0.1%的中性红乙醇溶液和0.1%的次甲基蓝乙醇溶液,如何配置?

这两种琼脂虽然都和大肠菌群有关,但是不同的项目就应该选择国家标准上规定的琼脂来做,不可混用.如果你是做食品,那么应该根据GB4789.3-2010中的平板计数法来测定,此时用的就是VRBA如果你是做饮用水,那么应该根据GB/T5...

酚酞,第一等当点时是碳酸氢钠,溶液的PH大约在8-9之间.

我所理解的：
中性红染色细胞液时,如果活性差时,容易导致液泡不着色,反而是原生质和细胞核中的一些阴离子负电荷使之结合而着色,所以单看液泡颜色应当比原来浅,而核染色应当深.

健那绿,即Janus green B 染液,原来也曾译为詹纳斯绿 B,常用作线粒体专一性活体染色剂.【原理】线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色,而在周围的细胞质中染料被还原,成为无色状态.
中性红：
死细胞的液泡不被着色或浅染,染料弥散于整个细胞中,细胞核和细胞质被染成红色.中性红是一种弱碱性 pH 指示剂,变色范围 pH6.8.0 之间（由红变黄）.在中性或微碱性环境中,植物的活细胞能大量吸收中性红并向液泡中排泌,由于液泡在一般情况下呈酸性反应,因此,进入液泡的中性红便解离出大量阳离子而呈现樱桃红色,在这种情况下,原生质和细胞壁一般不着色；死细胞由于原生质变性凝固,细胞液不能维持在液泡内,因此,用中性红染色后,不产生液泡着色现象,相反,中性红的阳离子,却与带有一定负电荷的原生质及细胞核结合,而使原生质与细胞核染色.

台盼蓝是检测细胞膜完整性最常用的生物染色试剂.健康的正常细胞能够排斥台盼蓝,而死亡的细胞,膜的完整性丧失,通透性增加,细胞可被台盼蓝染成蓝色.活细胞细胞膜有选择透性,对台盼蓝的透性小,进入细胞慢.若染色时间过长,台盼蓝可能通过胞吞或胞饮作用进入细胞.进而显示为蓝色.
中性红是一种弱碱性 pH 指示剂,变色范围 pH6.8.0之间（由红变黄）.在中性或微碱性环境中,植物的活细胞能大量吸收中性红并向液泡中排泌,由于液泡在一般情况下呈酸性反应,因此,进入液泡的中性红便解离出大量阳离子而呈现樱桃红色,在这种情况下,原生质和细胞壁一般不着色；死细胞由于原生质变性凝固,细胞液不能维持在液泡内,因此,用中性红染色后,不产生液泡着色现象,相反,中性红的阳离子,却与带有一定负电荷的原生质及细胞核结合,而使原生质与细胞核染色.
所以我推测是你染色时间过长,或者是你的实验操作过程中导致细胞都死亡完了,所以都能被染色.

延长区中液泡数量少的原因是小液泡合并成大液泡了,染色浅的原因是由于液泡大,中性红的浓度相对低,颜色就浅.

你是在做大肠菌群计数吧?
在已经倾注好并凝固了的平板上再倒一次琼脂,那是为了防止表面有迁徙性细菌生长,因为一旦有迁徙性菌落生长蔓延,如果没有超过半个平板,还可以用另一半计数乘以2来计算,如果超过一半,那这块平板就不能用于计数了.
再倒一次琼脂把可能存在的迁徙性菌落封在琼脂内,让其不能蔓延开来,这样就不会对结果观察造成影响了.
每个稀释度做两个平皿,所有使用琼脂进行微生物计数的方法都是这样.因为微生物很难分散得足够均匀,取平均值较为可靠.另外也可以在一定程度上预防污染,一块污染了还可以用另一块.

盐酸滴定碳酸钠至第一等当点时发生的反应：HCl+Na2CO3==NaCl+NaHCO3
生成了NaHCO3,NaHCO3显碱性,但碱性较弱,用中性红效果较好.（酚酞红色变浅不易区分,中性红由黄到红容易看出来）