革兰氏阳性菌细胞壁中的磷壁酸的作用

首先溶菌酶溶解细胞壁,使细胞破裂,因为细菌细胞无壁后易破裂,而且无核膜,所以不用加SDS破膜了.
然后蛋白酶K使多种蛋白质水解.蛋白酶K可在SDS存在下有活性.
再后SDS能使DNA和蛋白质分开.
蛋白酶K和溶菌酶不能一起加. SDS和酶K可以同时加.
也有某些文献是先加SDS再加酶K的,不过我还是建议按大多数的来,先酶K.更多的人都是同时加的.

解题思路：有的真菌能引起多种疾病，有的真菌却可以产生杀死某些致病细菌的物质，这些物质被称为抗生素，抗生素可以用来治疗相应的疾病．

（1）青霉素是一种著名的抗生素，它是由真菌中的青霉菌产生的，可以治疗多种细菌性疾病．我们要合理、适量的使用抗生素，如果滥用会引起细菌的抗药性增强，还会杀死人体内有益的细菌．
（2）人体免疫的功能有防御感染、自我稳定、免疫监视；当防御感染的功能过强是会出现过敏反应．在使用青霉素前必须对患者进行皮试，否则有些患者会因为对青霉素过敏而发生休克甚至死亡．过敏反应是人体免疫功能过强即防御感染飞功能过程所致．因此过敏反应是人体免疫功能的体现．
故答案为：（1）青霉菌；抗生素；（2）皮肤．

点评：
本题考点： 安全用药的常识；真菌在自然界中的作用及其与人类的关系．

考点点评： 掌握真菌等与人类生活的关系，了解抗生素的概念以及相关的内容，就能解答本题．

光合细菌是一种革兰氏阴性细菌,是最复杂的细菌菌群之一.

D
青霉素药理作用是干扰细菌细胞壁的合成.所以应该选细胞壁较厚的革兰氏阳性菌.

革兰氏阴性菌呈现粉红色或红色.革兰氏阳性菌呈现紫色或蓝黑色.

不能,要经过复染才会重新上色,然后通过上色的情况来判断是革兰氏阴性还是阳性.
另外再给你一个革兰氏染色的步骤和原理,
革兰氏染色
一、x09目的：在细胞发放之前,利用标准的革兰氏染色法对即将发放的细胞悬液进行检测,判断细胞悬液中是否含有革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌.
二、x09原理：
通过结晶紫初染和碘液媒染后,在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物,革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密,故遇乙醇脱色处理时,因失水反而使网孔缩小,再加上它不含类脂,故乙醇处理不会出现缝隙,因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内,使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差,在遇脱色剂后,以类脂为主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出,因此通过乙醇脱色后仍呈无色,再经沙黄等红色染料复染,就使革兰氏阴性菌呈红色.
三、实验用品准备：
灭菌玻片、10-100ul移液器、10-100ul灭菌移液吸头、100ul-1000ul移液器、100ul-1000ul移液吸头、接种环、酒精灯、打火机、革兰氏染色液、吸水纸、显微镜、香柏油、擦镜纸、计时器
四、x09操作：
1 涂片：取灭过菌的载玻片于实验台上,用移液枪吸取10ul待检样品滴在载玻片的中央,用烧红冷却后的接种环将液滴涂布成一均匀的薄层,涂布面不宜过大.
2 干燥：将标本面向上,手持载玻片一端的两侧,小心地在酒精灯上高处微微加热,使水分蒸发,但切勿紧靠火焰或加热时间过长,以防标本烤枯而变形.
3 固定：固定常常利用高温,手持载玻片的一端,标本向上,在酒精灯火焰处尽快的来回通过2-3次,共约2-3秒种,并不时以载玻片背面加热触及皮肤,不觉过烫为宜（不超过60℃）,放置待冷后,进行染色.
4 初染：在涂片薄膜上滴加草酸铵结晶紫1-2滴,使染色液覆盖涂片,染色约1min.
5 水洗：斜置载玻片,在自来水龙头下用小股水流冲洗,直至洗下的水呈无色为止.
6 媒染：用100-1000ul移液枪吸取约300ul碘液滴在涂片薄膜上,使染色液覆盖涂片,染色约1min.
7 水洗：斜置载玻片,在自来水龙头下用小股水流冲洗,直至洗下的水呈无色为止.
8 脱色：斜置载玻片,滴加95%乙醇脱色,至流出的乙醇不现紫色为止,大约需时20-30S,随即水洗.
9 复染：在涂片薄膜上滴加沙黄染液1-2滴,使染色液覆盖涂片,染色约1min.
10 水洗：斜置载玻片,在自来水龙头下用小股水流冲洗,直至洗下的水呈无色为止.
11 干燥、观察：用吸水纸吸掉水滴,待标本片干后置显微镜下,用低倍镜观察,发现目的物后滴一滴浸油在玻片上,用油镜观察细菌的形态及颜色,紫色的是革兰氏阳性菌,红色的是革兰氏阴性菌.
五、x09清场：
1.实验结束后,将显微镜油镜上的残留的香柏油用擦镜纸轻轻擦去,将载物台移至最底处,将灯光调到最暗并将其关闭电源,拔下电源插头,罩上防尘罩.

没有染色体,这样说只是习惯而已.叙述的方便.

采用革兰氏染色技术可以将细菌细胞壁区分为两种类型,革兰氏阳性（G＋）和革兰氏阴性（G—）.革兰氏染色（Gram stain）是丹麦医生革兰（Hans Christian Gram）于1884年采用表2-3所列程序对细菌染色,结果因显色不同可将细菌区分为两类,分别称为革兰氏阳性和阴性.
表2-3 革兰氏染色程序和结果
步 骤 方 法 结 果
阳性（G+） 阴性（G—）
初 染 结晶紫30s 紫 色 紫 色
媒染剂 碘液30s 仍为紫色 仍为紫色
脱 色 95%乙醇10～20s 保持紫色 脱去紫色
复 染 蕃红（或复红）30～60s 仍显紫色 红 色
细菌的不同显色反应是由于细胞壁对乙醇的通透性和抗脱色能力的差异,主要是肽聚糖层厚度和结构决定的.经结晶紫染色的细胞用碘液处理后形成不溶性复合物,乙醇能使它溶解,所以染色的前二步结果是一样的,但在G＋细胞中,乙醇还能使厚的肽聚糖层脱水,导致孔隙变小,由于结晶紫和碘的复合物分子太大,不能通
过细胞壁,保持着紫色.在G—细胞中,乙醇处理不但破坏了胞壁外膜,还可能损伤肽聚糖层和细胞质膜,于是被乙醇溶解的结晶紫和碘的复合物从细胞中渗漏出来,当再用衬托的染色液复染时,显现红色.红色染料虽然也能进入已染成紫色的G+细胞,但被紫色盖没,红色显示不出来.
革兰氏阳性和阴性细菌细胞壁的结构比较如图2-8所示.
①革兰氏阳性细菌的细胞壁
G＋细菌细胞壁具有较厚（20-80nm）而致密的肽聚糖层,多达20层,占细胞壁成分的60%～90%,它同细胞膜的外层紧密相连（图2-9）.有的G＋细菌细胞壁中含有磷壁酸（teichoic-acid）,也称胞壁质（murein）,它是甘油和核糖醇的聚合物,磷壁酸通常以糖或氨基酸的酯而存在.由于磷壁酸带负电荷,它在细胞表面能调节阳离子浓度.磷壁酸与细胞生长有关,细胞生长中有自溶素（autolysins）酶类起作用,磷壁酸对自溶素有调节功能,阻止胞壁过度降解和壁溶.
如果细胞壁的肽聚糖层被消溶,G＋细胞成为原生质体（protoplasts）,细胞壁不复存在,而只存留细胞膜.除链球菌外,大多数G＋细菌细胞壁中含极少蛋白质.
②革兰氏阴性细菌的细胞壁 G—细菌细胞壁比G＋细菌细胞壁薄（15～20nm）而结构较复杂,分外膜（outer membrane）和肽聚糖层（2～3nm）（图2-10）.在细胞壁和细胞质膜之间有一个明显的空间,称为壁膜间隙（periplasmic space）.
外膜 G—细菌细胞壁外膜的基本成分是脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）,它同细胞质膜相同之处也是双层类脂,但除磷脂外还含有多糖和蛋白质.
LPS的多糖部分包括核心多糖和O-特异多糖.O-特异多糖由重复分支的碳水化合物分子组成,含有已糖（葡萄糖、半乳糖和鼠李糖）和二脱氧已糖.由于糖的种类不同,使各种G—细胞具有不同特性的LPS.核心多糖（core polysaccharide）的主要组分是酮脱氧辛酸（ketodeoxyoctonate,KDO）.
外膜中还含有几种蛋白,如脂蛋白、通透蛋白.有些蛋白具有通孔作用（porin）,调控外界分子进入细胞；有的蛋白分子可以作为噬菌体的受体；许多G—细菌对高等生物有致病性是由LPS的成分决定的,它的毒性组分常称为内毒素（endotoxins）.
肽聚糖层 G—细菌细胞壁的肽聚糖层很薄,在大肠杆菌和其它细菌中仅有单
层.肽聚糖层和外膜的内层之间通过脂蛋白连接起来.
壁膜间隙 G—细菌细胞壁的外膜与细胞质膜之间存在明显的壁膜间隙,一层薄的肽聚糖处于其间,肽聚糖层和细胞质膜之间的间隙较宽,肽聚糖层至外膜之间的间隙较窄.大肠杆菌的壁膜间隙宽度为12～15nm,呈胶胨态.其间含有三类蛋白质：水解酶,催化食物的初步降解；结合蛋白,启动物质转运过程；化学受体（chemoreceptors）,在趋化性中起作用的蛋白.

不能`` 那阴性菌不就没有颜色了?``只有复染了才能看的到是 红色的吧.

伊红美蓝为苯胺类染料.苯胺类可抑制革兰氏阳性菌生长.
有报道称苯胺类杀菌剂作用机制主要是抑制蛋氨酸的合成.

BAAAB,AAABA.

并不是这样.革兰氏阴、阳性与需氧菌和厌氧菌并无直接关系,需氧菌和厌氧菌都有可能是革兰氏阴性或阳性的.
革兰氏染色只能说明细菌细胞壁的成分之间的不同,对染液（尤其是结晶紫）的亲合力不同而表现出的阴性或阳性.
而需氧、厌氧则反映的是细菌能量代谢类型.
两者之间无必然联系.

为什么不抽基因组?抽出来的模板你可以用好多次.煮沸法模板有效期短,提取的效率也很低下,干扰PCR的杂质也多.就像你PCR失败一样,不一定是模板中没有DNA,也可能是杂质干扰的结果.
如果样本只是一个菌,或者不是很多,建议少量提取基因组,这样的模板是不会有问题的.至少,包括我在内我所有见过的做过这个实验的人都没有失败过.
如果样本很多,非得要煮沸法的话你这样做：
不要用PCR仪95℃处理,用液体培养基离心获得菌体,除去培养基,无菌水悬浮,沸水浴30min,迅速-20℃冰冻,化冻后8000rpm离心以沉淀细胞碎片,取2μL上清作为PCR模板.
如果你非要用PCR仪处理,也行,37℃溶菌酶预处理30min.
如果我说的你都不想做,那么请把你的模板用量减少到2μL（我指的是对于50μLPCR体系来说）,说不定是杂质太多导致你PCR失败.

两种菌由其染色方法来区分~
革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法,1884年由丹麦医师Gram创立
细菌先经碱性染料结晶染色,而经碘液媒染后,用酒精脱色,在一定条件下有的细菌此色不被脱去,有的可被脱去,因此可把细菌分为两大类,前者叫做革兰氏阳性菌（G+）,后者为革兰氏阴性菌（G—）.为观察方便,脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红等进行复染.阳性菌仍带紫色,阴性菌则被染上红色.有芽胞的杆菌和绝大多数和球菌,以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应；弧菌,螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应.
[原理]：革兰氏染色目前有三种观点：等电点学说、化学学说和渗透学说.
1． 等电点学说,革兰氏阳性菌的等电点在PH2-3,比阴性菌（PH4-5）低,加之碘为弱氧化剂,可降低革兰氏阳性菌的等电点,致使两类菌的等电点差异扩大,因此阳性菌和碱性染料的结合力比阴性菌更强.
2．化学学说,碘液在菌体内与结晶紫结合后又和菌体内核糖核酸镁盐-蛋白质复合物结合,此结合物不易被丙酮酒精脱掉,呈革兰氏染色阳性.因革兰氏阴性菌缺乏核糖核酸镁盐,故对碘与结晶紫结合物摄取少,且不牢固,易被丙酮酒精脱色而呈革兰氏染色阴性.
3．渗透学说,乙醇使阳性菌所含粘肽多糖脱水而致细胞壁间隙缩小,通透性降低,在菌体内保留了染料-碘复合物,呈紫色.阴性菌含粘肽少,细胞壁变化不大,通透性不受影响,菌体内的染料-碘复合物较易透出,失去紫色,被复染成为红色.

不可以.因为革兰氏碘液（媒染剂）的作用是增加结晶紫染料和细胞之间的亲和性或附着力,即以某种方式帮助染料固定在细胞上,使不易脱落.改变顺序可能会对效果有影响,所以最好按步骤做.
脱色后复染前,理论上革兰氏阳性菌呈紫色,阴性菌无色.复染的目的就是增加无色阴性菌与背景的反差,以便区别于紫色的阳性菌
革兰氏阳性菌细胞壁厚,肽聚糖网状分子形成一种透性障,当乙醇脱色时,肽聚糖脱水而孔障缩小,故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上.呈紫色.
革兰氏阴性菌肽聚糖层薄,交联松散,乙醇脱色不能使其结构收缩,其脂含量高,乙醇将脂溶解,缝隙加大,结晶紫-碘复合物溶出细胞壁,番红复染后呈红色.
革兰氏染色步骤：
1.涂片,火焰固定
2.结晶紫1min,使菌体着上紫色
3.水洗
4.碘液1min,碘和结晶紫形成脂溶性大分子复合物,分子大,能被细胞壁阻留在细胞内
5.水洗
6.酒精脱色30s,细胞壁成分和构造不同,出现不同的反应.
7.水洗
8.番红复染1min,增加脱色菌与背景的反差并区别于未脱色菌.
9.以吸水纸吸干,油镜观察

(1)青霉菌；抗生素
(2)皮肤
(3)小；人和动物细胞无细胞壁结构，而青霉素的作用是抑制细胞壁的形成

1 退火温度不好,可以把退火温度设置一个梯度,比如说45℃到55℃,再试一试.
2 高温变性没有做好,看基因片段的CG含量来设置变性温度,CG含量高,变性温度就要相对高点.
3 引物还是没有设计好.也有这个可能

陈旧培养物中衰老死亡的、或者临床样本中被吞噬细胞吞噬破坏的革兰阳性菌进行革兰染色后看到的是红色.

你都知道了,还问什么?
青霉素抑制肽聚糖的交联,进而破坏细胞壁形成.G+肽聚糖层多,G-肽聚糖层数少.