现紫色为止,大约需时20-30S,随即水洗.
9 复染：在涂片薄膜上滴加沙黄染液1-2滴,使染色液覆盖涂片,染色约1min.
10 水洗：斜置载玻片,在自来水龙头下用小股水流冲洗,直至洗下的水呈无色为止.
11 干燥、观察：用吸水纸吸掉水滴,待标本片干后置显微镜下,用低倍镜观察,发现目的物后滴一滴浸油在玻片上,用油镜观察细菌的形态及颜色,紫色的是革兰氏阳性菌,红色的是革兰氏阴性菌

大肠杆菌是革兰氏阴性短杆菌,染色当然呈阴性了；
金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性菌,染色当时呈阳性；
要解释原因,就必须弄清楚革兰氏染色的原理.革兰氏染色的原理是基于两类菌的细胞壁成分不同.
革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密,能把染液牢牢留在壁内,使其仍呈紫色；
革兰氏阴性菌因其细胞壁薄,薄而松散的肽聚糖网不能阻挡染液溶出,因此通过乙醇脱色后仍呈无色,就使革兰氏阴性菌呈红色.
大肠杆菌的细胞壁薄,所以染色呈阴性；金黄色葡萄球菌细胞壁厚,所以染色呈阳性.

陈旧培养物中衰老死亡的、或者临床样本中被吞噬细胞吞噬破坏的革兰阳性菌进行革兰染色后看到的是红色.

原理 通过结晶紫初染和碘液媒染后,在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物,革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密,故遇乙醇或丙酮脱色处理时,因失水反而使网孔缩小,再加上它不含类脂,故乙醇处理不会出现缝隙,因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内,使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差,在遇脱色剂后,以类脂为主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出,因此通过乙醇脱色后仍呈无色,再经沙黄等红色染料复染,就使革兰氏阴性菌呈红色.
乙醇是细胞膜上的脂类物质溶解,产生细胞膜间隙,使结晶紫与碘复合物洗出来,番红复染后呈现红色

找事先已知的且和未知菌形态明显不同的G+和G-分别做混合涂片,当和G+做时G+正确显紫色和当和G-做时G-正确显红色,看这个未知菌分别显什么色,若一致,则可确定此菌为G+或G-.再回过头单做此未知菌的革兰氏染色,显现正确那就证明此染色技术操作正确.也可在开始做已知的与此菌形态明显不同的G+和G-三者混合涂片,一下知晓此未知菌的阴阳性,再回过头来染色.

革兰氏染色是非常经典的染色方法,我学基础生物学实验的时候就切身实践过啊,革兰氏染色最重要的实验顺序和每道顺讯时间的把握.
未经染色之细菌,由于其与周围环境折光率差别甚小,故在显微镜下极难观察.染色后细菌与环境形成鲜明对比,可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征,而用以分类鉴定

染色时,乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节,脱色不足,阴性菌被误染成阳性菌,脱色过度,阳性菌被误染成阴性菌,脱色时间一般为20~30s.

细菌的细胞壁厚度因细菌不同而异,一般为15-30nm.主要成分是肽聚糖,由N-乙酰葡糖胺和N-乙酰胞壁酸构成双糖单元,以β-1,4糖苷键连接成大分子.N-乙酰胞壁酸分子上有四肽侧链,相邻聚糖纤维之间的短肽通过肽桥（革兰氏阳性菌）或肽键（革兰氏阴性菌）桥接起来,形成了肽聚糖片层,像胶合板一样,粘合成多层.
还有一些缺壁细菌,分为四类：①L型细菌,是指某些在实验室或宿主体内,通过自发突变,形成细胞壁缺陷的变异菌株；②原生质体,是指在人为条件下（用溶菌酶或青霉素）处理革兰氏阳性细菌,获得的无壁细胞；③球状体,是指在人为条件下,处理革兰氏阴性菌,获得的残留部分细胞壁的细胞；④支原体,是指在进化过程中获得的无壁的原核微生物.

通过结晶紫初染和碘液媒染后,在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物,革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密,故遇乙醇或丙酮脱色处理时,因失水反而使网孔缩小,再加上它不含类脂,故乙醇处理不会出现缝隙,因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内,使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差,在遇脱色剂后,以类脂为主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出,因此通过乙醇脱色后仍呈无色,再经沙黄等红色染料复染,就使革兰氏阴性菌呈红色.

革兰氏染色法是细胞质染色.革兰氏阳性菌细胞壁特殊组份 细胞壁较厚,约20～80mm.肽聚糖含量丰富,有15～50层,每层厚度1nm,约占细胞壁干重的50～80%.此外尚有大量特殊组份磷壁酸(Teichoic acid).当初染时结晶紫进入到细胞质中,脱色时由于其壁厚结晶紫依然保留在细胞质中.

革兰氏

步骤
　　革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤,具体操作方法是：　　1）涂片固定.　　2）草酸铵结晶紫染1分钟.　　3）自来水冲洗.　　4）加碘液覆盖涂面染约1分钟.　　5）水洗,用吸水纸吸去水分.　　6）加95%酒精数滴,并轻轻摇动进行脱色,20秒后水洗,吸去水分.　　7）蕃红染色液（稀）染2分钟后,自来水冲洗.干燥,镜检.
结果
染色结果
　　革兰氏阳性菌都呈紫色,革兰氏阴性菌都呈红色.

革兰氏染色：
（1）涂片：涂片方法与简单染色涂片相同.
（2）晾干：与简单染色法相同.
（3）固定,与简单染色法相同
（4）结晶紫色染色：将玻片置于废液缸玻片搁架上,加适量（以盖满细菌涂面）的结晶紫染色液染色1分钟.
（5）水洗：倾去染色液,用水小心地冲洗.
（6）媒染：滴加卢哥氏碘液,媒染1min.
（7）水洗：用水洗去碘液.
（8）脱色：将玻片倾斜,连续滴加95%乙醇脱色20—25s至流出液无色,立即水洗.
（9）复染：滴加蕃红复染5min.
（10）水洗：用水洗去涂片上的蕃红染色液.
（11）晾干：将染好的涂片放空气中晾干或者用吸水纸吸干.
（12）镜检：镜检时先用低倍,再用高倍,最后用油镜观察,并判断菌体的革兰氏染色反应性.
（13）实验完毕后的处理：
①将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净,a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去.b.用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦2—3次.c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2—3次.注意擦镜头时向一个方向擦拭.
②看后的染色玻片用废纸将香柏油擦干净.
1.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色.如脱色过度,革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时间过短,革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌.脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响,难以严格规定.
2.染色过程中勿使染色液干涸.用水冲洗后,应吸去玻片上的残水,以免染色液被稀释而影响染色效果.
3.选用幼龄的细菌.G+菌培养12h-16h,E.coli培养24h.若菌龄太老,由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应.

用酒精脱色 注意时间 20S到30S