电泳 分离效应聚丙烯酰胺凝胶电泳

正常质粒是闭合的双链DNA.在电泳过程中可能使质粒发生开环,或者由开环解开螺旋变成线形.这三种形态电泳时的分离率不同,分离速度不同,分成三带.闭环（超螺旋）,开环,线形的螺旋率依次降低

大分子的蛋白质和淀粉都是胶体 氨基酸是小分子 所以不是胶体 而电泳是胶体的特有物理性质 蛋白质大分子因为能吸引电子 所以带负电
小弟这问题费了我很多时间 你就追加点分吧!

C.100个碱基

电泳的目的是看DNA片段的长度,而电泳上DNA移动速度除了受片段长度的影响还受到其结构的影响.
让DNA变性,所有样品都是线形DNA.这时所有电泳上所有DNA的移动速度只和其长度有关.

5.8S和5S很接近,所以合在一起了.
mRNA和tRNA含量很少,且不均一,所以不会显示出特征条带.
原核细胞的RNA电泳是：5S、16S、23S三条特征条带.
PS：典型的真核细胞中,rRNA占80%,tRNA占15%,mRNA占5%.

电泳——在外加电场的作用下,胶体的微粒在分散剂里向阴极（或阳极）作定向移动的现象.原因：胶粒带有电荷（胶粒表面积很大,吸附能力很强,能选择性地吸附溶液中的离子而带有电荷）.

博凌科为-为你可能是胶力有气泡.或者电压不够,还是哪个环节出了问题

变性电泳就是在loading buffer中加入了还原剂β-巯基乙醇,原理就是通过沸煮,利用还原剂的作用使蛋白结构间的二硫键打开,得到的是蛋白质的一级结构.非变性电泳就是不加入还原剂,这样可以蛋白的真实情况,比如蛋白间的聚集,二聚体,多聚体之类的.

28S、18S和5S是由一个转录本剪接的,在细胞内分子数相等.分子的nt数之比等于电泳时亮度之比.
28S≈3500nt
18S=1869nt
5S≈120nt
28S:18S≈2:1
18S:5S≈15:1
所以我认为,在点样量不足够大时,5S是看不清楚的.
在一般琼脂糖凝胶电泳时,RNA多少有些降解,5S往往掩盖在降解带中.所以我认为我们认为的"5S带",大多情况下是降解带.

caspase8的测量 是用WB方法吗?如果是的,理论上只要这几个组织都含有caspase8 WB肯定是做出来在同一个分子量上面的,也就是在同一条直线上.但是因为不同组织中含有的caspase8的含量可能不一样,所以亮度不一样,实际上叫灰度值可能更科学一下.
如果是同一直小鼠的话,那么基因,应该是mRNA吧,序列应该是一样的,那么应该也是在同一直线上,但是mRNA的表达水平虽然有差异,但是这种差异是非常小的,在凝胶上一般是反馈不出来的,一般是通过RT-PCR的方法来检测基因表达差异.

这个把PCR产物做一个测序就知道怎么回事了.到底是本来就应该是500, 还是扩增了其他的目标.

蛋白质

D中的蛋白质的盐析后,再加水后又会使析出的蛋白质溶解,是物理变化.而胶体的性质是考查化学变化.化学变化是不可逆的.

Fe（OH）3胶体带正电,在电流（电场）作用下,向阴极（负极）移动
As2S3带正电,··,向阳极（正极）移动.

根据蛋白质的等电点和分子量大小不同,每个蛋白质都有自己独有的等电点和分子量.对蛋白质进行分离.

胶体本身不带电,但胶粒带有电荷,胶粒具有很大的比表面积(比表面积=表面积/颗粒体积),因而有很强的吸附能力,使胶粒表面吸附溶液中的离子.这样胶粒就带有电荷.不同的胶粒吸附不同电荷的离子.一般说,金属氢氧化物、金属氧化物的胶粒吸附阳离子,胶粒带正电,非金属氧化物、金属硫化物的胶粒吸引阴离子,胶粒带负电.胶粒带有相同的电荷,互相排斥,所以胶粒不容易聚集,这是胶体保持稳定的重要原因.由于胶粒带有电荷,所以在外加电场的作用下,胶粒就会向某一极(阴极或阳极)作定向移动,这种运动现象叫电泳.

0.25％溴酚蓝
一般痕量即可,随便粘一点,有颜色就行.

如果检测特定基因的DNA序列突变程度,最好还是测序检测吧 如果是看抽出来的质粒什么的,可以用电泳做个预实验看一下.

一、可能是玻璃板没有加紧
二、浓缩胶没有凝固好,灌胶的问题
三、电压是否大了?我们常用浓缩胶80v,30min.
灌胶的问题可能性比较大,祝实验顺利

浓缩胶一般都是5%的,下面的是5ML的配方,其余的你可以自己算了
5ml
H2O 3.6
acrylamide mix（30%） 0.62
1M Tris(PH6.8) 0.63
10% SDS 0.05
10% AP 0.05
TEMED 0.005

什么marker啊,是DNA的电泳marker还是蛋白电泳的marker呢?
常用的DNA电泳marker：DL2000 plus的条带大小依次为5000、3000、2000、1000、750、500、250、100bp共8条带.DL2000的就是少了5000的那条,一共7条带.如果要是D1000的话,就是1000、700、500、400、300、200、100bp共6条,常用的就这些了.
常用的蛋白电泳marker：蛋白预染marker大小依次为170、130、95、72、55、43、34、26、17、10KDa,其中72是红色的那条,10是绿色的那条,共10条带.其他的也是视情况而定.
所以最好还是知道你的那个marker是什么类型的,或者知道你的marker是多少条带,条带的样式,然后你再去百度图片里边对应着你的样式去找一下就知道了.

不太清楚你用的是什么方法,不过用pH8.0的平衡酚（Phenol,equilibrated to pH 8.0）和酚-氯仿反复抽提效果还是不错的,一般后续试验,比如PCR或者连接都是可以的.不然可以考虑转膜的办法,可能可以更干净些?传统回收方法还是比较多的,

沉淀反应的种类有环状沉淀、絮状沉淀、荚膜膨胀、琼脂扩散及免疫电泳等.此外还有放射性同位素标记、酶标记等测定法.应该ABC都选.

是电泳结束后,把分离胶切下来放在平皿里,用考马斯亮蓝染液（0.05%）染色过夜,之后换脱色液（醋酸：乙醇：水 1：4：5）泡一段时间就能看到清晰的条带了~

co-ip跑出来的两个蛋白,如果大小不一样,肯定是两条带的,跑WB前会让蛋白质变性,他们之间的结合不存在了
跑出来粗是因为co-ip相当于一个纯化的过程,没有co-ip的样是检测一大堆蛋白里面你需要的蛋白的量,而co-ip是就这两个纯化的蛋白的样,一般都会粗很多的.

用这个方法复溶蛋白时很难完全溶解掉,样品处理很是个问题,应该是蛋白浓度不高.我做过类似的 也是用这个方法,电泳出条带很浅甚至没有,很郁闷.

不用固定,染色液中乙酸就有固定的作用,
染色液配方：
甲醇：水：乙酸=4.5:4.5:1或5:4:1

1.buffer配错了
2.电极松脱,没通电
3.胶片玻璃没夹好,buffer从玻璃背面往下漏.

三、影响电泳泳动度的因素：
1、颗粒性质：颗粒的直径、形状及所带静电荷量对泳动速度有较大影响.一般来说颗粒带净电荷量越多,或其形状越接近球形,在电场中的泳动速度就越快.反之则越慢.
2、电场强度：电场强度是指每一厘米的电位降.又称为电位梯度或电势梯度.它对泳动速度起着十分重要的作用.电场强度越高,带电颗粒的泳动速度越快.反之,则越慢.根据电场强度（电压的高低）大小,又可将电泳分为常压电泳（100－500V）和高压电泳（500－10000V）.前者电场强度为2－10伏特/厘米,后者为70－200伏特/厘米.常压电泳多用于分离大分子物质.高压电泳常需要冷却装置.高压电泳时间短,有时仅需数分钟,多用于分离小分子物质.
3、溶液的性质：主要是指电极溶液（缓冲溶液）和蛋白质样品溶液的pH值、离子强度和粘度等.
（1）pH值：溶液pH值决定带电颗粒的解离程度,也即决定其带净电荷的量.对蛋白质而言,溶液的pH值离其等电点越远,则其带净电荷量就越多,从而泳动速度就越快.反之,则越慢.当pH值等于其PI时,净电荷为0,μ也为0.因此电泳时应选择适宜的PH值,并需采用缓冲溶液,使溶液的pH值恒定.
（2）离子强度：溶液的离子强度一般在0.02－0.2之间时,电泳较合适.若离子强度过高,则会降低颗粒的泳动速度.其原因是,带电颗粒能把溶液中与其电荷相反的离子吸引在自己周围形成离子扩散层.若离子强度过低,则缓冲能力差,往往会因溶液PH值变化而影响泳动的速率.
离子强度的计算公式为：
I＝1/2∑mizi2=1/2(m1z12+m2z22+…mnzn2)
I－溶液的离子强度；
mi－离子的摩尔浓度；
zi－离子的价数
1,2,…n－代表各种离子.
（3）溶液粘度：
泳动度与溶液粘度是成反比关系.因此,粘度过大或过小,必然影响泳动度.
4、电渗：当支持物不是绝对惰性物质时,常常会有一些离子基团如羧基、磺酸基、羟基等吸附溶液中的正离子,使靠近支持物的溶液相对带电.在电场作用下,此溶液层会向负极移动.反之,若支持物的离子基团吸附溶液中的负离子,则溶液层会向正极移动.这种溶液层的泳动现象称为电渗.
因此,当颗粒的泳动方向与电渗方向一致时,则加快颗粒的泳动速度；当颗粒的泳动方向与电渗方向相反时,则降低颗粒的泳动速度.
A B
///////////////////// /////////////////////
－ － － － ++++++++++
－ ++++++++++ － － － － +
A支持物 B支持物
5、焦耳热：在电泳过程中,电流强度与释放出热量（Q）之间的关系可列成如下公式：
Q＝I2Rt
式中R为电阻；t为电泳时间；I为电流强度.公式表明,电泳过程中释放出的热量与电流强度的平方成正比.当电场强度或电极缓冲液中离子强度增高时,电流强度会随着增大.这不仅降低分辨率,而且在严重时会烧断滤纸或熔化琼脂糖凝胶支持物.
6、筛孔：支持物琼脂和聚丙烯酰胺凝胶都有大小不等的筛孔,在筛孔大的凝胶中溶质颗粒泳动速度快.反之,则泳动速度慢.
除上述影响泳动速度的因子外,温度和仪器装置等因子的影响也应考虑.

不对,电泳只是胶体稳定存在的一个原因 并不是主要原因 主要原因是因为胶体间带相同电荷的胶粒,相互排斥,所以能稳定存在

解题思路：电泳时阴极附近蓝色加深，说明Cu（OH）₂胶粒带正电荷．使胶体凝聚的方法有：①加电解质；⑧加带相反电荷的胶体；③加热．

①硫酸镁为电解质，能使Cu（OH）₂胶体发生聚沉，故①错误；
②硅酸胶体带负电，能使Cu（OH）₂胶体发生聚沉，故②错误；
③Fe（OH）₃胶体带正电，不能使Cu（OH）₂胶体发生聚沉，故③正确；
④葡萄糖溶液不带电荷不会使Cu（OH）₂胶体聚沉，故④正确；
故选C．

点评：
本题考点： 胶体的重要性质．

考点点评： 本题考查胶体的聚沉，难度不大，注意使胶体凝聚的方法有：①加电解质；⑧加带相反电荷的胶体；③加热．

一般来说是可以的,这样可以用三至四次,不过混合好后要放在低温,不要放常温,会长菌的.

影响的因素很多.主要的有：
1、 DNA的分子大小:
　　线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比,分子越大则所受阻力越大,迁移得越慢.
2、 琼脂糖浓度
　　一个给定大小的线状DNA分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同.分离小于0.5kb的DNA片段所需胶浓度是 1.2-1.5%,分离大于10kb的DNA分子所需胶浓度为0.3-0.7%,DNA片段大小间于两者之间则所需胶浓度为0.8-1.0%.
3、 DNA分子的构象
相同分子量的线状、开环和超螺旋DNA在琼脂糖凝胶中移动速度是不一样的,超螺旋DNA移动最快,而线状双链DNA移动最慢.
4、 电源电压
　　在低电压时,线状DNA片段的迁移速率与所加电压成正比.但是随着电场强度的增加,不同分子量的DNA片段的迁移率将以不同的幅度增长,片段越大,因场强升高引起的迁移率升高幅度也越大,因此电压增加,琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩小.要使大于2kb的DNA片段的分辨率达到最大,所加电压不得超过5v/cm.
5、嵌入染料的存在
　　荧光染料溴化乙啶用于检测琼脂糖凝胶中的DNA,染料会嵌入到堆积的碱基对之间并拉长线状和带缺口的环状DNA,使其刚性更强,还会使线状DNA迁移率降低 15％.
6、 离子强度影响
　　电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA的电泳迁移率.在没有离子存在时(如误用蒸馏水配制凝胶),电导率最小,DNA几乎不移动,在高离子强度的缓冲液中(如误加10×电泳缓冲液),则电导很高并明显产热,严重时会引起凝胶熔化或DNA变性.

电泳涂料标准名称：水性阳离子电沉积涂料.目前通用的涂料类型主要是根据涂料的中主要树脂成分来区分,最常用的是环氧改性聚氨酯水性树脂,丙烯酸改性聚氨酯水性树脂也有,但价格较贵.环氧类的一般都单独用做底涂层,丙烯酸类的一般都是用来做底面合一涂层.电泳涂料的主要成分一般是：水性树脂、颜填料、助溶剂、中和剂,以及抗氧化剂、抗沉降剂等辅助材料,剩余的是纯水.纯水的比例一般均值在60%左右（双组份电泳涂料）.

观察MARKER是否拖尾,如果也拖尾的话就是胶或缓冲液的问题了,换新缓冲液试试,还不行就换其它牌子的琼脂糖试试,我以前也拖尾后来换牌子就好了.
如果MARKER不拖尾那就是扩增有问题了

甲向阳极移动,乙不移动,丙向阴极移动.

倒胶时可以把小气泡赶走.fungixx(站内联系TA)浓度高了确实容易起泡多,尤其是劣质琼脂糖；
你用的浓度确实够高的,用不着那么高,2%的就行；zdfang83(站内联系TA)我煮沸的时候也有好多气泡,可是倒下去后就没有了呢,可能是和浓度有关系吧hxx7867(站内联系TA)如果实在要用那么高浓度的话,卧式制胶的话可以试试趁胶还热的时候,用小药勺之类的东西把起泡赶到边缘后挑起shuwenying(站内联系TA)刚加热完是有小气泡的,稍微静置一下,等气泡都消了,再倒进电泳槽
如果静置到有点凝固了还是有气泡的话,说明你加热的时间不够,没有完全融化.
加热完之后,应当先把瓶子拿起来到视线高度,轻轻摇一下,看看气泡下的液体是不是完全澄清透明了,像水一样是完全澄清的,如果有些折光或者看起来像浆糊一样,就再加热一会.完全融化的话,静置片刻,气泡是会消失的,一定要静置,不要总是拿起来摇晃瓶子就可以了.shuwenying(站内联系TA)对了,你的目的条带是多少bp的?真的一定要用3%的琼脂糖电泳?墨香若水(站内联系TA)我200bp的条带1%的胶.:rol:100v 25minpengl001(站内联系TA)you can use tips to remove the bubblerexue997(站内联系TA)加热时一定要完全融化,就是有大气泡从瓶底冒出来.然后倒胶之前一定要冷却到合适的温度,可以放在冷水里冰浴,而且边冷却边晃动,这时凝胶会冒很多气泡,那就不停的晃动,等到不冒气泡时就行了,从水里拿出来之后还会有一下小气泡,那就静置一下,很快气泡就没了,这时就可以倒胶了wangqk198738(站内联系TA)不用那么高浓度的胶,1%的都可以了.你灌胶的时候小心了,用一侧倒入,慢慢的流进去,有少量气泡用东西赶到一端或一侧挤破它.有时候胶粘稠了反而不好.:tiger28:jijiwaiwai6622(站内联系TA)如果你的目的条带只有几百bp话也不用3%的胶,我做的目的片段只有200bp就用1%的胶,效果很好.还有就是溶胶是要溶好,等有大泡产生时再停止加热,而且倒胶时动作要稳dy_414(站内联系TA)1.用1.5%的胶没问题

A、因电泳是胶体粒子在外电压的作用下的定向移动，不是电子在水中游，故A错误；
B、因悬浊液粒子不带电，则不具有电泳现象，故B错误；
C、胶体微粒具有较大的表面积，具有吸附性，吸附离子而带电，故在电场作用下可能产生电泳现象，故C正确；
D、氢氧化铁胶体粒子带正电，电泳时其胶体微粒向阴极移动，故D错误；
故选C．

不会,亮氨酸PI是5.9,精氨酸等电点在10左右,pH6.8的体系亮氨酸带负电精氨酸带正电,二者电泳方向相反

轴封的目的主要是对泵头密封、降温、降低机械磨损等.

核糖体RNA的含量最高,因此这三条带最明显,可是其实不只是这三条,可能你们实验条件有限,只看到3条了,我实验中有时候能看到很多条

不需要.使用也不用无菌.只要保证蛋白marker不被蛋白酶降解就行了.

看溴酚蓝作为指示,溴酚蓝大概跟250bp的条带位置差不多,如果你的条带长度短于250bp,那么溴酚蓝跑到胶的一半长度就可以拍照了；如果你的条带长度大于250bp,那么溴酚蓝跑到胶的三分之二或者四分之三位置就可以拍照了.主要看你经验,多跑几次就有感觉了.

既然问使用最简单的方法,就是不适用仪器或复杂的化学方法就可以容易判别的方法.答案中的四种方法,都可以鉴别电解质与胶体溶液,只有C丁达尔效应最简单,只用小手电筒即可.

原理是电泳材料比如DNA RNA 蛋白质带电荷 在电场中可以迁移 影响因素有材料中杂质 电压 电泳时间等 杂质可导致跑出来的条带无法分辨 电压不稳 过高过低 电泳时间过长 过短都会使跑出来的胶达不到理想效果

一般来说,提取质粒所用的试剂盒已经加入了RNase,所以电泳跑胶不会出现RNA条带.即使是采用的人工方法提取,也不可避免的空气中,汗液,唾液等中丰富的RNase的降解.此外,按照你的问题来看,你应该是再提取质粒,提取质粒然后电泳渴望观察到RNA的条带,殊不知质粒分子一般较大,其所用的琼脂糖胶浓度一般小于1%,这种浓度的胶是检测不出RNA条带的,细胞总RNA条带在跑胶时是以tRNA(约占细胞总RNA的80%)条带形式展现的.而tRNA电泳所用的胶浓度在2%左右,是不可以同质粒电泳同时在一块胶上检测的.

当然要点.否则没法确定片段大小的.

博凌科为-为你Mark没有跑开是不是胶的浓度太大了,或者延长一下电泳时间 http://www.***.com/

（一）DNA的凝胶电泳
凝胶电泳是分子克隆的中心技术之一.
1.琼脂糖凝胶用于分离大于200～1000bp的片段;操作简单、快速,且分离范围广,分辨率高
2.聚丙烯酰胺凝胶用于分离5－500bp的片段; 效果好、分辨率极高,相差1bp的DNA片断就能分开,能容纳相对大量的DNA ,用于核苷酸多态性的分析.
琼脂糖凝胶电泳的基本过程
材料：电泳缓冲液（常用TAE或TBE）、电泳级琼脂糖、溴化乙锭溶液（核酸显示剂）、加样缓冲液（保证核酸不在加样孔中扩散和用于电泳时间的指示系统）、水平凝胶电泳装置及制胶系统、直流电源系统.
制胶→放入电泳槽中并加入电泳缓冲液→取出梳子→将适量的核酸样品和上样缓冲液混合并上样于加样孔中→一定电压条件下电泳→合适的时间后停止电泳→取出凝胶进行溴化乙锭染色→凝胶成像系统紫外灯下观察并照相保存结果
注意：溴化乙锭具有致癌性,操作时要带手套
影响DNA在凝胶中迁移速率的因素：
1 DNA分子的大小
2 构象
3 凝胶浓度
4 电压
5 缓冲液
特殊的凝胶电泳
倒转电场凝胶电泳（FIGE）：用于分离分子量10～2000kb的DNA分子；
钳位均匀电场电泳（CHEF电泳）：可分离大于107bp的DNA分子
（二）RNA 电 泳
基本过程同DNA电泳一样,但应明确一点的是,因为RNA分子对RNA酶的作用非常敏感,因此必须用对RNA酶有抑制作用DEPC水来配置所有溶液,所有与RNA接触的仪器和装置都要严格处理以尽量减少RNA酶对样品的降解；另外,因为RNA分子有二、三级结构可以影响其电泳结果,因此电泳时应在变性剂存在下进行,常用的变性剂为甲醛和戊二醛.