层析法分离FE3+和CU2+的实验中,若滤纸未经氨熏,则看到滤纸表面

用纸层析法提取叶绿体中色素,对吗?为什么?
不对.同学们注意,"提取"和"分离"是两回事.
叶绿体中色素是有机物,应用有机溶剂来提取,如丙酮或酒精.
用纸层析法是分离叶绿体中色素.原因是不同色素在层析夜中的溶解度不同,溶解度高的扩散快,反之则慢.这样色素就在扩散过程中分离开了,从而从颜色来却定各是什么色素.

二者均不能.需要考虑纯化的原理.柱层析法的原理是根据蛋白质的分子量来进行纯化,所以可能存在和目的蛋白相同分子量的杂蛋白.（不考虑蛋白之间的相互作用）证明方法：可以用某种特定的蛋白酶去切蛋白质样品.切完后再过柱子.如果还有原来的峰则证明有杂蛋白存在.
第二种方法也类似.离子交换层析的原理是根据蛋白质的等电点来纯化的.
电泳法也是根据分子量来判断.超速离心是根据沉降系数来分离的.这些都没办法彻底排除杂蛋白的影响.要排除得去考虑蛋白质的氨基酸序列.这样才能彻底排除干扰.

解题思路：分离色素原理：各色素随层析液在滤纸上扩散速度不同，从而分离色素．溶解度大，扩散速度快；溶解度小，扩散速度慢．滤纸条从上到下依次是：胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b．

各色素随层析液在滤纸上扩散速度不同，从而分离色素，结果如图：

其中胡萝卜素溶解度大，扩散速度快；叶绿素b溶解度最小，扩散速度最慢．
故选：B．

点评：
本题考点： 叶绿体色素的提取和分离实验．

考点点评： 本题考查色素的提取和分离，意在考查学生的识记和理解能力，难度不大．

从上到下分别为:
胡萝卜素 橙黄色
叶黄素 黄色
叶绿素a 蓝绿色
叶绿素b 黄绿色

每一个色素的溶解度是有一定范围的,并且差距都不是太大,并且实验存在误差误差,所以会有一定的重叠.

我觉的因为铅笔不会溶于实验用的溶剂,不会影响结果,能出现比较清晰的色带

流动相识有机溶剂,所以疏水性强的电泳快.F带苯环,疏水性最强.苏氨酸带羟基,亲水性最强,丙氨酸居中.

在试剂瓶口,氨气与金属离子反应生成有色的配合物---显色反应.为了产生氨气,在浓氨水中加入氢氧化钠.这是因为下列平衡存在：
NH3 + H2O NH4+ + OH-
根据勒夏特勒原理,增加氢氧根离子浓度使平衡向生成NH3的方向移动.

我觉得会影响Rf值,因为Rf受到氨基酸的极性的影响,而改变展层剂的酸碱性就会改变氨基酸的带电状况,从而影响极性.所以,会造成Rf值变化

纸层析法又称纸色谱法.以纸为载体的色谱法.固定相一般为纸纤维上吸附的水分,流动相为不与水相溶的有机溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相,如缓冲液,甲酰胺等.将试样点在纸条的一端,然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开.当组分移动一定距离后,各组分移动距离不同,最后形成互相分离的斑点.
上升纸层析法相信如果楼主上了生物就会做了,叶绿素的分离用的就是上升纸层析法……就是把流动相（叶子的汁）涂成一条直线,然后把定性试纸一部分插入层析液中,让层析液利用毛细现象爬上来,然后分层
径向层析法是把流动相涂成一个圆,然后把层析液点在中间,然后层析液扩散出去的时候形成大小不一,颜色不一的圆,即色环.

为防止水解,饱和FeCl3和CuSO4可加少量硝酸或H2SO4酸化,不影响实验效果,但一般都用硫酸或盐酸

这个不是提取叶绿体色素,这个是分离色素

解题思路：叶绿体色素不溶于水，而液泡中的色素能溶于水，所以用水为层析液可以将它们分离．叶绿素中的色素能溶于有机溶剂，且在以有机溶剂的层析液中的溶解度不同，溶解度越大，随着层析液扩散的速度越快．

A、叶绿体色素不溶于水，而液泡中的色素能溶于水，所以用水为层析液可以将它们分离，故A正确；
B、葡萄糖和果糖均能溶于水中，所以用水不能将两者分离，故B错误；
C、叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水，所以用水为层析液时，不能将它们分离，故C错误；
D、雄性激素和雌性激素属于脂质，均不溶于水，所以用水不能将两者分离，故D错误；
故选A．

点评：
本题考点： 叶绿体色素的提取和分离实验．

考点点评： 本题考查绿叶中色素的提取和分离的原理，意在考查考生的识记能力和理解所学知识要点的能力；能独立完成“生物知识内容表”所列的生物实验，包括理解实验目的、原理、方法和操作步骤．

是……
这个是实验化学上面的实验吧……P8的
经过查看实验仪器,只发现大试管（用来做层析的……）
没有发现其他的试管等等
所以认为楼主说的是

你好!楼主!
层析是从下往上析的.在滤纸条 上有４条明显的不同颜色的色素带,从上往下依次 为橙黄色（胡萝ｂ素）、黄色（叶黄素）、蓝绿色（叶 绿素ａ）、黄绿色（叶绿素ｂ）
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不见得,只要能展开,几种都可以分离

层析法又称纸色谱法.以纸为载体的色谱法.固定相一般为纸纤维上吸附的水分,流动相为不与水相溶的有机溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相,如缓冲液,甲酰胺等.将试样点在纸条的一端,然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开.当组分移动一定距离后,各组分移动距离不同,最后形成互相分离的斑点.将纸取出,待溶剂挥发后,用显色剂或其他适宜方法确定斑点位置.根据组分移动距离（Rf值）与已知样比较,进行定性.用斑点扫描仪或将组分点取下,以溶剂溶出组分,用适宜方法定量（如光度法、比色法等）.在环境分析测试中,有时用纸层析法分离试样组分,它用于一些精度不高的分析,如3,4-苯并芘.但不如GC、HPLC应用普遍.

插速离心法是 利 用 细胞器密度不同来分离细胞的各种细胞器也可以分离其他物质 同位素标记是验证细胞与外界的物质交换 层析法是用来分离叶绿素的 胞吐,胞吞是用来细胞物质交换的一种方法同时说明细胞膜是流动的

我记得纸层析是根据氨基酸的扩散速率进行试验的吧..
定性也许可以用已知的去测定待测液的纸面扩散长度?
仅供参考...

离子交换层析
Tina 发表于 2006-2-21 12:21:00
材料与仪器
DEAE-32纤维素,pH8.0 0.01 mol/L Tris-HCl,工程菌破碎离心后的上清液；
层析柱
二、 方法与步骤
1） 装柱：
用水清洗层析柱,柱内留存水距底部约1cm,加入18ml介质（凝胶溶液）.
2） 平衡：
加0.01M,PH8.0,tris-HCl缓冲液,直至流出液PH与缓冲液一致.
3） 上样：
用量筒量出上清液体积,再加入等体积缓冲液混合,取EP管留1.5ml.待柱中水流出,至刚好覆盖凝胶表面,靠璧缓慢加样.
4) 用50ml缓冲液洗涤,用EP管随机收集样品穿出液和洗涤穿出液.
5) 洗脱：
将梯度洗涤仪和层析柱连接,洗脱瓶A（混合器）加200µl缓冲液,开口打开至两瓶液面相平,相通管道出无气泡,关闭连接,A中加入6gNaCl溶解,把装置放在梯度混合仪上,开动搅拌器开关,打开A和B的连接通道,层析柱下端连收集器,收集洗脱流出液.
6） 控制流速,约4min/管,2-3ml/管.
分子筛的是凝胶层析
Sephadex G-100凝胶层析
Tina 发表于 2006-2-21 12:27:00
材料与仪器
Sephadex G-100,0.5 mol/L pH8.0 Tris-HCl,浓缩液
层析柱
二、 方法与步骤
1） Sephadex G-100 凝胶预处理
a) 100ml烧杯,称取5克sephadex G-100,加入50ml去离子水,浸泡溶胀24小时.
b) 倾去sephadex G-100溶胀后凝胶上层的水,加入凝胶等体积的1.0 mol/L NaOH液处理,用搅棒轻轻搅动,并浸泡1小时处理后倾去.用去离子水洗涤.洗涤过程中,用倾去法除去细颗粒.其方法是用搅棒将凝胶搅匀（注意不要过分用力搅拌,以防止颗粒破碎）,放置数分钟,将未沉淀的细颗粒随上层水倒掉.浮选3-5次,直至上层没有细颗粒为止,再浸泡水洗至PH中性.
c) 将Sephadex G-100凝胶水溶液盛放于抽滤瓶中,用洗耳球塞住杯口,减压抽气30分钟,除去凝胶溶液内的气泡,将脱气后的凝胶溶液轻轻倒入烧杯中,其中盛有1/2去离子水.
2) 装柱
a) 层析柱(1.0Î50cm)用水清洗干净,柱的上、下端联接塑料管接上小乳胶管,装上螺旋夹.将层析柱垂直装好.校直过程用下端绑有钥匙的绳子挂于铁架的不同位置,从多角度校正使柱垂直.打开柱上端口,从柱底下出口管朝柱内注入水,使柱底全部充满水而不留气泡,关闭柱出口.最终柱内留存有2 cm的水.从出口处接上一根直径2 mm细塑管,塑管另一端固定在柱的上端部位.
b) 搅动凝胶溶液（切勿搅动太快,以免空气再逸入）,使形成均一的薄胶浆,并立即沿玻棒倒入层析管内,让加入的凝胶在柱内自然沉降,待柱底面上积起约1-2 cm的凝胶床后,打开柱出口水流.随着柱内水的流出,上面不断加入凝胶液,使形成的凝胶床面上有凝胶连续下降（如果凝胶床面上不再有凝胶颗粒下降,应该用搅棒均匀地将凝胶床搅起数厘米高,然后再加凝胶,不然就会形成界面,影响层析效果）.
c) 凝胶沉积到柱内凝胶是否均匀,有否“纹路”或气泡.若层析柱不均一,必须重新装柱.
3） 平衡
柱装好后,使层析床稳定15-20分钟,然后连接洗脱瓶出口和层析柱顶端,用3-5倍体积地缓冲液平衡层析柱.平衡过程中控制上柱缓冲液地进柱操作压保持恒定.保持流速每滴/10秒.直至流出液的PH与上柱缓冲液完全相同.
4） 样品洗脱
a) 上样准备：
i) 上样前打开层析柱上端,先检查凝胶床界面是否平整,如果倾斜不平整,可用玻棒将凝胶床界面轻轻搅起后,再使凝胶自然沉降,形成平整状态的凝胶床界面.用毛细吸管小心吸去大部分清液,然后让液面自然下降,直至几乎露出凝胶床界面.
ii) 样品放入高速离心机,12000r/min、离心5 min.
iii) 上样前吸取50µl样品于EP管中,以备走电泳.
b) 样品上样：
i) 将样品由玻棒引流沿管壁加入到凝胶床面上,注意不要将床面凝胶冲起.同时打开层析柱下面流出液开关（控制流速1滴/20秒）,保持层析柱下面流出滴速与上样的滴速一致,控制凝胶床界面不能脱水,并控制样品区带尽量狭窄.
ii) 当1.5ml样品全部加入后,用 1-2 ml的0.5mol/L PH8.0 Tris-HCl洗脱液同上样时一样地保持层析柱下面流出滴速与上样的滴速一致以控制凝胶床界面不能脱水,小心清洗凝胶床界面表面,使黏附着的样品全部洗入凝胶床.
iii) 然后开始控制上样的滴速大于层析柱下面流出滴速,使几乎与凝胶床界面相平的洗脱液液面慢慢提高至凝胶床界面高出2cm左右,封闭层析柱上端.
iv) 保持层析柱上柱洗脱液入口处与层析柱下面流出处有一定势压.控制上柱缓冲液的进柱操作压保持恒定.
c) 洗脱：
用0.1 mol/L PH8.0 Tris-HCl 缓冲液洗脱,用部分收集器收集,4分钟/管（约2-3ml/管）,收集约1-30管.
5） 酶活、酶浓度测定,参见2.6.2,2.6.3
6） 最高酶活收集管洗脱液留50µl,以备走电泳.
7） 将酶活较高的收集液10~14管合并,测定总体积为7.1 ml,精确测定酶活性.并用考马思亮蓝测定蛋白浓度.测酶活时体系稀释了200倍,定蛋白时无稀释.

普通琼脂糖电泳就可以啊.
琼脂糖凝胶电泳法
操作法 (1)制胶 取琼脂糖约0.2g,加水10ml,置水浴中加热使溶胀完全,加温热的醋酸－锂盐缓冲液(pH3.0)10ml,混匀,趁热将胶液涂布于大小适宜(2.5cm×7.5cm 或4cm×9cm)的玻板上,厚度约3mm,静置,待凝胶结成无气泡的均匀薄层,即得. (2) 标准品溶液及供试品溶液的制备 照各药品项下规定配制. (3) 点样与电泳 在电泳槽内加入醋酸－锂盐缓冲液(pH3.0),将凝胶板置于电泳槽架上,经滤纸桥浸入缓冲液.于凝胶板负极端分别点样1μl,立即接通电源,在电压梯度约30V/cm、电流强度1～2mA/cm的条件下,电泳约20分钟,关闭电源. (4) 染色与脱色 取下凝胶板,用甲苯胺蓝溶液染色,用水洗去多余的染色液至背景无色为止.

防止色素直接溶解到烧杯内的层析液中.
（我们是将滤纸条放入装有层析液的烧杯中,让滤纸条上的叶绿素细线随着层析液的扩散而扩散,从而使滤纸条显示色素带.如果细线触及层析液,色素就直接溶解到烧杯内的层析液中,滤纸条上就没有色素带了)

可能原因有：
1、研磨不充分,色素少.
2、没有加入碳酸钙,叶绿素被破坏.
3、提取的溶剂无水乙醇太多,色素被稀释.
4、画滤液细线时,没有多重复画几次,色素不够
5、层析液没过滤液细线,色素被溶解.

你们对于薄层层析TLC的化学概念都没有搞懂,如何能完全搞懂呢?
作为化学论坛的友人,我来解释一些吧
其实你们做的实验,是薄层层析的一种,属于纸层析法.TLC的基本概念就是通过“吸附相的吸附能力”把不同组分的混合物分离,由于不同组分的化合物,本身的化学分子极性是有差异的,因此,在吸附相上面的吸附能力是有差异的.
而你们所用的下面的有机溶剂,实际上化学上成为“展开剂”,也成为“流动相”和吸附相相对应.流动相就是同来洗脱不同组分物质的,由于物质极性的不同,其在不同的有机溶剂当中的溶解度不同,因此可以通过这个“吸附－洗脱”原理,将不同的化学组分分离!这个就是最最经典的“薄层层析法,也成为色谱法,其中的色就是指一开始人们分离出来的不同颜色条,也就是你们现在说得绿色物质”
因此,其实颜色条的上下位置,或者说颜色条的解吸附能力才是判别该物质组分的一种依据,而颜色条的颜色深浅以及颜色条的宽窄则是判别该物质组分浓度一种依据,这个不能搞错.
另外,薄层层析现今已经发展很快,现在纸层析法已经不用了,主要是用硅胶层析法.我们可以通过极性不同,直接判定组分的分子结构,例如：羧基和羟基,醛基和氨基等等,通过调节流动相的极性来分析成分.