细胞培养配PBS,KH2PO4、磷酸氢二钠（Na2HPO4.2H2O）、Kcl、Nacl,各个用量是多少?

培养液里面本来就有酸碱指示剂的嘛,消化酶消化细胞后肯定会引起细胞环境的变化,从而引起细胞培养液颜色的变化,但是变化是很微弱的,也亏你能看出来

选 A
细胞融合,是两个完整的细胞直接融合.多莉培育过程,没有使用这个技术.
A细胞核 + B细胞质 → 重组细胞 → 体外培养 → C羊子宫
没有用到细胞融合技术.

1.要保证无菌,包括无菌操作,无菌环境.枪头等要及时灭菌,培养瓶,移液管最好使用一次性的,如果你的细胞比较不好养,最好使用一次性的.
2.要传代的时候细胞传代的数量不能太少,否则细胞不容易养活.另外,传代不要过度频繁,即使是肿瘤细胞.
3.不要经常用胰酶消化细胞,且消化时间不要过长.
4.根据细胞生长情况,即使更换新鲜培养基.
5.血清一般要冻存在-20摄氏度,用的时候在4摄氏度融化,不要反复冻存,最好用10ml的离心管分装使用.

细胞培养首先分为原代培养和传代培养.
原代培养需要从组织中消化、分离、纯化出单细胞,然后继续进行传代、冻存；
传代培养首先：
细胞复苏:
1.应遵守慢冻快融的原则.先将水温锅调至37-38度,取出冻存的细胞迅速放入后交细胞面浸至水面以下不断摇动至融化.
2.在无菌台内将完全培养基加入培养瓶内,然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞,置培养瓶内轻轻摇晃,使细胞均匀后置培养箱内培养,24h后换液；也可复苏当时离心（1000rpm 5min左右）后,完全培养基重悬培养,适时换液.
细胞传代:
1.贴壁细胞:
对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基,吸的越干净越好,以免中和后加入的消化液,使强度减弱.PBS清洗2-3次,去除血清和死细胞,50ml培养瓶加入消化液约0.6ml,按此比例进行消化,(根据配制强度经验),晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2分钟,镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后,轻轻振动瓶底使细胞全部脱落,加入2-3ml完全培养基后,轻轻吹打,使细胞基本成单个悬浮,然后收集离心（1000rpm 5min左右）,新鲜培养基重悬沉淀,加入完全培养基后继续培养或实验.
2.悬浮细胞:
一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内,加入完全培养基继续培养,如要高浓度或需更换新培养基,可先离心（1000rpm,5min左右）后加入完全培养基,轻轻吹匀后,分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养.
具体更详细的你还是看看细胞培养的专业书吧!

“细胞间隙有 很多在动的小东西”可能是黑胶虫,是血清里的.可以把血清放在培养箱培养两天,用400倍观察下是否有会动的黑黑的（但不大像杆状）,如有则是黑胶虫.如果有这种情况出现就要换血清了,据说最好的是北美血清但比较贵,澳洲血清也不错的,但是我们这边实验室也有用澳洲血清也有少量黑胶虫出现,也没办法.
培养基应该不大容易出问题的,双抗一般都是用青链的,当然也有可能你的细胞原本就有污染的.支原体污染用显微镜是看不出来的.

C

楼上说的有理,看情况的.不过一般T25用1ml,T75用2-3ml,T150用5ml,T300用8ml

细胞培养是要适宜的pH的,一般培养基中会加入Na2HCO3,根据培养箱中CO2浓度不同达到适宜的pH.如果只是培养成纤维类等比较好养的细胞,而且只是培养2~3天观察生长,不做后续实验的话,在普通培养箱中凑合一下也可以.但是长期培养的话,细胞状态慢慢就不好了,如果是比较娇贵的细胞,有可能根本养不了.

博凌科为过滤灭菌的有：培养基,超纯水,有些酶也得过滤.当然大多是液体且不易高温失活的东西.高温灭菌的有：解剖器具（解剖剪,尖嘴镊子,平嘴镊子,解剖刀等）,大小培养皿,枪头,装培养基的瓶子,滤器等.有时高温灭菌制无菌水.反正拿进培养间的,尤其拿进操作台的能灭就灭,污染了就不好说了.

1、胚胎干细胞可以从囊胚的（内细胞团）或原始生殖腺中分离出来.将该细胞培养在添加了抑制因子的培养液中,是为了能够维持其（不分化）状态,以保持干细胞的全能性.
2、可以使用（抗原-抗体杂交）方法在蛋白质水平上鉴定小鼠是否存在绿色荧光蛋白.

MRC-5细胞,为人胚胎成纤维细胞,培养液为10%胎牛血清的 IMEM or DMEM 加1%非必须氨基酸.我用含非必须氨基酸的MEM 培养,效果不错.
这个细胞生长很快,两天传代一次,形态较一般的成纤维细胞胖一点.
消化很容易,我们用0.3%的胰酶,37度消化2分钟,细胞就收缩变圆一点,倒掉胰酶,加入培养液吹打重悬,分瓶即可.

可以用PBS配,也可用无血清培养及配置.
称取0.25g胰酶,加入到100mlPBS或无血清培养集中,搅拌混匀,避免出现泡沫（损坏蛋白),过滤除菌,即可用,注意不要反复冻融,也不要放4度或常温一周,否则胰酶会失活.
我用PBS配的,挺好用.

MDCK细胞可购买塞默飞的DMEM培养（MEM或许也可以）,不过MDCK细胞培养时容易产生细胞碎片,关键是看你的MDCK细胞本身的活力如何,如果本身活力不好的话细胞碎片就多,影响细胞生长,如果较多碎片可以消化后,轻微离心甩掉碎片后再继续传代.
培养条件：37度,5％CO2浓度
消化：MDCK细胞较难消化,消化时加入胰酶后细胞可放在37度,并时时进行显微镜观察消化情况.
CPE：判定不太好说,我觉得主观因素较强,我是看病变细胞大约占总细胞的百分之几,差不多就行,如果要精确的病毒滴度你可以测一下他的CCID50

(1)相互接触 接触抑制 胰蛋白酶
(2)抗生素 营养 温度和pH 气体环境
(3)血清可以补充合成培养基中所缺乏的物质
(4)干扰素

组织培养是这样的：从动物身上取下所要培养的组织块,将其通过酶解法或者机械研磨法,使其解离成单个细胞,加入培养液,放入培养瓶培养；或者将组织剪成很细小的小块,加上培养液放入培养瓶培养,这些小组织块会向四周生成生长晕,再用酶使其分散为单个细胞,再细胞培养.胚胎干细胞具有全能性,有分化能力,基因控制其分化

1.体细胞杂交技术是一个完整的过程,包括细胞培养,融合,筛选等.细胞培养是一种方式.
2.对病毒灭活是指对病毒的蛋白质外壳上的抗原决定簇进行加工改造,使其毒性大大减弱,从而刺激机体免疫系统的应答,诱导B细胞分化记忆细胞.这样当有毒性的同种病毒侵入时,记忆细胞就会立即进行免疫反应.诱导融合就是在这个基础上进行的.如果是植物病毒的话,鉴于植物体不具有动物那样的免疫系统,无法进行灭活,即使灭活了,植物体也无法进行免疫应答,自然不会融合.

新的橡胶制品洗涤方法：0.5mol/L NaOH煮沸15分钟,流水冲洗,0.5mol/L HCl煮沸15分钟,流水冲洗,自来水煮沸2次,蒸馏水煮沸20分钟,50℃烤干备用.

in vitro culture,体外培养.

应该是,我了解的一些细胞传的代数多了就会出现浑浊,不一定是你操作的问题.至于原因有的说是衣原体污染,但是我在网上找的原因感觉是那种所谓的胶虫...
胎牛血清少一点,试试...

细胞培养需要的条件比较高,任何一步出问题都会影响成功.比如灭菌不好会导致细胞污染,培养基配制要适合细胞的生长条件,给细胞提高足够的营养物质及所需的生长因子,此外还有条件的控制,ph值,二氧化碳浓度,温度,以及冻存和解冻等都有很多的关键步骤.

来自自身的细胞,不被自身识别为抗原,不产生抗体

和胰酶的颜色没关系,因为配试剂是用培养液,其中含有的指示剂有颜色,指示溶液的酸碱度

100 U/mL penicillin ,100 x01g/mL streptomycin
一般细胞培养都是买的双抗储存液吧,上面会写着X100 就是稀释100倍加入培养液呗,比如500ml培养液,加50mlFBS,5ml双抗.

变黄是酸了,应该加大用量,或者增加一点缓冲剂浓度
浑浊,没有污染吧?或者传代的时候破裂细胞太多

解题思路：本题考查ADP与ATP的转化过程，ATP是直接的能源物质，ATP在细胞中的含量不大，依赖于ADP与ATP的相互转化过程维持细胞中ATP含量的相对稳定，为细胞的生命活动提供能量．

由题意可知，在加入³²P标记的磷酸分子的细胞培养液中培养细胞，短时间内分离出细胞的ATP，发现其含量变化不大，但部分ATP的末端P已带上放射性标记，折说明这段时间内，既有ATP的水解，也有ATP的合成．ATP水解与合成达到相对稳定的状态．
①实验发现ATP的末端P带上放射性标记，说明ATP中远离腺苷的磷酸基团容易脱离，①正确；
②放射性标记来自培养液中加入³²P标记的磷酸分子，说明³²P标志的ATP是重新合成的，②正确；
③本实验不能证明ATP是直接的能源物质，③错误；
④³²P标志的ATP是重新合成的，且ATP的总量变化不大，说明存在ATP的水解，④正确．
故选：C．

点评：
本题考点： ATP与ADP相互转化的过程；ATP在生命活动中的作用和意义．

考点点评： 本题的知识点是ATP的合成和水解过程，对ATP与ADP相互转化过程的；理解是解题的关键，其中③ATP是直接的能源物质这句话是正确的，但是本实验不能证明这样结论，该选项往往因对题干要求解析不细而误选．

蛋白质浓缩技术是免疫学中常用的手段,现介绍几种常用的浓缩技术.
1、透析袋浓缩法
利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种.将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋（无透析袋可用玻璃纸代替）,结扎,把高分子（6 000－12 000）聚合物如聚乙二醇（碳蜡）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可.也可将吸水剂配成30％－40％浓度的溶液,将装有蛋白液的透析袋放入即可.吸水剂用过后,可放入温箱中烘干或自然干燥后,仍可再用.
2、冷冻干燥浓缩法
这是浓缩蛋白质的一种较好的办法,它既使蛋白质不易变性,又保持蛋白质中固有的成分.它是在冰冻状态下直接升华去除水分.具体做法是将蛋白液在低温下冰冻,然后移置干燥器内（干燥器内装有干燥剂,如NaOH、CaCl2和硅胶等）.密闭,迅速抽空,并维持在抽空状态.数小时后即可获得含有蛋白的干燥粉末.干燥后的蛋白质保存方便,应用时可配成任意浓度使用.也可采用冻干机进行冷冻干燥.
3、吹干浓缩法
将蛋白溶液装入透析袋内,放在电风扇下吹.此法简单,但速度慢,且温度不能过高,最好不要超过15 ℃.
4、超滤膜浓缩法
此法是利用微孔纤维素膜通过高压将水分滤出,而蛋白质存留于膜上达到浓缩目的.有两种方法进行浓缩：一种是用醋酸纤维素膜装入高压过滤器内,在不断搅拌之下过滤；另一种是将蛋白液装入透析袋内置于真空干燥器的通风口上,负压抽气,而使袋内液体渗出.
5、凝胶浓缩法
选用孔径较小的凝胶,如SephadexG25或G50,将凝胶直接加入蛋白溶液中.根据干胶的吸水量和蛋白液需浓缩的倍数而称取所需的干胶量.放入冰箱内,凝胶粒子吸水后,通过离心除去.
6、浓缩胶浓缩法
浓缩胶是一种高分子网状结构的有机聚合物,具有很强的吸水性能.每克干胶可吸水120 ml-150 ml.它能吸收低分子量的物质,如水、葡萄糖、蔗糖、无机盐等,适宜浓缩10000分子量以上的生物大分子物质.浓缩后,蛋白质的回收率可达80％～90％.比浓缩胶应用方便,直接加入被浓缩的溶液中即可.必须注意,浓缩溶液的pH值应大于被浓缩物质的等电点,否则在浓缩胶表面产生阳离子交换,影响浓缩物质的回收率.
（转的!不过也希望能帮到你）

因为基因工程、植物体细胞杂交、动物细胞融合等等生物技术最终的产物——新的体细胞都要经过细胞培养才能得到细胞产物或者分泌物,所以细胞培养是最基本的技术

出现这个说明ATP是生命活动的直接能源物质

如果是体细胞里的遗传物质发生改变,可用植物组织培养的方法.这样的植株再进行有性生殖是可以把性状可以遗传下的.

细胞是生物体最小的组成单位之一.研究细胞是生物学最基础的工作.

博凌科为生物科技-为你欲回收动物细胞,其离心速率一般为300xg (约1,000rpm),5 - 10 分钟,过高之转速,将造成细胞死亡.

博凌科为生物科技-为你1、合适的细胞培养基合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一.培 养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质,而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境.2、优质血清目前大多数合成培养基都需要添加血清.血清是细胞培养液中最 重要的成分之一,含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分.3、无菌无毒细胞培养环境无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件.在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力,一旦被微生 物或有毒物质污染或者自身代谢物质积累,可导致细胞中毒死亡.因此,在体外培养细胞时必须保持细胞生存环境无菌无毒及时清除细胞代谢产物.4、恒定的细胞生长温度维持培养细胞旺盛生长必须有恒定适宜的温度.5、合适的气体环境气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一.所需气体主要有氧 气和二氧化碳.

准确来说是对的

解题思路：核糖体是蛋白质的合成场所，只能合成肽链；线粒体是有氧呼吸的主要场所，能为生物体的生命活动提供能量；内质网与蛋白质的合成加工以及糖类、脂质的合成有关；溶酶体能够分解衰老、损伤的细胞器，吞噬并杀死侵入细胞的病毒或病菌．

A、核糖体是蛋白质的合成场所，但不能合成糖蛋白的糖侧链，A错误；
B、线粒体是有氧呼吸的主要场所，能为生物体的生命活动提供能量，但不能合成糖侧链，B错误；
C、内质网与蛋白质的合成加工以及糖类、脂质的合成有关，糖蛋白的糖侧链是在内质网上形成的，C正确；
D、溶酶体能够分解衰老、损伤的细胞器，吞噬并杀死侵入细胞的病毒或病菌，D错误．
故选：C．

点评：
本题考点： 细胞器中其他器官的主要功能．

考点点评： 本题以糖蛋白的合成和加工为背景，考查细胞器的结构和功能，只要考生识记相关细胞器的功能即可正确作答，属于考纲识记层次的考查．

平衡盐溶液的作用是维持细胞渗透压平衡,保持pH稳定及提供简单的营养
平衡盐溶液用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂.使用要在空气中使用,不需要CO2培养箱

O2：供给细胞呼吸所需
CO2：维持培养液微酸性pH,使之适宜细胞生长
如果有帮助的话就选最佳吧,以上.

不同的干细胞有自己特异的细胞表面抗原,鉴定细胞的种类最准确直接的方法就是用流式细胞仪检测其表面抗原.
以骨髓间充质干细胞（MSC）为例,需要鉴定CD34、CD44、SH1等表面标志.除此之外,骨髓间充质干细胞还需要进行分化实验,以证实其可以分化为骨、软骨、脂肪细胞.以上两条,即表面标志及分化实验没有问题,就可以确定培养的细胞为骨髓间充质干细胞.
不同的干细胞有不同的表面标志及分化能力,所以MSC只是做为一个例子来说明.

解题思路：ATP的结构简式是A-P～P～P，其中A代表腺苷，T是三的意思，P代表磷酸基团．ATP和ADP的转化过程中，①酶不同：酶1是水解酶，酶2是合成酶；②能量来源不同：ATP水解释放的能量，来自高能磷酸键的化学能，并用于生命活动；合成ATP的能量来自呼吸作用或光合作用；③场所不同：ATP水解在细胞的各处；ATP合成在线粒体，叶绿体，细胞质基质．根据题意分析可知：由于短时间内分离出细胞的ATP，发现其含量变化不大，但部分ATP的末端P已带上放射性标记，说明有ATP的水解和合成．

①由于是部分ATP的末端P已带上放射性标记，说明ATP中远离A的P容易脱离，形成ADP，正确；
②部分ATP的末端P已带上放射性标记，说明部分³²P标记的ATP是重新合成的，正确；
③由于题干中没有说明ATP供能的过程，所以不能说明ATP是细胞内的直接能源物质，错误；
④ATP含量变化不大和部分ATP的末端P已带上放射性标记，说明该过程中ATP既有合成又有分解，正确．
所以能够说明的是①②④．
故选：C．

点评：
本题考点： ATP与ADP相互转化的过程；ATP在生命活动中的作用和意义．

考点点评： 本题考查ATP的相关知识，意在考查学生理解所学知识的特殊性，考查学生从文字中获取信息并对信息进行分析、推理、判断和运用的能力．

因为葡萄糖只能提供C,H,O三种元素,而细胞的生长还需要N,P,S等多种元素,故只加葡萄糖的培养基虽然有养分但细胞不会生长.加含有谷氨酰胺时细胞的生长需要的元素都能提供,所以能生长.两者同时加既有养分又能提供细胞的生长需要的元素,所以细胞生长更好

为细胞分裂提供足够的空间 比如说动物细胞的培养要用胰蛋白酶处理

主要是防止细菌生长,有的是起着筛选成功导入重组载体的细胞的作用.

培养液一般需要加入血清和双抗,放于细胞培养箱内,温度：37℃,CO2浓度：5%,需要注意的就是无菌培养了

好象不能挽救,以失败告终.要判断污染源必须操作时有对照才行,如一组未接种的培养基和一组接种的培养基,如都污染则极可能是培养基灭菌不彻底,反之则是操作过程不规范造成的.

胶原酶的化学名为胶原蛋白水解酶(Collagenase),它能在生理PH和温度条件下特异性地水解天然胶原蛋白的三维螺旋结构,而不损伤其它蛋白质和组织.胶原酶的化学本质是一种蛋白质,因此,这对温度、PH和导致蛋白质变性的各种因素均非常敏感,极易受到外界条件的影响而改变其本身的构象和性质. 胶原酶按其存在的方式不同可分为人体内源性胶原酶和药用胶原酶两种.人体内源性胶原酶是指人体内部本身所具有的胶原酶,如牙龈、触膜等上皮组织和关节滑膜、椎间盘内都不同程度的存在着这种胶原酶,它在体内胶原蛋白的分解过程中发挥着不可或缺的作用.药用胶原酶是指利用生物制药的高科技手段从溶组织梭状芽孢杆菌的发酵液中提取、纯化并精制而得的白色或类白色无菌冻干粉针生物制剂. 胶原酶（collagenase）是从溶组织梭状细胞芽孢杆菌提取制备的,主要水解结缔组织中胶原蛋白成分.当拟消化的组织较硬,内含较多结缔组织或胶原成分时,用胰蛋白酶解离细胞的效果较差,这时可采用胶原酶解离细胞法. 胶原酶仅对细胞间质有消化作用而对上皮细胞影响不大.因此适于消化分离纤维性组织、上皮及癌组织,可使上皮细胞与胶原成分分离而不受损害.常用剂量为最终浓度200U/ml（约为1mg/mL）或0.03%~0.3%.胶原酶分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝细胞专用胶原酶,要根据所要分离消化的组织类型选择胶原酶类型. 1、胶原酶Ⅰ用于上皮、肺,脂肪和肾上腺组织细胞的分离.用于消化组织中连接部分使其成为单个细 胞,用于哺乳动细胞的分离. 2、胶原酶Ⅳ包含至少7种蛋白酶成分,分子量从68-130KD不等.它能消化多种组织. 3、胶原酶Ⅴ包含至少7种蛋白酶成分,分子量从68-130KD不等.它可用于胰腺小岛组织的分离,将结缔组织分离成单个细胞. 4、胶原酶Ⅱ适用于肝脏,骨,甲状腺,心脏和唾液腺组织. 胶原酶的配置 胶原酶溶液同胰蛋白酶一样配制、消毒灭菌和储藏. 注意： 因为Ⅰ型胶原酶分子颗粒比胰酶大,不容易过滤,因此可以用蔡式滤器过滤除菌. 钙、镁离子和血清成分不会影响胶原酶的消化作用,因而可用BSS（如D-hanks或者PBS）或含血清的培养液配制. 胶原酶的使用 1.将漂洗、修剪干净的组织剪成1~2mm3左右小块 2.将组织块放入离心管（三角烧瓶）中加入30~50倍体积的胶原酶溶液,旋紧盖子（密封烧瓶）. 3.将烧瓶放入37℃水浴或者37℃孵箱内,每隔3min振摇一次,如能放在37℃的恒温震荡水浴箱中则更好. 消化时间与组织的类别很有关系,对于某些肿瘤组织或其他较致密结缔组织,消化时间4~48h,对于容易消化的组织可以采用37℃震荡消化15~45min,也可以根据具体情况而定.如组织块已分散而失去块的形状,一经摇动即成细胞团或单个细胞,可以认为已消化充分.上皮组织经胶原酶消化后,由于上皮细胞对此酶有耐受性,可能仍有一些细胞团未完全分散,但成团的上皮细胞比分散的单个上皮细胞更易生长,因此,如无特殊需要可以不必再进一步处理. 4.收集消化液（有时含个别组织块及没有充分消化的组织碎屑则需用100目不锈钢网过滤）,离心1000r/min,5min,去除上清,用Hanks液或者无血清培养液离心漂洗1~2次,去除上清,加培养液制成细胞悬液,接种培养瓶.

解题思路：据图分析，胰腺腺泡细胞运输物质X需要消耗能量，小分子物质的运输属于主动运输，大分子物质的运输方式是胞吐．

A、低温和缺氧均会影响细胞呼吸强度，导致供能减少，因此必定会影响物质X的运输速率，A正确；B、胰腺腺泡细胞既可以进行主动运输，向膜外运出离子，也可以分泌蛋白质，因此该耗能过程可能为主动运输，也可能为胞吐，...

点评：
本题考点： 物质跨膜运输的方式及其异同；胞吞、胞吐的过程和意义．

考点点评： 本题考查物质跨膜运输的相关知识，意在考查学生分析问题和解决问题的能力，属于中档题．

可以,是3倍体.但不能繁殖后代

作用是提供细胞生长所需的营养物质.
质量要求：2010版中国药典三版里面有对牛血清的笼统质量要求.但是具体要用什么牛血清还是得看你培养的是什么细胞.

秋水仙素能够抑制有丝分裂,使染色体停留在分裂中期,在这种分裂过程中,染色体纵裂,但细胞不分裂,因此可以使染色体数目加倍.此外,秋水仙素还能使染色单体缩短、分开,使染色体呈现明显而利于辨认.