自生固氮菌培养基的配方无氮培养基(培养自生固氮菌用) 葡萄糖 (或甘露醇)10克 NaCl0.2克KH2PO40.2克C

解题思路：（1）培养基的营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐．分为液体培养基和固体培养基．
（2）常用灭菌方法：灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌法．
（3）培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌和消毒方法依次：高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌、化学消毒、紫外线灭菌、巴氏消毒法．
（4）接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法．
（5）选择培养基的原理是：不同微生物在代谢过程中所需要的营养物质和环境不同．有的适于酸性环境，有的适于碱性环境；例如从土壤中分离放线菌时，可在培养基中加入10%的酚数滴，抑制细菌和真菌的生长；如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素；培养金黄色葡萄球菌，可在培养基中加入高浓度的食盐．

（1）培养基的成分包括水、无机盐、碳源、氮源及生长因子，由表可知，该培养基中无氮源，故在这种培养基上，其他类型的微生物不能生长，而自生固氮菌能利用空气中的氮气作为氮源进行生长．
（2）从功能上看，此培养基属于选择培养基，从形态上看，由于含有凝固剂琼脂，此培养基属于固体培养基，有利于菌种的分离纯化．
（3）因为琼脂中常含有氮，因此使用前需要用自来水流水冲洗几天，再用蒸馏水浸泡，洗涤几次，以除去其中的氮．
（4）接种方法为平板划线法和稀释涂布平板法，接种环需在酒精灯火焰上灭菌冷却后，才能蘸取少许稀释液用点接法接种在培养基表面，也可采用平板划线法接种，接种后必须将培养皿倒置培养，以免冷凝水滴落，防止杂菌污染．
（5）培养时间过长可能导致菌落会分泌含氮化合物，引起杂菌生长．
（6）根据题意突变株A在普通培养基中不生长，加营养物质甲可以生长，说明突变株A不能合成突变株A必需的营养物质甲，同理突变株B不能合成突变株B必需的营养物质乙，生物体内的生化反应都需要酶的参与，不能反应就说明缺少相应的酶；而将A+B就可以生长，说明A可以提供B所必需的营养物质乙，B可以提供A所必需的营养物质甲．
故答案为：
（1）缺乏氮源在这种培养基上，其他类型的微生物不能生长，而自生固氮菌能利用空气中的氮气作为氮源进行生长
（2）选择分离纯化
（3）蒸馏水
（4）酒精灯火焰划线倒置
（5）菌落会分泌含氮化合物，引起杂菌生长
（6）①自身不能合成物质甲②突变株A能合成物质乙，突变株B能合成物质甲，因此一起培养可以相互支持保证必需的营养要素

点评：
本题考点： 微生物的分离和培养．

考点点评： 本题的知识点是微生物的分离和培养，主要考查学生运用微生物的培养技术解决生活中问题的能力和对微生物，是实验室培养技术的综合应用能力．

自生固氮菌可以自己固氮,所以可以生存下来,并且不能给没有固氮能力的微生物提供氮,故没有固氮能力的微生物死亡,这样可以分离两种细菌@!

是自养需氧型

(1)酒精灯火焰旁
(2)1～2
(3)3 1
(4)24 菌落数目稳定 因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目
(5)30～300 5×10 ⁷
(6)多于 无氮培养基上可以生存和繁殖的只是土壤中的固氮菌,而牛肉膏蛋白胨培养基上几乎允许土壤中所有菌类的生存

解题思路：阅读题干可知，本题是考查微生物的分离和培养的题目，根据选项涉及的具体内容梳理相关知识点分析判断．

解①对取样的土壤样品要在超净台上进行稀释，①正确；
②分离自生固氮菌的培养基中不能加入氮源，这样可起到选择培养的作用；②错误；
③对培养基要进行高压蒸汽灭菌，③错误；
④本实验的接种方法可以采用点接法或平板划线法，④正确；
⑤接种以后对菌种的培养时间不能太长，原因是菌落会分泌含氮化合物，引起杂菌生长，起不到选择的作用，⑤正确；
故答案为：C

点评：
本题考点： 用土壤浸出液进行细菌培养．

考点点评： 本题的知识点是微生物的分离和培养的实验操作步骤及注意事项，主要考查学生对微生物培养技术的掌握和运用，试题难度一般．

C

C

解题思路：1．分离菌株的思路
（1）自然界中目的菌株的筛选
①依据：根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找．
②实例：PCR技术过程中用到的耐高温的Taq DNA聚合酶，就是从热泉中筛选出来的Taq细菌中提取出来的．
（2）实验室中目的菌株的筛选
①原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度．pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长．
培养基选择分解尿素的微生物的原理：培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源．缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物
②方法：能合成脲酶的细菌才能分解尿素．配制以尿素为唯一氮源的培养基，能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌
2．统计菌落数目的方法
（1）稀释涂布平板法（间接）
①当样品的稀释庋足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌．
②通过统计平板上的菌落数来推测样品中大约含有的活菌数．
（2）利用显微镜直接计数
3．分解尿素的细菌的鉴定细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强．在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素．
4．实验流程
土壤取样→样品的稀释→将稀释液涂布到以尿素为唯一氮源的培养基上→挑选能生长的菌落→鉴定

（1）倒平板应在酒精灯火焰旁进行，防止杂菌污染．
（3）按照由10¹～10⁸倍稀释度的顺序分别吸取0.1mL进行平板涂布，每个稀释度下，无氮培养基应至少涂布3个平板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布1个平板做对照．
（5）当菌落数目稳定时，选取茵落数在30-300的平板进行计数．如果测试的平均值为50，则每克样品中的菌落数是（稀释度是10⁵倍）5×10⁷，牛肉膏蛋白胨平板上的菌落数多于无氮培养基上的数目，原因是无氮培养基上能生存繁殖的仅是土壤中的固氮菌，而牛肉膏蛋白胨培养基上几乎允许土壤中所有菌类生存．
故答案为：（1）火焰旁
（3）31
（5）30～300 5×10⁷ 多于 无氮培养基上能生存繁殖的仅是土壤中的固氮菌，而牛肉膏蛋白胨培养基上几乎允许土壤中所有菌类生存

点评：
本题考点： 微生物的分离和培养．

考点点评： 微生物的实验室分离是高考的热点，考生需注意掌握教材上的基础知识，把握知识间的内在联系．

(1)酒精灯火焰旁
(2)1～2
(3)3 1
(4)24 菌落数目稳定 因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目
(5)30～300 5×10 ⁷
(6)多于 无氮培养基上可以生存和繁殖的只是土壤中的固氮菌，而牛肉膏蛋白胨培养基上几乎允许土壤中所有菌类的生存

解题思路：由单个细菌在适宜固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度，形成肉眼可见的子细胞群落叫菌落．

A、菌丝为大多数真菌的结构单位，A错误；
B、芽孢是某些特殊种群的细菌（主要是芽孢杆菌）产生的特殊休眠体，B错误；
C、子实体是高等真菌的产孢构造，C错误；
D、菌落是由单个细菌在适宜固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度，形成肉眼可见的子细胞群落，D正确．
故选：D．

点评：
本题考点： 微生物的分离和培养；培养基对微生物的选择作用．

考点点评： 考查几个的微生物的结构，常见的结构名称及含义需了解．

这个题目不正确，如果说“稀释度是10^5”，那么这里的稀释度应该指的是总的最终稀释倍数，那么结果自然应该是50x10^5，即5x10^6。
而根据答案，显然答案没有把“取土样10g加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中”这一步骤算进稀释度中，而是把经过这一步获得的上清液当成原液来计算，因为经过这一步，相当于土样被稀释了10倍。
所以，这应该是题目表述的问题。...

正确答案是C
C．培养自生固氮菌不需要氮源 因为固氮菌能固定空气中的氮素,它可以为其他生物提供氮源
A的错误在于,对于生产用固体培养基是不需要加入琼脂的,比如平菇的生产培养基培养基配方为42%玉米芯+20%棉籽壳+20%木屑+10%麦麸+5%稻糠+3%豆饼粉,另加适量石灰和石膏

这里的氮源是指培养基中的氮源.
在缺乏氮源的选择培养基上,只有自生固氮菌可以生长,这样就可以将自生固氮菌与其他微生物分离开,所以答案就是A.

在土壤中固氮后分泌生长素再供给植物生长,因为生长素的化学成分是吲哚乙酸,分子式C10H9O2N,它的合成需要氮元素