siRNA转染后目的蛋白没有减低是为什么?

腺病毒载体与慢病毒载体哪个更好两种载体各有什么优缺点?与普通的转染方法相比较有什么优势?

身轻如燕rr子1年前1

Intentionally 共回答了17个问题 | 采纳率88.2%

慢病毒载体转染效率高,可以构建稳定表达细胞系.但是,有可能发生重组的危险,所以要小心.
腺病毒载体做瞬时表达,转染较容易.但是,转染效率不高.

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转导,转染的区别?

jackfang1年前3

无关花开 共回答了14个问题 | 采纳率100%

转染
真核生物,转染就是原核生物中转化的同义词,具有与原核生物的转化完全相同的过程.
原核生物,偶尔也用到转染这个词,当细菌的转化过程中吸收的外源DNA是病毒DNA时就应该称此过程为转染
转导是指通过病毒将一个宿主的DNA转移到另一个宿主的细胞中而引起的基因重组现象.
区别总结
转染：接收和表达噬菌体,外源DNA是噬菌体的DNA
转导：噬菌体外壳蛋白误包装一个宿主的DNA而导入到另一个宿主中,进行重组,外源DNA是另一个宿主.

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cos-7细胞是真核还是原核细胞?如果要转染入这个细胞的话,构建的质粒必须是pcDNA这个载体吗?

cos-7细胞是真核还是原核细胞?如果要转染入这个细胞的话,构建的质粒必须是pcDNA这个载体吗?
另外请问这个 pcDNA3.1 /CT-GFP-TOPO是什么意思?如何翻译?如果要转染进COS-7细胞的话如何选择表达载体会比较合适些?

一苇杭之0011年前1

心晴惜雨 共回答了20个问题 | 采纳率90%

来源是猴肾细胞,当然是真核.只要有真核启动子的表达质粒都可以用来表达.pcDNA3.1 /CT-GFP-TOPO的可能意思是以pcDNA 3.1 为骨架,克隆插入有目的基因,在C端有GFP的融合蛋白.当然也有可能有其他意思,要看序列而定.理解就可以了,文章中是不需要翻译的.

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启动子和目的基因起始密码子ATG之间有十几个碱基,构建的质粒用于转染真核细胞对目的基因的表达有影响吗?

启动子和目的基因起始密码子ATG之间有十几个碱基,构建的质粒用于转染真核细胞对目的基因的表达有影响吗?
比如是十四个,不是而且3的倍数.
比如是14个，不是3的倍数。

xyg82661年前1

莲心依旧 共回答了23个问题 | 采纳率87%

启动子是转录,起始密码子是翻译,两者有什么关联么?
换而言之转录了之后翻译开始核糖体还是只认最近的这个AUG去结合的啊,不会有影响

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如何让一个细胞过度表达某种基因,来观察此基因的作用,瞬时转染和稳定转染都用什么方法

如何让一个细胞过度表达某种基因,来观察此基因的作用,瞬时转染和稳定转染都用什么方法
转染时每个细胞只近入一个质粒还是很多质粒,过度表达的标准是什么呢

4991448761年前1

amy-txc 共回答了27个问题 | 采纳率96.3%

转染的话一般是以克数来规范转染的质粒数量,所以会有很多质粒.一般转染的质粒除了带有需要过表达的基因以外,还需要带有标记基因.标记基因可以被特定的抗体检测,从而判断是否有效表达.如果你要过表达的是某种蛋白,也可以直接通过该蛋白的抗体检测,对照是没有转染的同种细胞,这样表达效果就可以通过WESTERN BLOT看见了.过表达倒没什么标准,每种蛋白表达量也不一致,选择适合自己的浓度就好.
顺转的话,我们实验室采用lipo2000,具体步骤百度文库有,英文的protocol在lipo2000的说明书上也能看到.
稳转的话一般需要在质粒上构建某个抗性基因,如嘌呤霉素抗性.这样用抗性培养基多次筛选就可以筛选出稳转的细胞株,但是比较难.

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请问HEK293细胞如何将质粒转染进去,有没有具体的步骤?我有lipo2000

yunyun12的爷爷1年前1

qiaoq0635 共回答了16个问题 | 采纳率100%

看看lipo的说明书不就知道啦 以6孔板的一个孔为例吧
一管200ul OPTI+5ul lipo 静置5分钟
另一管200ul OPTI+4mg质粒
两管混匀静置20分钟后加到一个孔里
4-6小时后换液

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干细胞如何转染质粒

danwuhen1年前3

布布-tinna 共回答了27个问题 | 采纳率92.6%

最保险的方法当然是用慢病毒转染,全交给公司做,周期3个月左右,价格在2万以内.自己做就考验技术和人品了,要能问一些实验借到空白的病毒质和包装质粒,或者买英俊或热电的系统,然后自己构建转染质粒、包装,整个周期2到12个月（真的要看人品）,成本如果有现成试剂与质粒应该在3000以内.
其实,其它常规转染方法也可以,就看你的细胞了,先试一下常规转染方法（脂质体2000、电转）,不行再用慢病毒.

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共转染是将两个基因构建到一个载体上,再转染的意思吗,还是两个基因构建到两个载体,再将两个载体转染?

共转染是将两个基因构建到一个载体上,再转染的意思吗,还是两个基因构建到两个载体,再将两个载体转染?
但是质粒不相容啊,可以转两个质粒到同一细胞吗?

linda_weta1年前2

liuxunjian462 共回答了17个问题 | 采纳率88.2%

共转染就是把2种以上的质粒同时转染到同一个细胞.谁告诉你“但是质粒不相容啊,可以转两个质粒到同一细胞吗?”这个概念的?完全错误.我发表过的一篇文章,专门就是用这个共转染的方法,你可以看看当然,你把2个序列同时克...

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lip2000能转染DNA吗

liblin1年前1

Koring 共回答了18个问题 | 采纳率94.4%

可以啊.按照protocol来做

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24孔板里293细胞转染,总是后面的孔里细胞死亡,何故?

24孔板里293细胞转染,总是后面的孔里细胞死亡,何故?
我在24孔板里做293细胞的转染,转染试剂是Invitrogen的Lipofectamine2000.奇怪的是,每次加完DNA- Lipofectamine complex,24个孔当中的后面几个孔(比如最后6个孔)里的细胞就明显有一部分死亡,死亡率是10-30%,通常最严重的是最后两个孔.但是前面的孔里的细胞总是没有问题.用不同的DNA做实验,都发生同样的问题,就是总是后面的孔里细胞死亡,而前面的孔里细胞没问题.是怎么回事呢?

不可思毅1年前1

Devil313 共回答了20个问题 | 采纳率90%

博凌科为也遇到过类似的情况,如果你在加DNA-Lipofectamine complex时孔板里是没有液体的,会在风机下风干的,很快的,这样你在加到后面的孔时,部分细胞已经干了,所以你先加的很好,后面的就有问题.解决办 法就是,你不要一起吸净所有孔的液体,6个孔为一个单位,吸弃孔里的液体,在加DNA-Lipofectamine complex,就可以了.

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pcdna 3.1 转染哪种细胞

f260255ss1年前1

dxueh2005 共回答了18个问题 | 采纳率88.9%

pCDNA3.1含有复制子——SV40 ori,是来源于SV40病毒的复制子,可以转染所有的人源细胞,其实不止人源细胞,小鼠、猴子等动物的细胞都可以,没有特定的细胞株要求.
pCDNA3.1的主要功能就是在动物细胞或者动物体内表达重组蛋白.
当然,它还含有pUC ori,也可以转化大肠杆菌用于质粒的克隆与制备.

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用pcDNA3.1在哺乳动物细胞里表达蛋白,从转染开始算,多长时间可以表达出目的蛋白呢~

遥远的岛1年前1

火空火图 共回答了13个问题 | 采纳率84.6%

既然你是做瞬转的话,一般24h就已经有很多表达了,48h就基本上是表达的最大值了.我们一般就只做到48h就可以收了.

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我想做siRNA转染后细胞生长曲线的变化,那么用lipo2000转染应该是稳定转染还是瞬时转染?

地狱天使sw1年前1

ssaufei 共回答了19个问题 | 采纳率84.2%

稳转还是瞬时转染与转染试剂无关,与转进去是什么东西有关.
如果不是插入到基因组内的话,都不能算稳转.
siRNA明显是瞬时转染,一会儿就降解了.如果做shRNA,可以做稳转.

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Real-Time PCR 检测细胞转染效果时分组问题

Real-Time PCR 检测细胞转染效果时分组问题
分三组,Real-Time PCR实验设计时应包括实验组（导入siRNA）,阴性对照（Negative Control）和Mock Transfaction三组.每组至少三个重复.当中的Mock Transfaction组是什么?

香猪仔1年前1

jamp 共回答了15个问题 | 采纳率93.3%

应该是转一个非相关载体

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Lipofectin 2000是怎么样的转染试剂?为什么其转染效率高?

无边无际的天空1年前2

无芷婧 共回答了16个问题 | 采纳率81.3%

脂质体2000
转染效率高 的说法不是针对所有细胞,有些系很难转进去,有些特别敏感的转完之后差不多都死光

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siRNA转染请问,用lip2000转染化学合成的siRNA,说明书上推荐的用量,其中siRNA终浓度为33nMoil/

siRNA转染
请问,用lip2000转染化学合成的siRNA,说明书上推荐的用量,其中siRNA终浓度为33nMoil/L转染步骤为：
siRNA 1ul(20pM) + 培养基 50uL
lip2000 1uL + 培养基 50uL
那么要是siRNA终浓度为50nMol/L时,
siRNA 为1.25ul(25pM)
请问lip2000 还是用1uL?用来稀释的培养基还是用 50uL

yang00551年前2

旺财刘 共回答了15个问题 | 采纳率93.3%

厂家推荐的体积,是维持ip2000 1uL + 培养基 50uL这个比例.这个只是个参考,或者起始比列.
在实际操作当中,你可以同时试一下增高,减小这个比例.看看哪个效果最好,以后就用你试的那个比例.

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人们吃了带有蛔虫卵的蔬菜,患了蛔虫病,这种蔬菜属于【 】A.病原体 B.转染病C 传播途径D都

南qq缘1年前2

daloy 共回答了15个问题 | 采纳率93.3%

C,属于传播途径,是通过饮食传播的.

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思考题,在哺乳动物细胞转染实验中为提高转染效率需要注意哪些问题

凌下4度1年前1

pa42 共回答了10个问题 | 采纳率90%

提高转染效率要注意的细节太多太多了,选择合适的试剂并正确使用是转染成功的基础
详见：

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lipo2000转染质粒 为什么

aboom1年前1

fenyunfly 共回答了16个问题 | 采纳率100%

转染细胞不是在超净台做吗?如果操作规范是不会污染的~但用两千确实不怎么安全~毒性大还不能用含抗生素培养基~

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转染有Amp抗性基因的质粒后,DH5α感受态细胞不能在Amp阴性的LB 培养板中生长,为什么?

转染有Amp抗性基因的质粒后,DH5α感受态细胞不能在Amp阴性的LB 培养板中生长,为什么?
转染有Amp抗性基因的质粒后,DH5α感受态细胞能在Amp阳性的LB 培养板中良好生长

lyx12121年前1

xyc5241 共回答了20个问题 | 采纳率75%

能在含Amp的培养基生长而不能在不含Amp的培养基当中生长吗?这好像不太对,做的时候有做好对照?有重复做下?一步步确保实验的正确性,再寻找可能的原因

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PF用带目标基因的质粒(pEGFP-N1）转染HepG2细胞,用G418筛选稳定表达株10天,GFP表达减弱减少.

PF用带目标基因的质粒(pEGFP-N1）转染HepG2细胞,用G418筛选稳定表达株10天,GFP表达减弱减少.
目的基因和GFP构成融合蛋白,转染后24小时,空载表达GFP70%,但目的基因表达GFP很弱很少,经筛选后,连空载都表达减弱减少,

vertuqd1年前3

sherrylee87 共回答了22个问题 | 采纳率100%

只要没有整合到基因组DNA,转染进入的外源性DNA都会随着细胞分裂而被稀释.所以经过10天后表达肯定是会减弱的,这是正常现象.只有当外援DNA整合到基因组后,表达水平才能稳定

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区别三个生物学术语：转化转导转染

区别三个生物学术语：转化转导转染
好的话补充奖励分
我要是能看明白就不发了，早读过了

gddeyen1年前1

王奇牙 共回答了20个问题 | 采纳率85%

转化发生在细菌之间 转导和噬菌体有关 转染是针对真核生物的

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转化 转染 转导和转座的区别

安全北村1年前1

xylsok 共回答了16个问题 | 采纳率100%

转化（transformation）：外源遗传物质（质粒DNA）进入细菌引起细菌遗传性状改变.转染（transfection）：外源基因通过病毒或噬菌体感染细胞或个体的过程.转导（transduction）：是以温和噬菌体为载体,将供体菌的一段...

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转染时质粒怎么定量

fuyusheng1年前2

magik1 共回答了20个问题 | 采纳率90%

质粒是先用分光光度计定浓度的,然后根据你转染的方法,转染细胞的多少确定要转多少质粒,然后就可以算加入的体积了.

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真核表达分泌型蛋白,有信号肽序列的质粒转染293T细胞,western鉴定,那么转染之后上清和细胞怎样收样?

真核表达分泌型蛋白,有信号肽序列的质粒转染293T细胞,western鉴定,那么转染之后上清和细胞怎样收样?
主要是样品的收集问题,我做western阳性对照都出来了,但是待检样做不出来,细胞核上清要分开收么?怎么收集蛋白?越具体越好!

好心情2681年前1

WOSHIWXX 共回答了18个问题 | 采纳率100%

上清收了做ELISA 细胞直接裂解提蛋白做WB

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线性PEI还是分支PEI的转染效率高?

dj7se7en71年前1

21112217 共回答了15个问题 | 采纳率86.7%

PEI即聚乙烯亚胺,是一种具有较高的阳离子电荷密度的有机大分子,每相隔二个碳个原子都是质子化的氨基氮原子,使得聚合物网络在任何pH下都能充当有效的“质子海绵”体.其转染性能好于树枝状聚合物,而且它的细胞毒性低.
线型PEI与其衍生物用作基因转染载体的研究比分枝状PEI要早一些,过去的研究认为在不考虑具体条件,LPEI/DNA转染复合物的细胞毒性较低,有利于细胞定位,因此与BPEI相比应该转染效率高一些.但最近研究表明BPEI的分枝度高有利于形成小的转染复合物,从而提高转染效率,但同时细胞毒性也增大.

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怎样用流式细胞仪定量pei/sirna的转染效率

老鼠-枯鱼-蚂蚁1年前1

封泪 共回答了16个问题 | 采纳率81.3%

如果转染的载体同时带有荧光蛋白的序列,直接检测荧光蛋白阳性的细胞就可以了.或者有荧光的tag也可以.

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稳转表达的细胞系所转染的基因高表达倍数是稳定的吗

ruddy_23041年前1

ia007 共回答了14个问题 | 采纳率100%

一般稳转的基因表达倍数是稳定的.还要看你稳转用的是什么体系,如果是质粒的话,不宜传太多代数,有可能会丢失.如果是病毒的话,插入基因组中,表达是很稳定的.

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列举几种原核微生物基因重组的方法,并简述转化、转导、转染、溶源性转变的差异.

阿四1年前1

手背上的牙齿 共回答了23个问题 | 采纳率87%

主要有转化、转导、接合、原生质体融合
转化：受体菌直接吸收供体菌的DNA片段而获得后者都分遗传性状的现象.
转导：通过缺陷噬菌体的媒介,把供体细胞的小片段DNA携带到受体细胞中,通过交换与整合,使后者获得前者部分遗传性状的现象.
转染：用提纯的病毒核酸（DNA或RNA）去感染其宿主细胞或其原生质体,可增殖出一群正常病毒后代的现象,从表面上看,转染似与转化相似,但实质上两者的区别十分明显.因为作为转染的病毒核酸,绝不是作为供体菌的功能,被感染的宿主也绝不是能形成转化子得受体菌.
溶源转变：当正常的温和噬菌体感染其宿主而使其发生溶源化时,因噬菌体整合到宿主的核基因上,而使宿主获得了除免疫性外的新遗传性状的现象,是一种不携带任何外源基因的正常噬菌体；是噬菌体的基因而不是供体菌的基因提供了宿主的新性状；新性状是宿主细胞溶源化时的表型,而不是经遗传重组形成的稳定转导子；获得的性状可随噬菌体的消失而同时消失.

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