凝胶过滤层析可根据蛋白质的大小将之分离...

首先琼脂糖凝胶可以排除,这是大孔凝胶,用于分子量较大的成分.
我做分子筛用的比较多的柱子都是葡聚糖凝胶凝胶,我的蛋白比你的大,用G50和G100的填料,做的结果都没什么问题.
你的蛋白7kD,如果没有什么特别的性质（高级结构是球形还是其他的,有无多聚）,G50应该可以.如果你不放心,也可以考虑聚丙烯酰胺凝胶,它和葡聚糖凝胶相比更适合于分子量稍小的蛋白,可能更实用于你的实验.
聚苯乙烯凝胶没用过,不发表意见.

凝胶过滤层析是根据分子大小不同从而实现分离,所以它的分子筛效应是大分子进不去先出去,小分子后出去.而凝胶电泳是根据带电分子在电场中受力不同以致移动速度不同从而实现分离,所以它的分子大小适中都可以进进入层析柱中的空隙.

凝胶过滤层析也称分子筛层析、排阻层析.是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用,根据被分离物质的分子大小不同来进行分离.层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质,多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质,小分子物质能进入其内部,流下时路程较长,而大分子物质却被排除在外部,下来的路程短,当一混合溶液通过凝胶过滤层析柱时,溶液中的物质就按不同分子量筛分开了.
而在聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）中,蛋白质的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素.进入分离胶后,由于聚丙烯酰胺的分子筛作用,小分子的蛋白质可以容易的通过凝胶孔径,阻力小,迁移速度快；大分子蛋白质则受到较大的阻力而被滞后,这样蛋白质在电泳过程中就会根据其各自分子量的大小而被分离.整块胶板相当于一个分子筛.

凝胶过滤层析中每一个凝胶珠相当于一个分子筛,故小分子所经过的路径长,落在大分子后面；而凝胶电泳中整块胶板相当于一个分子筛,故大分子受到的阻力大而迁移慢,落在小分子后面.

凝胶层析操作中应注意的一些具体问题.
(1)层析柱的选择
层析柱大小主要是根据样品量的多少以及对分辨率的要求来进行选择.一般来讲,主要是层析柱的长度对分辨率影响较大,长的层析柱分辨率要比短的高；但层析柱长度不能过长,否则会引起柱子不均一、流速过慢等实验上的一些困难.一般柱长度不超过100cm,为得到高分辨率,可以将柱子串联使用.层析柱的直径和长度比一般在1:25－1:100之间.用于分组分离的凝胶柱,如脱盐柱由于对分辨率要求较低,所以一般比较短.
(2)凝胶柱的鉴定
凝胶柱的填装情况将直接影响分离效果,关于填装的方法前面已有介绍,这里主要介绍对填装好的凝胶柱的鉴定.凝胶柱填装后用肉眼观察应均匀、无纹路、无气泡.另外通常可以采用一种有色的物质,如蓝色葡聚糖-2000、血红蛋白等上柱,观察有色区带在柱中的洗脱行为以检测凝胶柱的均匀程度.如果色带狭窄、平整、均匀下降,则表明柱中的凝胶填装情况较好,可以使用；如果色带弥散、歪曲,则需重新装柱.另外值得一提的是,有时为了防止新凝胶柱对样品的吸附,可以用一些物质预先过柱,以消除吸附.
(3)洗脱液的选择
由于凝胶层析的分离原理是分子筛作用,它不象其它层析分离方式主要依赖于溶剂强度和选择性的改变来进行分离,在凝胶层析中流动相只是起运载工具的作用,一般不依赖于流动相性质和组成的改变来提高分辨率,改变洗脱液的主要目的是为了消除组分与固定相的吸附等相互作用,所以和其它层析方法相比,凝胶层析洗脱液的选择不那么严格.由于凝胶层析的分离机理简单以及凝胶稳定工作的pH 范围较广,所以洗脱液的选择主要取决于待分离样品,一般来说只要能溶解被洗脱物质并不使其变性的缓冲液都可以用于凝胶层析.为了防止凝胶可能有吸附作用,一般洗脱液都含有一定浓度的盐.
(4)加样量
关于加样前面已经有所介绍,要尽量快速、均匀.另外加样量对实验结果也可能造成较大的影响,加样过多,会造成洗脱峰的重叠,影响分离效果；加样过少,提纯后各组分量少、浓度较低,实验效率低.加样量的多少要根据具体的实验要求而定：凝胶柱较大,当然加样量就可以较大；样品中各组分分子量差异较大,加样量也可以较大；一般分级分离时加样体积约为凝胶柱床体积的1％－5％左右,而分组分离时加样体积可以较大,一般约为凝胶柱床体积的10％－25％.如果有条件可以首先以较小的加样量先进行一次分析,根据洗脱峰的情况来选择合适的加样量.设要分离的两个组分的洗脱体积分别为Ve1和Ve2,那么加样量不能超过(Ve1－Ve2).实际由于样品扩散,所以加样量应小于这个值.
从洗脱峰上看,如果所要的各个组分的洗脱峰分得很开,为了提高效率,可以适当增加加样量；如果各个组分的洗脱峰只是刚好分开或没有完全分开,则不能再加大加样量,甚至要减小加样量.另外加样前要注意,样品中的不溶物必须在上样前去掉,以免污染凝胶柱.样品的粘度不能过大,否则会影响分离效果.
(5)洗脱速度
洗脱速度也会影响凝胶层析的分离效果,一般洗脱速度要恒定而且合适.保持洗脱速度恒定通常有两种方法,一种是使用恒流泵,另一种是恒压重力洗脱.洗脱速度取决于很多因素,包括柱长、凝胶种类、颗粒大小等,一般来讲,洗脱速度慢一些样品可以与凝胶基质充分平衡,分离效果好.但洗脱速度过慢会造成样品扩散加剧、区带变宽,反而会降低分辨率,而且实验时间会大大延长；所以实验中应根据实际情况来选择合适的洗脱速度,可以通过进行预备实验来选择洗脱速度.一般凝胶的流速是2－10 cm/hr,市售的凝胶一般会提供一个建议流速,可供参考.总之,凝胶层析的各种条件,包括凝胶类型、层析柱大小、洗脱液、上样量、洗脱速度等等,都要根据具体的实验要求来选择.例如样品中各个组分差异较小,则实验要求凝胶层析要有较高的分辨率,提高分辨率的选择应主要包括：选择包括各个待分离组分但分离范围尽量小一些的凝胶,选择颗粒小的凝胶,选择分辨率高的凝胶类型,选择较长、直径较大的层析柱、减少加样量、降低洗脱速度等等.

SDS-PAGE 、琼脂糖

a,b,c
凝胶过滤层析中,分子量越大的蛋白流出的越快.（用一系列已知分子量的标准品放入同一凝胶柱内,在同一条件下层析,记录每一分钟成分的洗脱体积,并以洗脱体积对分子量的对数作图,在一定分子量范围内可得一直线,即分子量的标准曲线.测定未知物质的分子量时,可将此样品加在测定了标准曲线的凝胶柱内洗肿后,根据物质的洗脱体积,在标准曲线上查出它的的分子量.）
SDS-PAGE电泳,因为蛋白经过SDS变性,基本上形状和所带电荷都类似,因此迁移率之和大小有关.（SDS是阴离子去污剂,作为变性剂和助溶试剂,它能断裂分子内和分子间的氢键,使分子去折叠,破坏蛋白分子的二、三级结构.而强还原剂如巯基乙醇,二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂.在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后,分子被解聚成多肽链,解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS胶束,所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量,这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异.）
生物质谱,可以测量生物分子的核质比.（质谱分析是一种测量离子荷质比（电荷-质量比）的分析方法,其基本原理 Joseph John Thomson是使试样中各组分在离子源中发生电离,生成不同荷质比的带正电荷的离子,经加速电场的作用,形成离子束,进入质量分析器.在质量分析器中,再利用电场和磁场使发生相反的速度色散,将它们分别聚焦而得到质谱图,从而确定其质量.）
免疫电泳利用抗原抗体反应的特异性,与分子量大小无关
等电聚焦电泳利用不同蛋白等电点不同

流速慢;大于筛眼的分子则完全被筛眼排阻而不能进入凝胶网眼,只能随流动相沿凝胶颗粒的间隙流动.流速快,比小分子先流出层析柱;小分子最后流出.【如果我的回答对你有用,麻烦设为好评,

你说的洗脱体积之差是指两个组分的洗下来的体积?你这个问题第一次见,没有听说过样品体积要小于洗脱体积之差这种说法,你在哪里看到的.一般使用凝胶过滤层析,想要获得高分辨率,上样体积控制在柱床体积的0.5—4%,最好是2%,群组分离时可以达到30%,小于0.5%没有意义了.另外,目前市面上分辨率最好的柱料是GE的Superdex,手填柱子的话可以达到10K分辨率.预装柱应该更高,但是十分昂贵,没有试过.其他柱料分离的分辨率要求两种蛋白的分子量相差一倍以上,如果不满足这个条件,大多是骗人的.还有柱料的选择,缓冲液的选择和样品的处理等等很多条件都影响了凝胶层析的效果.

所有的层析在原理上都是相通的,区别在于流动相和层析剂之间的作用力的不同.
离子交换是利用蛋白质表面的电荷与层析剂上的离子基团的静电作用.
凝胶过滤层析利用了凝胶的多孔性,根据溶剂分子的大小进行分离.