Real-time PCR和RT PCR有什么区别?

hp12252022-10-04 11:39:543条回答

已提交，审核后显示！提交回复

pxjl84 共回答了8个问题 | 采纳率: rt-pcr 反转录好直接用普通pcr体系普通引物做pcr进行电泳检测条带就可以。real－time则要用专用体系带荧光的在专用机器上进行pcr并实时监控dna浓度变化所以叫做real－time，结果可以得到定量结果，相比前者更精细准确。; 1年前

rt pcr可以检测磷酸化基因表达量吗 rt pcr可以检测磷酸化基因表达量吗 新手,谢谢 照射雷达1年前1: 蓝娇子2004 共回答了17个问题 | 采纳率94.1%

磷酸化是翻译后修饰,在蛋白水平上的修饰,在基因水平,是否磷酸化是看不出来区别的.mRNA的量不仅不能够反应实时状态下蛋白的量,就更不用说区分蛋白是否磷酸化了.通常检测磷酸化的水平,WB能看一个大致相对水平,MS会用得比较多.

1年前查看全部

RT PCR只跑出内参的条带,没有目的基因,原因有哪些? hansol5161年前3: 笨笨7758521 共回答了21个问题 | 采纳率95.2%

我也遇到过这种问题,个人觉得可能是目的基因的定量引物不好,还有就是要优化PCR条件!

1年前查看全部

发文章用real time PCR 好还是用RT PCR好 发文章用real time PCR 好还是用RT PCR好 都做 RNA 反转录 ghappy1年前1: MJM321123 共回答了23个问题 | 采纳率95.7%

都要最好,RT-PCR的电泳图直观定性,一目了然,再配一个real time PCR的bar图,其统计性好,定量程度高.editor当然希望你两个图都有啊.如果非要选择一个的话,real time PCR是现在主流,毕竟是定量的实验

1年前查看全部

怎样设计RT PCR引物RT步骤里的OLIG（dt）和PCR步骤里的引物都需要设计吗?怎么设计呢? lotus10061年前1: 跟贴跟贴共回答了13个问题 | 采纳率92.3%

Oligo dt不需要设计,用试剂盒里面的就行.如果你RT的引物想用自己的,那你需要扩增的基因序列应该是明确的吧.RT的时候'引物没太多的选择性,mRNA序列跟反义链配对,因此RT的引物要根据正义链（就是通常描述基因序列的那条链）3'末端往5'末端的顺序来合成.需要注意通过控制引物的长度,控制Tm,毕竟反转录反应都在42℃进行的.
PCR用的引物建议使用primer primer等软件来设计.首先自己估算你目标条带的Tm值,然后在软件里面设定引物的Tm为目标的Tm附近,通常引物与模板配对区长度在20-25bp,扩增长度超过10k的话引物中与模板配对的要延长到30bp或更长,扩增长度、自由能、二聚体等要求就按照软件列出做填空就行了.最后,软件会给出一些引物对选择,你自己选择上下游引物Tm差值小的、二聚体和cross dimer以及false priming情况可以接受的那对引物组合.
空说太空泛了,需要的话跟我给我发消息,然后mail联系.

1年前查看全部

PCR的能量来源?RT PCR的能量来源是什么?如果是ATP,那怎么解决“ATP不能稳定存在”的问题?为什么不是70度的 PCR的能量来源? RT PCR的能量来源是什么?如果是ATP,那怎么解决“ATP不能稳定存在”的问题?为什么不是70度的温度来提供能量?.. zcl856311年前3: 野丫头片子共回答了10个问题 | 采纳率100%

你理解错了,考察DNA复制过程,DNA聚合酶通过模板连,利用dNTP来合成新DNA链.
PCR是聚合酶链式反应,70度是延伸温度,这个温度是TAQ酶的最适温度,不是什么能量来源.
来源是发生在TAQ酶聚合DNA时产生的.dNTP加入到延伸链的3`端,与上一个核苷酸形成2酯键.同时释放一个焦磷酸PPi,焦磷酸不稳定,极易水解,释放能量产生磷酸.这2个反应互相偶联.
所以.推动TAQ酶聚合DNA的能量是由PPi水解这个反应推动的.

1年前查看全部

实时定量PCR和反转录PCR均为RT PCR,如何区分什么时候说的是哪个? 网络独侠1年前1: loverlulu 共回答了17个问题 | 采纳率76.5%

通常文献中说的RTPCR是指反转录PCR,实时定量一般说RealtimePCR...

1年前查看全部