WESTERN BLOT煮蛋白用得是几乘的loading buffer ,样品100ul,5 乘的加多少?

western blot 实验中组织提取蛋白最小量多少

孤傲上九天1年前1

惨淡人生9开头 共回答了20个问题 | 采纳率75%

1. western blot每孔上样总量15-50ug大部分蛋白能做出来,跟蛋白质表达量、分子量、抗体效价都密切相关.
2. 组织一般取200mg,匀浆后蛋白常能得到几百ug,跑十块胶足够.

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western blot实验 蛋白分子为161KD转膜时的电流及时间该怎么设置?

司马小青1年前4

huangcheng6250 共回答了20个问题 | 采纳率95%

这简单,恒流,电压最大,电流250V,时间90min,我跑的是130kDa

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western blot图中,IP IB Flag

western blot图中,IP IB Flag
左边那些VEGFR-3-Flag,p85α-HA IB:Flag IB:HA



我稍微有点明白了，但还是有几点不明白：
（1）“从最右边看，表示细胞再转染了这三种质粒后，能够在细胞中表达”怎么看出来表达了?为什么要做lysate的westernblot图呢？
（2）你说的看最右边、中间、左边的图是指最右边、中间、左边上下两个图对着比较吗？（3）你说的“研究片段”指的是SH2?
(4 ) 还有拉不拉不出来怎么看？互相之间能被拉就是说有相互作用？比如说最左边的图是不是应该看左下图左右之间的条带粗细对比，中间的图是看中上图左右之间的条带粗细对比
（5）‘相互作用的位点不在其SH2上“ 这个结论不懂，既然是缺失SH2的P85不能被VEGFR拉出，但正常的P85能被VEGFR拉出,不正说明了作用位点在SH2上吗？
还望大神不吝赐教！菜鸟跪谢啦

domodomoko1年前1

燕石竹 共回答了22个问题 | 采纳率90.9%

IB是免疫印记、IP是免疫共沉淀、Flag和HA都是一种蛋白标签
从最右边看,表示细胞再转染了这三种质粒后,能够在细胞中表达,最左边的图是用带有Flag标签的VEGFR拉p85及其研究片段,从图中可以看出,p85被拉出,而其研究片段没有被拉出,中间的图是反过来用p85及其研究片段拉VEGFR,同样可以看出p85可以把VEGFR拉出,而其研究片段没有被拉出,结论是VEGFR与P85存在相互作用,但是相互作用的位点不在其SH2上

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蛋白western blot实验需要注意的有些什么

uni787151年前1

tmins 共回答了15个问题 | 采纳率100%

蛋白浓度要合适 配胶浓度要合适 电流电压大小以及时间都要根据目的蛋白的大小进行适当调整等等 其实没啥特别的 做几次就行了

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western blot marker的作用?

danilla0071年前4

wenyu1218 共回答了24个问题 | 采纳率83.3%

电泳后会显示一个条带,这个散开的条带可以：
1 在SDS-PAGE中监测蛋白的迁移；
2 确认转膜效率；
3 根据marker的条带估计分子量；
4 确定目的蛋白位置.

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Southern、Northern、Western blot的异同

dongdalei_aaa1年前1

happysea024 共回答了22个问题 | 采纳率90.9%

相同的是 他们都是分子杂交
不同的是
dna的杂交技术——southern印迹杂交
rna的杂交技术——northern印迹杂交
蛋白质的杂交技术——western印迹杂交

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如何用Image J 分析Western blot 中文

风在冷冷的吹1年前1

ququling 共回答了21个问题 | 采纳率85.7%

把条带圈出来然后点测量 就是measure 出来的那个mean的数值就是灰度 应该说是白度值 条带越深数值越小

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有人做过500kd的蛋白western blot的实验吗?可以分享实验条件吗?

css211年前1

乔家大院在中堂 共回答了19个问题 | 采纳率89.5%

配分离胶百分之六（取胶时容易破哦!）,浓缩胶百分之四,跑胶蓝色的跑出去后再多跑约半小时,将条带拉开.转膜可以300mA稳流四度转2小时,适用湿转.560kd,建议40ma,过夜（12-18小时）,对于大分子蛋白转膜液中最好加入SDS

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在western blot中loading buffer的主要成分是什么?为什么有颜色呢?

在western blot中loading buffer的主要成分是什么?为什么有颜色呢?
最好能描述一下它是怎么包裹蛋白的

更爱暴雨狂风1年前1

ziigna 共回答了21个问题 | 采纳率95.2%

loading buffer的主要成分是SDS,甘油,溴酚蓝,TRIS,其中甘油的作用是使样品沉到点样孔中而不漂浮起来,SDS是结合蛋白质,使所有蛋白质所带电荷性质一样,但不同分子量的蛋白结合的SDS数量是不一样的.溴酚蓝是指示剂,可以用来观察大概的电泳过程,因为它在不同浓度的胶中泳动的速率不一样,从而也可以看做是一个蛋白样品,这样就可以直观的大概了解蛋白泳动到了哪个位置,但是只能看一个大概

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做western blot要发SCI

做western blot要发SCI
我知道发SCI对实验出品厂家有要求,一般抗体会选择进口的,是否仪器（离心机、恒温水浴锅、脱色摇床、移液枪等）、试剂之类都需买进口的?我打听试剂一般实验室都是自己买好成分后现配的

地狱使者11年前1

辣酷小皮妹 共回答了20个问题 | 采纳率95%

能不能发SCI和你的仪器试剂厂家没有要求,但是对你做出的blot的质量有要求.能用一般的仪器试剂做出prefect的图来,那说明你的本领高.

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western blot：SDS和page分别指什么?

HFTALK1年前1

河小春 共回答了19个问题 | 采纳率89.5%

SDS:十二烷基硫酸钠 一种表面活性剂
PAGE:聚丙烯酰胺凝胶电泳 用于分离蛋白质和寡糖核苷酸

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western blot加一抗前忘了封闭会有什么后果?

wlmqyhy1年前5

xaftnb 共回答了18个问题 | 采纳率88.9%

对你的目的条带影响不大 不过可能有会杂带 而且背景会不干净 不可能完全没影响 不然何必多这么个一小时的步骤

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谁知道ELISA,Western Blot,免疫组化 这三个比较有什么区别,越详细越好!谢谢了,我给加分

草蔻蓝1年前2

夜台 共回答了30个问题 | 采纳率86.7%

免疫组化
是融合了免疫学原理（抗原抗体特异性结合）和组织学技术（组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等）,通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素)显色,来对组织（细胞）内抗原进行定位、定性及定量的研究(主要是定位).样本是细胞或组织,要在显微镜下观察结果,可能出现膜阳性、质阳性和核阳性.
elisa（酶联免疫吸附试验）
用到了免疫学原理和化学反应显色,待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液,因而没有用到组织包埋、切片等技术,这是与免疫组化的主要区别,操作上 开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面,从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附在载体上,这就是“吸附”的含义.
免疫组化和elisa所用到的原理 大致相同,只是因为所检测的样品不同,从而在操作方法上有所不同.Elisa多用于定量分析,其灵敏度非常高.
western bolt
先要进行SDS-PAGE,然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上,而后利用抗原-抗体-标记物显色来检测样品,可以用于定性和半定量.
免疫学三大工具,免疫组化、Western、ELISA,分别用于定位,定性和定量.
以下western和Elisa的区别不是原创,是找的资料.
western blotting 可以看到特异性的条带,但是定量比较烦
elisa可以直接读出浓度,但是如果抗体有非特异性结合,那得到的数值就不可信.
WB只能半定量,但是可以检测细胞膜蛋白,这点ELISA做不到
ELISA可用定量方法检测蛋白,也就是说可以观察不同浓度刺激物对目的蛋白的影响
WB所检测的一般是抗原,而Elisa抗原抗体都可以检测.
WB所检测的抗原可以知道其分子量的大小,或是否是多聚体、降解产物等,一句话,WB可以确定所用抗体是与那种蛋白起作用的；而Elisa无能为力,一锅端了.
WB所适用的一抗一般是线性位点的,ELISA线性或构象型抗体都可以使用.从另一个意义上讲,WB可以做抗体是线性位点还是构象型位点的补充判定,而Elisa不行.
WB一次处理量就是一块胶版,10-20个样品最多了.Elisa一块96孔板一次可以处理96个样本,可以设置多个复孔、对照、梯度样等来提高检测的可信度.
WB操作常见的非特异性条带,膜本底差,显色不好等等缺点在Elisa上表现得要好得多.
我也是最近才开始了解这几种实验技术,答案仅供参考哟~

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western blot是干什么的

chocolily1年前2

jobwangxuexiao 共回答了14个问题 | 采纳率92.9%

Western Blot中文一般称为蛋白质印迹.它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法.其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色.通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息.
Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗.经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变.以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分.
Western Blot显色的方法主要有以下几种：
　　i.放射自显影
　　ii.底物化学发光ECL
　　iii.底物荧光ECF
　　iv.底物DAB呈色
值得一提的是,western blot 这个名称的由来很有意思.最开始做印迹工作的是一个叫做Southern的科学家,但印迹的对象是DNA链,他把这种技术称为Southern blot,后来类似的出现了两个过程相似,但是对象不同的印迹方法,一个针对RNA,一个对蛋白质,人们分别把这两种技术的称为Northern和Western,与这两个技术的发明人没有关系了.

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Western blot 需要的滤纸是什么规格的,还有硝酸纤维素膜是什么规格?急用,

Western blot 需要的滤纸是什么规格的,还有硝酸纤维素膜是什么规格?急用,
我想要做Western blot ,但是不知道滤纸和硝酸纤维素膜需要什么规格,还有就是订购时最少可以定多少?急用!

卓尔-jane1年前2

半青的西红柿 共回答了14个问题 | 采纳率85.7%

滤纸即使是一般的定性滤纸也可以,多用几张就可以了；也可以买专用的
NC膜和滤纸的大小根据海绵的大小确定,购买时一般购买整张膜和滤纸,回来自己裁剪
我们实验室用的是millipore公司0.45的膜,根据分离的蛋白大小,有的要用0.22的PVDF膜
订购的量可以联系公司询问

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western blot 出现非特异性条带,主要原因有哪些?

xwt3291年前1

毕业啦放假啦 共回答了19个问题 | 采纳率94.7%

抗体特异性不好,或者已经变质（包括一抗和二抗）
封闭不好
目标分子有降解,磷酸化等修饰,
洗膜不彻底,
曝光时间太长
加样过多等等

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western blot实验怎么上样

western blot实验怎么上样
western blot实验怎么进行上样呢?就是每个孔该加些什么,因为从来没接触过这个实验,所以很迷茫呀!

nsytg1年前1

hyjhyy 共回答了22个问题 | 采纳率81.8%

首先要设计上样的顺序,一般是让与抗体有反应的样品和没有反应的样品间隔开,这样条带之间反差比较明显.比如你的检测样能够与抗体反应,上样就是maker—阳性对照—阴性对照—检测样(N个),如果检测样比较多,可以在检测样后再加上一个阴性对照和阳性对照.
上样量一般5-20微升(样品与上样buffer混合后),可以先做个普通的染色,看看条带有没有溢出,如果溢出了就上少点,太浅就上多点.
都调整好了再继续做转印.

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WESTERN BLOT实验中转膜时滤纸和膜的大小有什么要求?是滤纸比膜小对吧?为什么?

WESTERN BLOT实验中转膜时滤纸和膜的大小有什么要求?是滤纸比膜小对吧?为什么?
还有封闭时除了用脱脂奶粉还有用其他的什么方法吗?
如何检测转膜是否彻底?
最后显色的方法都有哪些?根据什么来选择?

xyuanjian1年前1

一生等候1981 共回答了16个问题 | 采纳率87.5%

你的问题好多啊
1 滤纸是上下都有的 之所以小一点儿 是怕上下的滤纸边缘直接短路,相连导致电子不能从胶穿过,这样不能达到很好的转移效率
2 可以用BSA,具体多大浓度,可以参照脱脂奶粉的
3 这个检测没多大用处吧 如果非要探讨这个问题 可以拿转完的胶再去染色（考马斯亮蓝或银染）
4 显色系统 基本就是HRP催化的DAB TMB等,AP催化的（NBTBCIP,我用的是roche的）,也可以用HRP,AP催化化学发光,比如GE（原来的阿马西亚）的ECL（这个系统我没用过）,赛默（原来的pierce）的化学荧光（我用过这个做southern）

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请问western blot 跑胶时积层胶和分离胶需要的电压是多大啊,还有转膜的,电压?

请问western blot 跑胶时积层胶和分离胶需要的电压是多大啊,还有转膜的,电压?
我跑的蛋白有14kd到130kd的都有

柠檬香皂1年前2

ford850 共回答了17个问题 | 采纳率94.1%

一般浓缩胶为80V,这样可以达到较好的浓缩效果,当条带达到分离胶时,可以调到220V,这样时间快点,做Wb时蛋白降解较少.转膜时一般为100V,转膜时间要根据蛋白大小确定,130kD蛋白分子较大,最好时间长点,不过太长也不好,蛋白转透过膜的,大约要1个半小时吧.

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在western blot中loading buffer的作用是什么?

在western blot中loading buffer的作用是什么?
就是跑SDS-PAGE时在蛋白样中加入loading buffer的作用是什么?

huangzihao19881年前2

小_蚂_蚁 共回答了24个问题 | 采纳率83.3%

1、指示剂,方便观察电泳进行的程度；2、密度大,携带你的样本沉到孔的底部；3、保持蛋白线性及携带过量负电荷的状态.
除此之外,里面最重要的是还有巯基乙醇还原剂来让蛋白质充分变性,同时保护-SH基团.

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western blot 一抗浓度高和低出现什么结果

崖︶ε︶宝1年前1

大饼则卷 共回答了24个问题 | 采纳率91.7%

如果抗体亲和力低,适当提高一抗浓度,有助于结合.但是如果一抗是多抗,浓度过高,会导致非特异性结合,出现杂带.或者显色时候背景重.一抗浓度低的话,结合不好.

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western blot 一抗用什么溶剂溶解

蔬菜vs娃娃1年前2

windy850818 共回答了20个问题 | 采纳率95%

查书啊兄弟,做实验要多看书,做好准备.

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western blot 显影使用ECL法,可以使用一般的凝胶成像仪吗,就是做核酸电泳用的那种仪器

western blot 显影使用ECL法,可以使用一般的凝胶成像仪吗,就是做核酸电泳用的那种仪器
tanon G2500可以做western blot显影吗?只有白光和紫外光的.

晗炳1年前1

人事厅 共回答了13个问题 | 采纳率100%

这个和有什么光关系不大,是否能够拍摄到ECL的图像主要取决于设备是不是带有冷CCD.只有制冷的CCD才够灵敏度捕捉到膜上发出的光.
普通用于拍摄核酸和蛋白胶的相机就是普通CCD,天能2500就是普通的凝胶成像,ECL那么弱的光,一点都拍不到的.
要么找更高端的机器,要么就只能用胶片曝光了,否则无法观察ECL的条带.
你试试找找伯乐,Alpha什么的有高端成像仪的实验室,或者就找有暗室的实验室.

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western blot 最后发光的原理是什么啊?

western blot 最后发光的原理是什么啊?
western blot 最后一步 曝光原理是什么啊?辣根离子催化什么什么发光的啊?

冷凌弃1年前1

helfu 共回答了23个问题 | 采纳率73.9%

不是“辣根离子”的反应.而是辣根过氧化物酶在催化过氧化氢的情况下,底物被氧化而产生的发光或显色反应.化学发光底物现在有很多试剂盒来做,成分有所不同,比如作为底物的有Luminol、Pyridopyridazines等.

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western blot等生物学试验中的内参是什么意思?

lx37003221年前1

qingnin12 共回答了25个问题 | 采纳率100%

western blot用来检测蛋白表达的变化,而检测表达变化的前提就是,你每个孔跑得总蛋白量是相同的,如果上样量都不同,还怎么检测不同组间目的蛋白量的区别,这样内参就可以作为检测蛋白上样量是否相同的标准.内参一般选那些表达水平比较固定的一些蛋白,比如说actin,这些蛋白的表达水平不会因为你的实验条件而改变,也就是说它始终就是表达那么多,如果这些蛋白的表达量一样,那么我们就认为总的蛋白是相同的.

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Southern blot,Northern blot,Western blot三种分子生物学技术差异

5000元1年前1

谁在早我一步 共回答了20个问题 | 采纳率85%

Southern blot 是分析DNA的杂交技术,Northern blot是分析RNA的,而Western blot是分析蛋白质的Southern 和Northerin原理基本相同,都是利用DNA或RNA的复性过程,但过程上也有区别,主要是Southern是先电泳后变性,而North...

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请问哪里能够代做Western blot实验和realtime PCR实验

水上人家_hh1年前2

别_急 共回答了13个问题 | 采纳率100%

这种简单的实验应该不会有公司给代做的,找个别的实验室的同学什么的帮你做吧

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蛋白质印迹目的蛋白质量测定最近在做western blot 的实验,做完之后用BCA法测定了蛋白质的浓度,但是怎么能够知

蛋白质印迹目的蛋白质量测定
最近在做western blot 的实验,做完之后用BCA法测定了蛋白质的浓度,但是怎么能够知道目的蛋白的质量啊?用什么方法进行测定?

h969881年前1

其实偶不想 共回答了17个问题 | 采纳率88.2%

BCA检测的是所有蛋白的量.
你想要测定目的蛋白的量,最好用ELISA检测,这样更容易些
非要用Western Blot来定量,需要一种软件的.
然后Marker来检测的是分子量,不是浓度.

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western blot蛋白样品用什么稀释至一样的浓度,还有就是蛋白maker如何稀释至一样的体积?

你的收发室1年前1

liu2021202 共回答了21个问题 | 采纳率81%

用1X loading buffer稀释即可.

1年前查看全部

请教做瘤体的凋亡用RT-PCR好还是western blot好

沙漠仙球儿1年前1

风流情圣 共回答了18个问题 | 采纳率88.9%

WB测蛋白可以OD值定量,不过WB需要摸条件,成就在无数次的失败上,另外WB需要mark和B-action 价钱比较贵

1年前查看全部

我要做western blot实验了,完全一头雾水

我要做western blot实验了,完全一头雾水
说实话,我们实验室氛围不是很好.谁都是各忙各的,都懒得管别人的事情.我准备要做western blot实验了,要配那么多液体,要买那么都东西.说实话,我想试剂商订货我都不知道该订些什么.问别人总是对你冷冷淡淡.请问做这个实验哪些东西是要自己买的,哪些东西一般实验室能够提供.就连那些什么tris-HCl、tween之类的我现在都不知道是什么东西.我要买什么东西,问试剂商可以吗,或者通过什么途径能够知道哦,

怀念马家滩1年前2

kellylao 共回答了20个问题 | 采纳率95%

是啊.
对此深有同感!
不过幸运的是我一进实验室就遇到几个很好的师姐!
建议：
多看文献.
也可以去类似丁香园、生物谷的实验论坛.
上面好东西很多.
下载个关于western的protocol就什么问题都解决咯~

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western blot时每个孔道到一般加多少样品蛋白溶液和Mark,样品蛋白浓度是多少?

lydia-azalea1年前3

娟娟需要爱 共回答了17个问题 | 采纳率94.1%

根据你的样品,要检测的蛋白等来决定
一般蛋白浓度在20ug - 80ug 不等
marker的话2-5ul足够了.

1年前查看全部

western blot实验中加样的具体步骤?

western blot实验中加样的具体步骤?
请有心人士告诉我各个孔应该加入什么,当时听课的时候博士讲的是英语,没有跟的上呀!

茶花泥泥1年前1

beautypretty 共回答了18个问题 | 采纳率88.9%

阳性对照、阴性对照、你的样品.如果同时做两块胶,其中一块用来做染色的话,最好加上marker.
除了marker,其他的样都要加等量的上样缓冲液.

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western blot里面的marker是什么物质?

bbxqqq1年前1

风雨回旋 共回答了11个问题 | 采纳率90.9%

Marker一般都是确定分子量的作用,做个对照比较,看你跑出来的是不是你要的条带

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western blot270KDa的蛋白,实验条件是什么?

western blot270KDa的蛋白,实验条件是什么?
western blot270KDa的蛋白,分离胶要百分之多少的?转膜要多长时间?电流多少?

MC19754121年前1

oo钻石 共回答了15个问题 | 采纳率86.7%

分离胶多少关系不大,不过既然这个蛋白分子量这么大,我建议跑8%的,跑的快一点,转膜时间要长一点,我用的marker有个250kd的,350毫安转两个小时可以过去,你可以试试3到4个小时

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western blot中的RT是什么意思?

我是桦林1年前2

h2so4hcl 共回答了18个问题 | 采纳率77.8%

Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测.它需要利用放射性同位素指示剂进行示踪,所以RT就是Radioisotope Tracer放射性示踪物.

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western blot 一次可以检测几种蛋白

zhu818jian1年前3

11点31分 共回答了16个问题 | 采纳率93.8%

看你要干嘛啦 如果是考染银染的话可以看到所有的条带 不过没有特异性 如果是标抗体的话 同一个位置只能标一种 也就是说如果你两种蛋白大小差别比较大 可以把膜剪开 这样就能标两种了 但其实标完显色之后也可以用stripping buffer洗掉 重新标别的抗体 虽然可能效果不好

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western blot 和western blot ing是一种技术吗,两者有什么区别啊?

zhiming1231年前2

sup3rsky 共回答了15个问题 | 采纳率86.7%

其实是一回事.western blot 的动名词形式是 western blot ing 呵呵!

1年前查看全部

western blot用的脱脂奶粉的脂肪含量?

western blot用的脱脂奶粉的脂肪含量?
请问做封闭液的脱脂奶粉有什么要求?我买了伊利的奶粉,上面标记着脂肪含量以降低,脂肪含量9-12.这样的奶粉可以用来做封闭液吗?去超市看这已经是最低脂肪含量的了,是不是有100%脱脂的奶粉?谢谢~

不想你了1年前1

yongting_m7 共回答了15个问题 | 采纳率93.3%

封闭液（含5％脱脂奶粉的TBST缓冲液）
脱脂奶粉（国产,安怡牌） 5g
TBST 100ml
溶解后4℃保存.使用时,恢复室温,用量以盖过膜面即可,一次性使用.

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免疫组化和Western Blot可以用同一种抗体吗?

flamenightgy1年前1

不拆不副 共回答了15个问题 | 采纳率86.7%

免疫组化时抗体识别的是未经变性处理的抗原决定簇（又称表位）,有些表位是线性的,而有的属于构象型；线性表位不受蛋白变性的影响,天然蛋白和煮后的蛋白 都含有；构象型表位由于受蛋白空间结构限制,煮后变性会消失.如果你所用的抗体识别的是蛋白上连续的几个氨基酸,也就是线性表位,那么这种抗体可同时用于 免疫组化和Western,而如果抗体识别构象形表位,则只能用于免疫组化.一般抗体说明书上都有注明此种抗体识别的氨基酸区间.（限于单抗）

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western blot实验 非特异性条带啥意思

_lee1年前1

4411190 共回答了17个问题 | 采纳率94.1%

就是抗体的特异性不强,可能是多抗,导致最后压片显影的时候会出现除目的以外的其他条带.

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做western blot用的tris缓冲液ph一般要求在7左右,我配的10X的tris,请问稀释成1X后,ph值会变么

做western blot用的tris缓冲液ph一般要求在7左右,我配的10X的tris,请问稀释成1X后,ph值会变么?

zhuwei84871年前1

zhoufeng0823 共回答了16个问题 | 采纳率87.5%

tris盐酸是缓冲溶液,稀释几乎不会改变PH

1年前查看全部

请问western blot点样

请问western blot点样
第一次做垂直式蛋白质电泳,在点样孔里点样,枪放在两玻璃板之间,向点样孔点样时为什么有时蛋白样流到旁边的点样孔,有时还漏到玻璃板后面?哪里出错了?
写错了，是枪头放在两玻璃板之间。

甘油一号1年前4

nature5421 共回答了19个问题 | 采纳率94.7%

一般应该不会出现这种情况啊,我也是才开始做,从没有遇到这种情况.
我个人感觉可能有以下几点您需要检查一下：
1.制胶有没有问题?浓缩胶制的时候要求加了TEMED之后要尽快加入制胶板中,而且下层分离胶之上应该有其他溶液,必须双蒸水洗净、吸水纸吸干后再加浓缩胶,还有就是不能有气泡；
2.加样有没有问题?我们用的是专门的加样针,不是用的枪,不过应该也差不太多吧,可能针比枪更容易避免气泡和加样速度太快造成的样品溢出,还有一点就是针头/枪头一定要在直视下看着伸到加样孔底部才能缓慢加样,加样过程中针头/枪头最好不要随着样品液面的升高而升高,要保持在底部（不能戳到胶哈）,这样可以让样品更浓集一点；
3.玻板有没有问题?但玻板有问题一般不会出现这种情况,一般会出现漏胶严重或裂胶,裂胶的具体原因我也不清楚；
综上,建议你
试一试让别人制胶,你再来加样,或者你制胶,别人加样,看行不行?这样找一找大致的原因后,再细查具体原因.

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western blot,二抗用水稀释,会有什么问题

只愿此生爱一人1年前2

smothty 共回答了17个问题 | 采纳率100%

抗体会很快失效

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Far-Western印迹法是不是就是Western Blot

136831085241年前2

蓝城之心1 共回答了26个问题 | 采纳率92.3%

基本步骤都是类似的,只不过你做WB的时候是用一抗去标记膜上的蛋白,再用二抗去标记一抗,而坐FW的时候是用带标记的另一个蛋白代替一抗去标记膜上的蛋白,如果这两个蛋白之间可以相互作用,那就可以标记上,然后用二抗或者其他标记物去结合第一个蛋白上的标记物增强特异性 最后显出来,也就是说FW是用来研究两个蛋白之间是否有相互作用的

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western blot转膜过程中需要注意些什么

tsh1211年前1

小龙王子 共回答了20个问题 | 采纳率100%

最重要的就是SDS-PAGE胶和膜之间不要有气泡.
其次就是转膜的电压和时间要和蛋白大小对应上.

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western blot蛋白 有的有条带 有的没有

szjlxl1年前1

eoro 共回答了18个问题 | 采纳率83.3%

权志龙同学：
你的描述太笼统了,Western blot检测有条带很正常,检测没有条带也很正常.
同一组一模一样的样品在一次检测中有条带,另一次没条带也是可以解释的.所以你要描述清楚具体的状况.

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western blot 中Nephrin蛋白与一抗结合时的浓度比

western blot 中Nephrin蛋白与一抗结合时的浓度比
测糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin的表达,nephrin与一抗二抗结合的浓度比,我是个外行,基本知识不弄懂不敢动手

东北小伙在苏州1年前1

xwoodj 共回答了20个问题 | 采纳率85%

一抗一般稀释1000倍,二抗一般稀释2000-4000倍.
你自己可以试试,按照上面说的做,结果太亮就再多稀释些,太暗就少稀释些.

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western blot中蛋白电泳缓冲液能不能用盐酸调

waetrwrf1年前2

_sue 共回答了24个问题 | 采纳率95.8%

SDS-PGE的电泳缓冲液?还是转膜的缓冲液?用盐酸调PH?
不存在盐酸调PH的问题吧
western blot中,蛋白为了暴露特异位点,都是充分变形的,PH对蛋白影响不大啊

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