蛋白质纯化,凝胶过滤层析填料我现在在做蛋白质纯化,蛋白没有标签,大小7KD,等电点8.8左右,要用凝胶过滤层析,想请问做

北岸人8882022-10-04 11:39:542条回答

蛋白质纯化,凝胶过滤层析填料
我现在在做蛋白质纯化,蛋白没有标签,大小7KD,等电点8.8左右,要用凝胶过滤层析,想请问做过凝胶过滤层析的各位,用哪种填料比较好?现在已知常用的填料有交联葡聚糖凝胶,琼脂糖凝胶,聚丙烯酰胺凝胶和聚苯乙烯凝胶等.我已经知道要从蛋白大小来考虑柱子填料的规格了.

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共2条回复

520yyf 共回答了21个问题 | 采纳率90.5%: 首先琼脂糖凝胶可以排除,这是大孔凝胶,用于分子量较大的成分.
我做分子筛用的比较多的柱子都是葡聚糖凝胶凝胶,我的蛋白比你的大,用G50和G100的填料,做的结果都没什么问题.
你的蛋白7kD,如果没有什么特别的性质（高级结构是球形还是其他的,有无多聚）,G50应该可以.如果你不放心,也可以考虑聚丙烯酰胺凝胶,它和葡聚糖凝胶相比更适合于分子量稍小的蛋白,可能更实用于你的实验.
聚苯乙烯凝胶没用过,不发表意见.; 1年前

叉哥123 共回答了3个问题 | 采纳率: 你的目的蛋白只有7KD,太小了，用凝胶层析的话这样出来的很慢，因为凝胶层析是根据分子量大小来分离的。如果你坚持用凝胶层析的话，我建议用Bio-Gel P60,聚丙烯酰胺，它的分离范围是3-60kd，流速是3-6cm/h; 1年前

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这个要看具体情况.
如果直接层析,盐会进入凝胶内部,出来最晚.如果你要的蛋白是分子量较大,出来早的,影响就不大；如果你要小分子量的,就和盐分不开,就要先除盐.
不过,盐析时加的盐很多,如果样品体积大,这么多盐会对层析造成干扰,所以一般都会先除盐.

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这玩意有点高级的!
好像是针对特定的蛋白,合成出相应配基的基因,然后培养出带配件的蛋白,并接枝到色谱填料上,以此用来分离纯化之前蛋白.

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