36.在包涵体蛋白的变性与复性实验中,最有可能用到以下哪种实验技术?

迷你火狐狸2022-10-04 11:39:541条回答

36.在包涵体蛋白的变性与复性实验中,最有可能用到以下哪种实验技术?
A.透析 B.离心 C.盐析 D.电泳
单选
虽然我查到了各名词的定义,但还是不明白为什么选这个选项..

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angielin2004 共回答了10个问题 | 采纳率100%
你说的是“最有可能用到以下哪种实验技术”,我认为是A .
因为透析复性可 通过逐渐降低外透液浓度来控制变性剂去除速度
离心,是分离包涵体时 使大多数包涵体沉淀,与可溶性蛋白分离.
电泳,在复性后效果的检测用到
1年前

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原核表达涉及的概念吧,原核表达的时候,有能分泌到周质空间的蛋白,也就是带有一定信号肽,可溶性的呢,顾名思义啦,它的好处就是不容易被菌体内的蛋白酶水解掉,一般表达时候都加个大点的标签,GST了之类的.包含体呢,是最比较郁闷的,就是表达的蛋白被揉啊揉的,弄成小团.反正构像是绝对改变的了,也就是不可能有活性了,这个有它的好处,形成包含体之后就不容易被水解掉了,可以通过变性复性来使蛋白重新有活性,比较烦琐.
这是从表达的角度给你解释.有个PET系统的手册,有汉语的10版,看下更有好处.
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只有表达细菌的外源蛋白表达量非常高的时候,才会形成包涵体.而细菌内本身的蛋白因为在长期的进化中,都有调控,能够适量表达,所以一般不会形成包涵体.但是你将细菌自身的蛋白置于表达载体中或者换启动子什么的,使其大量表达,也会形成包涵体.
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按基因工程定义:在某些生长条件下,大肠杆菌能积累某种特殊的生物大分子包涵体,它们致密地集聚在细胞内,或被膜包裹或形成无膜裸露结构,这种水不溶性的结构称为包涵体.
简单的说,就是外源基因在大肠杆菌胞内表达的过程中,因为某些错误的折叠,形成的不溶的无活性的固体颗粒.形成的原因很复杂,比如表达量过高,无法糖基化,组成中含有较多的半胱氨酸之类的氨基酸,离子键疏水键共价键共同的化学作用等.
提高可溶表达的方法也很多
1,降低诱导温度,比如16度诱导.绝大多数蛋白质在降低诱导温度后可以明显提高可溶表达.
2,降低诱导剂的用量,比如0.1mM IPTG诱导.甚至更极端的可以不加诱导剂,形成泄漏表达.这种情况下表达出来的蛋白一定是可溶表达.
3,更换不同的表达载体,表达菌株.比如个人感觉pET28比pET21,Rosetta的菌株比BL21(DE3)更容易可溶表达.
4,更换表达系统增加信号肽,外源基因导入酵母系统或者哺乳动物细胞,只要是能分泌表达一定可溶性表达.
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