聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶的化学聚合和光聚合有什么不同

蒲饭爱悔2022-10-04 11:39:541条回答

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sey347 共回答了23个问题 | 采纳率95.7%
化学聚合是通过化学催化剂(过硫酸铵),四甲基乙二胺(TEMED)作为加速剂催化聚合作用形成的三维空间的高聚物;而光聚合的催化剂是核黄素,在恒量氧存在下,核黄素光解形成无色基再被氧氧化成自由基,激活单体发生聚合.
光聚合形成的孔径较大,且不稳定,适合制备大孔径的浓缩胶.
1年前

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是不是书上写错了
dvol1年前1
chenwei1982120 共回答了20个问题 | 采纳率90%
这是两种分类方法.
前者是按电泳介质分类,后者是指仪器,用玻璃管电泳,产生的区带为圆盘状.二者可以交叉.
圆盘电泳时,玻璃管中可以采用SDS聚丙烯酰胺凝胶,也可以用非变性胶.也可以用其它介质,但一般都使用丙烯酰胺.
对于SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳,可以采用玻璃管,也可以用垂直板.
聚丙烯酰胺凝胶电泳变性与非变性的有什么不同?
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PCR产物的电泳
Angel宝宝1年前1
zhang1q1q 共回答了18个问题 | 采纳率88.9%
变性电泳buffer里面含尿素等变性剂 pcr产物dna双链会解离成为单链
非变性电泳不会解链 dna以双链形式电泳
聚丙烯酰胺凝胶电泳为什么出现锯齿状胶体?
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配制聚丙烯酰胺凝胶电泳时,分离胶凝固以后上层界面出现锯齿状,跑胶出来条带也是锯齿状,没法用.换了缓冲液和电泳槽以后还是这样,不知道到底是什么原因.有遇到相似问题的专家指教!
xnztx1年前3
鹨信旖 共回答了14个问题 | 采纳率92.9%
如果是分离胶有锯齿,应该是制胶的问题,与电泳槽和电泳缓冲液无关.可能水封做得不好,加水太猛,冲出了锯齿;同时胶凝固太快,可能是AP和TEMED过多.可减少二者用量,使胶在15-30分钟凝固.加水封要轻,避免扰动表面.至少加完水后界面恢复平整.
请问,PAGE原理(聚丙烯酰胺凝胶电泳)中,不连续电泳体系中的浓缩效应是如何产生的?
天外来客19001年前3
avenewh 共回答了17个问题 | 采纳率100%
凝胶层的不连续性:不连续系统的凝胶包括浓缩胶和分离胶.浓缩胶的孔径大,分离胶的孔径小.在电场的作用下,蛋白质颗粒在大孔胶中泳动时遇到的阻力小,移动快.而在小孔胶中泳动时遇到的阻力大,移动慢.因此,在两层凝胶的交界处,由于凝胶孔径的不连续性使样品迁移受阻而压缩成很窄的区带.
缓冲液离子成分和pH的不连续性:在两层凝胶中均有Tris和HCl.Tris的作用是维持溶液的电中性及pH.HCl在一定pH条件下易解离出Cl-,它在电场中迁移率大,走在最前面,故称为快离子或前导离子.电极缓冲液中的甘氨酸在pH8.3的缓冲液中解离度很小,仅为0.1-1%,因而在电场中迁移率很小,称为慢离子或尾随离子.血清中,大多数蛋白质pI在5.0左右,在pH8.3或6.7时均带负电荷,在电场中均移向正极,其有效迁移率介于快慢离子之间,于是蛋白质就在快慢离子间形成的界面处,被浓缩成极窄的区带.当进入pH8.9的分离胶时,甘氨酸解离度增加,其有效迁移率超过蛋白质,因此氯离子和甘氨酸离子沿着离子界面继续前进.蛋白质分子由于分子量大,被留在后面,然后分离成多个区带.
此外,电泳体系中电位梯度的不连续性对样品的浓缩和迁移也具有一定作用.
是否能够使用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行核酸分子的检测
slmm3281年前1
白色hh泡 共回答了14个问题 | 采纳率85.7%
不知道你所谓的核酸分子的检测是检测什么
一般DNA的分离或者PCR产物的检验
都是用琼脂糖或者聚丙烯酰胺凝胶电泳
根据不同分子量的片段大小
选择不同浓度的PAGE胶
聚丙烯酰胺凝胶电泳不但可以用来检测DNA
还可以检测蛋白质
血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳实验为什么样品在浓缩胶中被压缩成薄层
蓝白的蝶1年前2
qianyilan 共回答了18个问题 | 采纳率94.4%
浓缩胶的作用原理
不连续缓冲系统的主要优点之一是可以使用稀样品.这是因为在样品进入分离胶以前,先经过大孔径浓缩胶的迁移作用而被 浓缩至一极窄的区带.其作用原理是在缓冲系统中的弱酸,如甘氨酸,在接近其pKa的pH值时,任何时候都只有一部分分子带负电.如样品和浓缩胶均用pH 6.7的Tris-HCI缓冲液,电极液用Tris-甘氨酸缓冲液.此时,甘氨酸很少解离,其有效泳动率很低,而氯离子却有很高的泳动率,蛋白质分子的泳动率介于氯离子和甘氨酸之间.一旦加上电压,作为先导离子的氯离子和作为尾随离子的甘氨酸离子分离开来,并在其后面留下一个导电性较低的区带.由于导电性与电场强度成反比,这一区带便获得较高的电压梯度,并加速甘氨酸的泳动,使其赶上氯离子, 建立起甘氨酸和氯离子的电压梯度和泳动率乘积的相等的稳定态,使这些带电颗粒以相同速度泳动,两种离子之间具有明显的边界.当甘氨酸、氯离子界面通过样品进入浓缩胶时,在移动界面前有一低电压梯度,在界面后有一高电压梯度.由于在移动界面前的蛋白质泳动速度比氯离子低,因此氯离子能迅速越过.移动界面后的蛋白质处于较高的电压梯度中,其泳动速度比甘氨酸快.因此,移动的界面将蛋白质分子堆积到一起,浓缩为一狭窄的区带.蛋白质在移动界面中的浓缩作用仅取决于样品和浓缩胶中的Tris-HCI的浓度,而与样品中蛋白质的最初浓度无关.由于浓缩胶为大孔凝胶,故对样品没有分子筛作用.当移动的界面到达浓缩胶和分离胶的界面时,凝胶的pH值明显增加,并导致甘氨酸的大量解离.此时甘氨酸的有效泳动率增加,使它越过蛋白质并直接在氯离子后移动.同时由于凝胶孔径变小,使蛋白质分子的迁移率减小.于是蛋白质分子在均一的电压梯度和pH值中泳动,并根据其固有的带电性和分子大小进行分离.
聚丙烯酰胺凝胶电泳的问题,用聚丙烯酰胺凝胶电泳测小麦幼苗中的过氧化物中同工酶,用溴酚蓝当指示剂,最后用二苯胺和抗坏血酸显
聚丙烯酰胺凝胶电泳的问题,
用聚丙烯酰胺凝胶电泳测小麦幼苗中的过氧化物中同工酶,用溴酚蓝当指示剂,最后用二苯胺和抗坏血酸显色.我上课没仔细听,有好多疑问啊:1凝胶点样点和最下面的蓝色是溴酚蓝遇到二苯胺显得色吗.2.同工酶的条带在哪里啊?3.电泳的时候溴酚蓝指示的条带不水平,是什么原因啊?
液冷散热器1年前1
blowkisswen 共回答了16个问题 | 采纳率81.3%
溴酚蓝本身就是蓝色的,不用再显色,所以才能做指示剂.
二苯胺和抗坏血酸显色后出现的就是同功酶的条带了,这是利用酶的催化作用产生的颜色,其他蛋白不会显示出来.
溴酚蓝指示的条带不水平,可能原因很多,比如胶聚合不均匀,电泳电压过大,样品或点样缓冲液有问题等等都有可能.
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳?
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳?
比较说明SDS-PAGE(SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳)和琼脂糖凝胶电泳的物质分离原理和特点?
kame_gg1年前1
penghui100 共回答了23个问题 | 采纳率95.7%
SDS-PAGE用来分离蛋白质的,而且是先将蛋白的高级结构变性成1级结构,之后根据蛋白质量大小分离的.
琼脂糖是分离DNA的,原理也是根据质量大小分离
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳可以鉴定蛋白质的哪些性质?除了测定蛋白质的相对分子质量,实在找不到.
迷茫的爱2331年前1
0o珠珠o0 共回答了16个问题 | 采纳率93.8%
蛋白质的表达量蛋白由几个亚基组成如果是纯化后蛋白跑电泳,可以判断纯化情况单纯的SDS-PAGE应该只能判断这些了,希望对你有帮助
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳与聚丙烯酰胺凝胶电泳原理上有何不同?
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳与聚丙烯酰胺凝胶电泳原理上有何不同?
如题
说具体点
羽翼5201年前1
就在硬件天堂混 共回答了20个问题 | 采纳率85%
最大的不同是 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)用的蛋白质不做任何变性处理
SDS-PAGE中的SDS是十二烷基磺酸钠,是蛋白质变性剂,SDS能拆散蛋白质的折叠结构,然后沿伸展的多肽链的表面吸附.使肽链带净负电荷,蛋白质在电场中的泳动速度仅与蛋白质颗粒大小有关.
比SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳更加灵敏的蛋白质鉴别方法有什么?
660140721年前1
悲伤流成河淹ff你 共回答了23个问题 | 采纳率91.3%
你说的灵敏指的是特异性还是灵敏度?SDS-PAGE只是个定性的鉴别方法.
特异性上像WB,ELISA方法,原理是抗原抗体反应,能识别特异的蛋白.
灵敏度上HPLC一般是作为蛋白纯度指标的检定方法.
聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质常按照什么来选择适宜的凝胶孔径
x522841年前1
RioTo 共回答了20个问题 | 采纳率85%
一般根据要分离的蛋白质的分子量来确定,如果分子量不清楚,可以先用7.5%的浓度预试一下.
比较SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和凝胶层析法分离蛋白质的异同点
juan1681年前3
daoieowu 共回答了21个问题 | 采纳率95.2%
两种方法原理不同,有差异是正常的.如果差距较大,要仔细分析.一般凝胶层析是非变性的,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳是变性的,二硫键也被还原,所以是亚基(肽链)分子量.凝胶层析与分子形状有关,一般marker都是球状蛋白,所以...
聚丙烯酰胺凝胶电泳内外槽缓冲液相通?
聚丙烯酰胺凝胶电泳内外槽缓冲液相通?
我想知道一个问题就是跑聚丙烯酰胺凝胶电泳时如果内外槽的缓冲液相通了会对电泳体系有什么影响,
聚丙烯酰胺凝胶电泳仪是竖起跑的,在设计上内外槽也是分开的,之间的缓冲液也是不相通的,如果说内外槽之间的缓冲液相通了,也就是说把胶装上去的时候密封不够好,漏液了,会对实验体系有什么影响?
看了好多关于聚丙烯酰胺凝胶电泳方面的都没有讲到这点上.谁知道的:(
内槽的液面一定要高于短玻璃板,外槽的液面一般要多高才合适,跑一块胶和两块胶外槽所需缓冲液的量是不一样的,那天我跑两块,因为模具上的问题有点漏了,就干脆把内外槽弄到同一液面,水平了,对实验体系的电流有什么影响.
mamaniu1年前1
青澈 共回答了9个问题 | 采纳率100%
党内外槽电泳液一样时,对实验结果没什么影响,只是漏了,蛋白跑的很慢,当漏到一定程度时,电泳就无法进行了
聚丙烯酰胺凝胶电泳跑DNA 电泳缓冲液可以用1XTAE代替1XTBE吗?
魔术卡1年前1
xxg633 共回答了20个问题 | 采纳率90%
是这样的,TAE和TBE都能用来跑电泳,TAE用的比较广泛!他俩的区别是:TAE:缓冲容量小,但是溶解性能好,可以配成高浓度储备液,使用方便;TBE:缓冲容量大,可以较长时间再换一次,但是溶解性不好,通常只配.2X 储备液,或者直接用粉剂配,使用不方便.………………… …………………… 详细资料请参考:TBE聚丙烯酰胺凝胶(电泳) :http://product.bio1000.com/100022/
关于PCR退火温度和聚丙烯酰胺凝胶电泳条件调整
关于PCR退火温度和聚丙烯酰胺凝胶电泳条件调整
请看图:希望1条带和2条带的差异明显些,好看容易读些,还有2条带和3条带的差异也明显些,跑的清楚些.
如何改变退火温度降低还是升高?是否需要改变模板浓度或者是增大PCR循环数目?我用的7.5微升体系PCR.
变性后用聚丙烯酰胺凝胶电泳跑胶,实际功率为:1500V,100毫安,55瓦.
时间是不是跑的再长一点
0.0.0..
向往海19811年前2
qztvr 共回答了16个问题 | 采纳率100%
你是想让1,2条带分得开一些,还是想让他们看起来清晰一些?
要是想让1,2条带分得开一些,就是在制胶时配制高浓度的琼脂糖胶,比如我们平时用1%的,你可以配成1.5%或2%的,然后在跑胶时选择低电压长时间跑,80-100v稳压.
如果你要是想让条带清晰些,可以做个梯度PCR摸一下最适Tm值,同时可以适当增加一两个循环数,也可以延长一下变性和退火时间
生化实验做聚丙烯酰胺凝胶电泳时剥胶步骤时,材料说注意测量,是测量什么呀?
生化实验做聚丙烯酰胺凝胶电泳时剥胶步骤时,材料说注意测量,是测量什么呀?
材料显示的是去掉浓缩胶前注意先进行测量,是测量条带迁移率吗?
necromancer11年前2
DEANZHANG1980 共回答了22个问题 | 采纳率86.4%
对的.用直尺分别量取各个标准分子量的条带到凝胶顶端的距离,计算各个条带的相对迁移率(
mR =样品迁移距离(cm)/染料迁移距离(cm)),然后 以标准蛋白质分子量的对数对相对迁移率作图,得到标准曲线;最后根据待测样品的相对迁移率,从标准曲线上查出其分子量.
是否能够使用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行核酸分子的检测?为什么?
铜壶滴尽莲花露1年前1
wxhjs 共回答了18个问题 | 采纳率88.9%
当然可以,聚丙烯酰胺用来跑dna比琼脂糖还要好,基本上一个bp的差别都可以跑开
筛选的引物跑变形聚丙烯酰胺凝胶电泳,银染后无条带出现,
筛选的引物跑变形聚丙烯酰胺凝胶电泳,银染后无条带出现,
筛选较好的引物对实验材料进行再次跑PCR、变形聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染,结果染过的胶除marker的条带清晰且明显分开,其他孔道基本无条带且胶的颜色较浅,不清楚是什么原因?
yyh762311年前3
独舞之叶 共回答了13个问题 | 采纳率84.6%
变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后,回收的差异条带是单链吗?里面是一条单链,还是是双链解开了,两条链都有.变性只是让双链解开,以去除二级结构的影响 .
蛋白质SDS-]聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理是什么
st09031年前2
如水123456789 共回答了31个问题 | 采纳率74.2%
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pipilei9151年前1
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榴莲臭豆腐1年前3
zh9904 共回答了17个问题 | 采纳率88.2%
主要可能是TEMED和AP的量的问题,你可以参考一下我的配方:
分离胶12.5%(SDS),10ml体系
分离缓冲:2.5ml
贮胶:4.167ml
纯水:3.233ml
10%SDS:0.1ml
10%AP:100微升
TEMED:5微升
————————————————————————
浓缩胶5%,4ml体系
浓缩缓冲:1ml
贮胶:0.6ml
纯水:2.35ml
10%AP:45微升
TEMED:15微升
————————————————————————
以上配方经本人亲用无数次证明切实有效,大概在一小时左右即可凝固,天冷凝得慢可放置于25度烘箱内帮助加速凝固.
为什么聚丙烯酰胺凝胶电泳小分子先出来?不适合凝胶过滤一样都是分子筛原理吗?看过你以前的回答
谭柱1年前2
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凝胶层析的固定相是惰性的珠状凝胶颗粒,凝胶颗粒的内部具有立体网状结构,形成很多孔穴.
当含有不同分子大小的组分的样品进入凝胶层析柱后,各个组分就向固定相的孔穴内扩散,组分的扩散程度取决于孔穴的大小和组分分子大小.
比孔穴孔径大的分子不能扩散到孔穴内部,完全被排阻在孔外,只能在凝胶颗粒外的空间随流动相向下流动,它们经历的流程短,流动速度快,所以首先流出;
而较小的分子则可以完全渗透进入凝胶颗粒内部,经历的流程长,流动速度慢,所以最后流出;分子越大的组分越先流出,分子越小的组分越后流出.
聚丙烯酰胺凝胶电泳不是通过凝胶颗粒内部的孔穴保留小分子的,
聚丙烯酰胺凝胶是通过三维网状结构分离,所以小分子先出,大分子比较慢出.
不一样的原理
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mtdxw1251年前1
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这个步骤称为水封
目的是隔绝空气使催化反应快速进行,进而形成凝胶,还可使分离胶上沿平直.
并且加水后,保持分离胶表面的平整性,使浓缩胶和分离胶都处于同一水平面上.
使SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳具有高分辨率的三个因素是什么
adamaria1年前1
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①电荷效应: ②分子筛效应: ③浓缩效应
ssr分子标记跑聚丙烯酰胺凝胶电泳后,泳道上有拖尾现象,这是什么原因引起的呢?
黑百合42211年前1
coolshadow 共回答了19个问题 | 采纳率94.7%
其实这个拖尾不算多严重,没有影响到数据统计和观察.
如果你非常介意有拖尾现象,我感觉首先可以考虑一下减少上样量.然后PCR可以用Mix来做,引物终浓度不要太高,0.2uM也就够了,DNA模板也不要加太多,变性、退火、延伸时间也不要太长,15s-15s-30s也就够了.染色时甲醛也不要加太多.还有你的梳子和压条是否配套.
祝好运.
在实验室做聚丙烯酰胺凝胶电泳,用银染溶液,使胶上的DNA显示出来后,会得到一条带.这条带该怎么读?
在实验室做聚丙烯酰胺凝胶电泳,用银染溶液,使胶上的DNA显示出来后,会得到一条带.这条带该怎么读?
看见他们都是,先读分子量,再读什么0、1、10、01、11什么的.这些数字,都是怎么看出来的,有什么用啊?
依七1年前1
huanganwei88 共回答了19个问题 | 采纳率94.7%
这统计条带,按marker上不同分子量大小区分条带 ,每条条带在不同样品有计为1,没有计做0,.然后用软件聚类分析.
我做的是非变形的聚丙烯酰胺凝胶电泳,考马斯亮蓝染色,脱色之后,在整个泳道出现蓝色,看得到几条带,但是背景蓝色太深,脱不掉
我做的是非变形的聚丙烯酰胺凝胶电泳,考马斯亮蓝染色,脱色之后,在整个泳道出现蓝色,看得到几条带,但是背景蓝色太深,脱不掉,没有点坏啊,凝胶还是好的!有的泳道是蓝白相间的竖条纹,有的没有白色,是怎么回事?
YH_200508011年前1
今天芙蓉了吗 共回答了27个问题 | 采纳率85.2%
你这个有可能是
1脱色不全 建议再脱色一会
2如果跑的是总蛋白的话,有可能会出现连续的蓝色条带.
3 蓝白相间的竖条纹?我猜这是横条纹吧……
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2.预电泳的条件是什么?
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lxm7611 共回答了13个问题 | 采纳率100%
上层为浓缩胶,缓冲液pH为6.8,Tris浓度为0.5M;而下层为分离胶,缓冲液浓度为8.8,Tris浓度为1.5M.两者不管是pH还是Tris浓度都不相同,可以形成一种不连续的效果.因此不能混合.
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jiaojiao061年前1
Liuxiaoh123 共回答了21个问题 | 采纳率81%
用ELISA分析 有试剂盒
ELISA基本原理
ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称.近二十几年来,免疫学分析方法发展很快,特别是在使用标记了的抗原和抗体的分析技术以后,使原来许多经典的分析方法在敏感性和特异性方面都不能相比.继50年代的免疫荧光(IFA)和60年代的放射免疫(RIA)分析技术之后,1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)用于IgG定量测定的文章,使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法,建立了用酶来标记抗原或抗体的分析技术.它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术,是一种用酶标记抗原或抗体的方法.由于酶的高效生物催化作用,一个酶分子在数分钟内可以催化几十几百个底物分子发生反应,产生了放大作用,使得原来极其微乎其微的抗原或抗体在数分钟后就可被识别出来.
ELISA试验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法.将抗原、抗体免疫反应的特异性和酶的高效催化作用原理有机地结合起来,可敏感地检测体液中微量的特异性抗体或抗原.此项技术自70年代初问世以来,发展十分迅速,由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域.
ELISA基本原理
ELISA是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术.
ELISA基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记,基本原理有三条:
(1) 抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫学活性;
(2) 抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物,而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性;
(3) 酶结合物与相应抗原或抗体结合后,可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在,而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的,因此,可以按底物显色的程度显示试验结果.
由于抗原、抗体的反应在一种固相载体——聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,每加入一种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证试验结果的特异性与稳定性.
在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应.用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开,最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例.加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析.由于酶的催化频率很高,故可极大地地放大反应效果,从而使测定方法达到很高的敏感度.
聚丙烯酰胺凝胶电泳染色银染染什么的
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lansono 共回答了20个问题 | 采纳率95%
可以染出DNA的条带出来,从而判断其序列
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聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的凝胶,具有机械强度好、弹性大、透明、化学稳定性高、无电渗作用、设备简单、样品量小(1~100ug)、分辨率高等优点,并可通过控制单体浓度或单体与交联剂的比例,聚合成不同孔径大小的凝胶,可用于蛋白质、核酸等分子大小不同的物质的分离、定性和定量分析.还可结合解离剂十二烷基硫酸钠(SDS),以测定蛋白质亚基的相对分子质量.
聚丙烯酰胺凝胶等作为支持介质的区带电泳法称为凝胶电泳.其中聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸.
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溴酚蓝呈蓝色,而蛋白质是白色,在SDS-凝胶中不明显,再次,溴酚蓝的相对分子量比蛋白质(绝大部分)小,电泳时速度比蛋白质稍快,因此可用作指示,当溴酚蓝到达电泳槽底部(可看蓝色调带),则电泳结束.若无溴酚蓝,不好蛋白质电泳到槽底的时间.如果所有的蛋白质都电泳到了底部,还有意义吗?就没有区别出其移动速度(对应于相对分子质量).
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0v温柔一刀v01年前1
_风_剪_云_ 共回答了21个问题 | 采纳率90.5%
这个很简单,主要原因就是蛋白质带的电荷决定了它们在电泳槽中的位置.
在做核酸的聚丙烯酰胺凝胶电泳后,
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君临天下666 共回答了16个问题 | 采纳率93.8%
(硝酸银)银染步骤:
(1)取下凝胶放入染色盒中用蒸馏水冲洗2次;
(2)固定:将胶放于固定液中振荡,固定10min;
(3)氧化:倒出固定液,水洗后用1%硝酸氧化3min,用蒸馏水漂洗2次,每次2s;
(4)染色:放入银染液中避光染色30min;
(5)洗涤:蒸馏水漂洗15s;
(6)显色:放入显色液中显色;
(7〕停显:待有清晰条带出现(背景不太深时)倒出显色液,加入10%乙酸终止显 色;
(8)水洗,成像.
固定液:10%乙醇,0.5%乙酸
银染液:0.2%硝酸银,用之前加200ul甲醛(250ml银染液中)
显色液:1.5%氢氧化钠,0.5%甲醛
PAGE凝胶核酸电泳 为什么最近在配12% 聚丙烯酰胺凝胶电泳,但配胶时梳孔内都有残留的胶,加样很困难.为什么梳孔会有残
PAGE凝胶核酸电泳 为什么
最近在配12% 聚丙烯酰胺凝胶电泳,但配胶时梳孔内都有残留的胶,加样很困难.
为什么梳孔会有残留胶呢?
以前都没有这种问题出现过
justine1年前1
flydancing的ss 共回答了19个问题 | 采纳率84.2%
你做的是dgge还是什么?
如果是dgge,上层胶最好用蛋白胶,梳子用短孔,效果会好一点
为什么用聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白变性
红尘有你30271年前3
言爱影 共回答了19个问题 | 采纳率94.7%
需要用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,一般是加入SDS,有多条肽链的蛋白质由于变性彼此分离,又因为不同的分子量在凝胶的迁移速度不同,因此形成不同的条带.
蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳实验时跑胶为什么要在低温下进行
dinera1年前5
云娘 共回答了19个问题 | 采纳率84.2%
① 聚丙烯酰胺凝胶电泳可分为变性及非变性蛋白电泳,一般用的较多的是变性电泳.蛋白在SDS及沸煮情况下已经是变性了.
② 电泳过程中由于电流关系,会产热.做非变性电泳时,一般要求冰浴反正蛋白热变性.变性电泳时也需要维持正常温度防止蛋白的扩散导致条带弥散.
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sds聚丙烯酰胺凝胶电泳 可以做定量分析不
情剑tt1年前2
陌上飞歌 共回答了24个问题 | 采纳率83.3%
半定量 互相比较的 完全定量的话就算拿已知浓度的标准品一起跑也算的很不准
聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理以及SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理,.
娜娜娜娜241年前1
yang82bo88 共回答了28个问题 | 采纳率92.9%
聚丙烯酰胺凝胶电泳(英语:polyacrylamide gelelectrophoresis,简称PAGE) 作用:用于分离蛋白质和寡核苷酸.聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(简称Acr)和交联剂N,N’一亚甲基双丙烯酰胺(简称Bis)在催化剂过硫酸铵(AP),N,N,N’,N’ 四甲基乙二胺(TEMED)作用下,聚合交联向成的具有网状立体结构的凝胶,并以此为支持物进行电泳.
聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离成若干条区带,如果分离纯化的样品中只含有同一种蛋白质,蛋白质样品电泳后,就应只分离出一条区带.聚丙烯酰胺凝胶为网状结构,具有分子筛效应.它有两种形式:非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)及SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE);非变性聚丙烯酰胺凝胶,在电泳的过程中,蛋白质能够保持完整状态,并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开.
SDS-PAGE仅根据蛋白质亚基分子量的不同就可以分开蛋白质.该技术最初由shapiro于1967年建立,他们发现在样品介质和丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂(SDS即十二烷基硫酸钠)后,蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小(可以忽略电荷因素).
SDS是一种阴离子表面活性剂能打断蛋白质的氢键和疏水键,并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物,使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷,掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异.因此,各种蛋白质 SDS复合物在电泳时的迁移率,不再受原有电荷和分子形状的影响,只是棒长的函数.这种电泳方法称为SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(简称SDS—PAGE).由于SDS PAGE可设法将电泳时蛋白质电荷差异这一因素除去或减小到可以忽略不计的程度,因此常用来鉴定蛋白质分离样品的纯化程度,如果被鉴定的蛋白质样品很纯,只含有一种具三级结构的蛋白质或含有相同分子量亚基的具四级结构的蛋白质,那么 SDS—PAGE后,就只出现一条蛋白质区带.SDS—PAGE可分为圆盘状和垂直板状、连续系统和不连续系统.本实验采用垂直板状不连续系统.所谓“不连续”是指电泳体系由两种或两种以上的缓冲液、pH和凝胶孔径等所组成.
聚丙烯酰胺凝胶电泳的问题?请问,聚丙烯酰胺凝胶电泳的高分辨率是因为哪三种效应呢?是道填空题谢谢啦
令狐愚1年前1
sterria 共回答了17个问题 | 采纳率88.2%
分子筛效应、电荷效应和浓缩效应