重组质粒不进行双酶切直接跑胶,条带应该是多少?

caiye2022-10-04 11:39:541条回答

重组质粒不进行双酶切直接跑胶,条带应该是多少?
别人给的质粒,看他们的文献,双酶切之后有两条,分别是490bp(目的基因的大小)和5400bp.现在,我打算把他们寄来的质粒直接去跑1%的琼脂糖凝胶电泳,先不进行双酶切,用10000的marker够了吧,如果有条带的话,也是这两条吗?还是别的情况呢?另外,他寄来的质粒是200ng/ul的,但是 只有一点点的量大概5ul 我做了2次转化都没有跑出条带,实在是量不够啊.我想用最后的1ul稀释成15ul,取5ul去跑胶,剩下的10ul做最后的转化.这样浓度会有影响吗?会因为浓度不够跑不出来吗?

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江涵秋影 共回答了16个问题 | 采纳率93.8%
别人给的质粒,第一要做的是转化保种啊,别人给那点哪够分析.转化完了自己抽质粒分析.质粒直接跑电泳理论上是三条带,要想分析建议做单酶切再电泳.
1年前

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选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌繁殖快
lorenzofy1年前3
爱吃鲨鱼 共回答了24个问题 | 采纳率100%
细菌繁殖快、易培养、成本低、周期短只是我们选择细菌的原因之一.其他原因如 你所选用的质粒只能在其合适宿主中复制并增值,也因为重组质粒上的蛋白基因能在这个宿主中成功表达.比如,我们需要表达的是真核细胞的功能蛋白,在细菌中难以表达成功(常常形成无活性的包涵体)时,就必须选用 酵母细胞 作为受体菌株.其他的还有以动物细胞或者植物细胞作为受体细胞的,是不同要求和情况而定.但细菌是最理想的.
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2.在植物组织培养技术中,细胞发生基因突变后,植物的性状可稳定遗传吗?
3.是不是只有生殖细胞或者受精卵发生突变才可以遗传?
半山云客1年前4
fklp 共回答了18个问题 | 采纳率100%
首先,基因突变都是可遗传变异
1.重组质粒导入后能否表到性状和遗传性状还有其他条件,诸如重组质粒结构是否正确等等,比如启动子、终止子、复制原点等等
2.植物的性状只能通过无性生殖“稳定”遗传,一般基因突变产生的都是杂合子,有性生殖的话一般都会发生性状分离
3.1和2回答了你的第三个问题
】目的基因的运载体是重组质粒,受体细胞是农杆菌.这句话对吗?
poertipowtipoei1年前2
tt者67 共回答了25个问题 | 采纳率92%
受体细胞是植物细胞,农杆菌只是让这个目的基因整合到植物基因组上的一个途径而已.除了农杆菌还可以用显微注射或者基因枪.
问个重组质粒的电泳图和重组质粒pcr产物的电泳图的基本问题
问个重组质粒的电泳图和重组质粒pcr产物的电泳图的基本问题
很小白,我不懂重组质粒的电泳图是如何验证重组质粒成功构建了呢,因为跑出来的大小与重组质粒应有的大小一致?还有不明白重组质粒pcr后的电泳图到底是目的基因的电泳图呢还是克隆载体的电泳图,是特异性PCR么?.实际上完全不明白为什么重组质粒pcr后又电泳一下的意义是什么.
衢州小狂1年前1
sql444 共回答了11个问题 | 采纳率90.9%
首先,重组后的质粒肯定比载体大,可以通过电泳一定的区分,通过这个对比的话最好是酶切过后的
其次,因为你重组的片段是通过PCR扩增出来的,所以你重组要是成功了,那么就可以用相同的引物扩增出来,所以PCR做完了过后,电泳时会出现和目的条带一样大的条带,反之则不成功
显然这两种方法第二种最靠谱,第一种情况由于质粒较大,要是插入片段太小的话,可能分的不是很清楚,最后电泳的意义就在于看插入片段是否正确,并且理论上看是不是正确的插入方向
将目的基因导入大肠杆菌,有可能重组质粒进入大肠杆菌但未与大肠杆菌质粒结合么?
福临君子1年前2
老鼠爱上猫s 共回答了24个问题 | 采纳率100%
重组质粒作为一个单独的质粒进入大肠杆菌发挥作用,不需要与ecoli体内原有的质粒结合……
为什么目的基因都一定有质粒与它结合,重组质粒的质粒有很多类型吗?
小小亲亲1年前1
殳锐 共回答了18个问题 | 采纳率94.4%
目的基因与一定的质粒载体结合,是为了对目的基因的进一步研究.单独的外源目的基因不能在生物体内表达,必须借助载体上的其他基因序列使其可能在生物体内起作用.
质粒载体有很多类型:高拷贝数的质粒,低拷贝数的质粒,表达型质粒等.
要克隆一段基因,什么情况用PCR,什么情况用重组质粒分子克隆法?
风信子06051年前6
sarah181 共回答了16个问题 | 采纳率93.8%
长片段用重组质粒克隆法.因为一般PCR无法扩增大至8Kb以上的片段.
目的基因与运载体重组后,使用同一种限制酶可以切割重组质粒吗
yyes20081年前5
爱上天使的泪 共回答了16个问题 | 采纳率81.3%
是的,必须的.因为同种限制酶的碱基序列相同,目的基因与运载体重组后必须用同种限制酶,它们的碱基序列才会相同.
关于质粒的叙述错误的是(多选)关于质粒的叙述正确的是A质粒是能够自我复制的环状DNA分子B治理是唯一的载体C重组质粒是目
关于质粒的叙述错误的是(多选)
关于质粒的叙述正确的是
A质粒是能够自我复制的环状DNA分子
B治理是唯一的载体
C重组质粒是目的的基因
D之立刻在宿主外单独复制
943030131年前2
sheyang062 共回答了18个问题 | 采纳率77.8%
选择BD
B,质粒不是唯一的载体,噬菌体和动植物病毒也可作载体
D,质粒只能在宿主细胞内复制,因为复制需要借用宿主细胞的原料和各种酶.
“每一个重组质粒至少含有一个限制性核酸内切酶识别位点”是对的么?
“每一个重组质粒至少含有一个限制性核酸内切酶识别位点”是对的么?
如果目的基因和质粒用的是不同的限制性核酸内切酶呢?(连接酶不需要识别特定的核苷酸序列,只要粘性末端相同就能连接)
yexing051年前3
良家妇女秦香莲 共回答了20个问题 | 采纳率85%
这话是错的,当切割质粒和目的基因用的是不同的限制性核酸内切酶时,原来的序列将被破坏.还有些限制性酶可以切出平末端,也可以使目的基因和质粒连接 ,所以重组的质粒将没有原来的序列了,也就无法再被限制性核酸内切酶所识别
重组质粒构建 一个DNA为什么要接入两个不同的载体?
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重组质粒构建方法
将从荧光假单胞菌2P24基因组中克隆的
phlD基因与载体pMDl8一T相连,构建重组质粒
pMDl8一T::phlD,并将该质粒上的phlD切下与
载体pET28a(+)相连,构建pET28a(+)::phlD,
转化E.coli BL21(DE3).用DNA酶切图谱、DNA
测序等方法筛选阳性克隆子.
与一个载体连接之后 又重新切下来再接到另外个载体中 这是为什么?
1017181年前1
行云留水 共回答了15个问题 | 采纳率100%
哈哈,我就是做这个的,因为基因直接克隆出来,酶切得不太好,而且也不容易连到PET上面,而PMD是克隆载体,上面添加了多聚T,PCR的产物末端通常会多P出几个多聚A,A和T互补,再用连接液连接,就非常容易连上,PMD是高拷贝质粒,将会复制出很多质粒,再酶切提出里面的目的片段,连到PET上就相对容易了
重组质粒表达蛋白时质粒上的基因是否也表达了呢?所说的目的蛋白就是,目的基因表达的蛋白吗?
小短裤井井1年前1
上祺缘 共回答了18个问题 | 采纳率83.3%
质粒存在细菌和真菌里,当提到取质粒基因用DNA剪切酶作用后得到的DNA序列段再与目的基因与DNA黏合酶作用下得到目的质粒基因,培养后植入发酵菌细胞中.发酵后就可以提取产物.
质粒上原有的基因也会表达,重组后的基因也会表达,目的蛋白和原有质粒基因蛋白、目的基因质粒基因蛋白.三者混合在一起,要进行筛选(筛选方法自然很多)得到目的蛋白质.
重组质粒导入大肠杆菌的目的是?
lsq11261年前1
写轮眼卡卡西 共回答了17个问题 | 采纳率94.1%
目的是表达目的基因,获得代谢产物等.
重组质粒在受体细胞中的位置是在细胞质中还是在细胞核中.有性生殖产生的配子中一定还有导入的目的基因吗
ruoshui03691年前5
牛奶柠檬 共回答了19个问题 | 采纳率100%
细胞质中,为受体细胞核外的DNA片段.
有性生殖产生的配子一定还有导入的目的基因,成功构建粒(含有GFP荧光标记)后转染细胞,检测目的基因mRNA显著表达增加,应用荧光双标记检测可发现:质粒转染成功(GFP荧光标记阳性)的细胞有目的蛋白的表达显色.
高中生物目的基因与质粒结合发生了剪辑互补配对,那么重组质粒导入受体细胞有没有发生碱基互补配对那?
高中生物目的基因与质粒结合发生了剪辑互补配对,那么重组质粒导入受体细胞有没有发生碱基互补配对那?
我的参考资料说没有,但我觉得有重组质粒与受体细胞的染色体结合,不就需要碱基互补配对,
还有,为什么通过转基因技术,可以使人的糖蛋白基因表达的受体细胞是酵母菌,而不能是其他?
用大肠杆菌做受体细胞的都有些什么那?能不能举几个例子
1973hong1年前1
辰苑 共回答了14个问题 | 采纳率92.9%
重组质粒导入受体细胞应该仅限于导入过程,而后事如何就不管了.
基因工程中重组质粒怎么形成
彬莉1年前3
寒风啸冷月 共回答了24个问题 | 采纳率87.5%
质粒是目的基因的运载体
在用鸟枪法或人工合成法提取目的基因后
用限制性内切酶将质粒切开,使目的基因与切开的质粒具有相同的粘性末端
他们的碱基恰好配对,氢键自动结合
再用DNA连接酶将切口补上
重组质粒就形成了.
如何将目的基因导入农杆菌就是重组质粒是怎么进入的
继续吹风1年前1
mm杂草 共回答了16个问题 | 采纳率87.5%
用Ca2+(钙离子)处理细菌使之成为感受态后就可以吸收重组质粒了.