将外源目的基因导入大肠杆菌的质粒,质粒上本来有氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因,（顺利导入的话会破坏氨苄青霉素抗性基因

目的基因,就是你最终想操作的基因,像靶子一样.
外源基因,是从是否生物体内部的基因来分类的,不是一个层次的概念.

(1)PCR
(2)受精卵 显微注射法
(3)DNA分子杂交 相应蛋白质 抗原—抗体 已表达
(4)外源基因的插入使受精卵内生命活动必需的某些基因不能正常表达

解题思路：分析题图：大肠杆菌pUC18质粒含有氨苄青霉素抗性基因和LacZ基因，但限制酶的切割位点位于LacZ基因上，所以构建成的重组质粒含有氨苄青霉素抗性基因，但LacZ基因被破坏，不能产生β一半乳糖苷酶．试管Ⅰ中是基因表达载体，试管Ⅱ中是大肠杆菌，将试管I中的物质和大肠杆菌共同置于试管Ⅱ的目的是进行转化，最后用选择培养基进行筛选．

（1）PCR技术能在短时间内大量扩增目的基因，所以已获得的目的基因可利用PCR技术进行扩增．
（2）DNA连接酶连接形成的是磷酸二酯键．
（3）将试管I中的物质和大肠杆菌共同置于试管Ⅱ的目的是使目的基因进人受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和表达，即进行转化；大肠杆菌需事先用Ca²⁺进行处理，增大细胞壁的通透性，使之处于易于吸收周围环境中DNA分子的感受态．
（4）培养基中应含有大肠杆菌必需的营养物质包括碳源、氮源、无机盐、水和生长因子．由于质粒上含有氨苄青霉素抗性基因，因此导入质粒的大肠杆菌能抗氨苄青霉素，所以培养基中还应加入氨苄青霉素，作用是筛选出导入pUC18质粒的大肠杆菌．此外培养基中还应加入IPTG、X-gal．
（5）重组质粒上的LacZ基因被破坏，不能产生β一半乳糖苷酶，若大肠杆菌中已成功导入了重组质粒，则其在含有IPTG和X-gal的培养基中形成白色菌落．如果作为受体细胞的大肠杆菌也含有LacZ基因，则无论大肠杆菌是否导入重组质粒，均会呈现蓝色菌落，这样不利于重组质粒的筛选．
故答案为：
（1）PCR
（2）磷酸二酯
（3）进行转化 使大肠杆菌细胞处于感受态
（4）碳源、氮源、无机盐、水 导入pUC18质粒的大肠杆菌
（5）白 无论大肠杆菌是否导入重组质粒，均会呈现蓝色菌落

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术；微生物的分离和培养；培养基对微生物的选择作用．

考点点评： 本题结合流程图，考查基因工程的相关知识，意在考查考生的识图能力和识记能力；能从题文提取有效信息的能力；能理解所学知识要点，把握知识间内在联系的能力；能运用所学知识，解决问题的能力．

不是.
限制性内切核酸酶(restriction enzyes)简称限制酶,最初是从原核生物中分离纯化来的,是细菌用于抗噬菌体侵染的剪除和切割噬菌体DNA的特殊的内切核酸酶.到目前为止已经从300多种不同的微生物中分离出了约500种限制性内切核酸酶.
根据作用方式不同,限制性内切核酸酶又可分为I型、Ⅱ型、Ⅲ型酶.这三种不同类型的限制酶具有不同的特性,其中II型酶由于其内切核酸酶活性和甲基化活性是分开的,而且内切核酸酶作用又只有序列特异性,故目前在基因操作研究中应用广泛.

1.你的平板上应该有SPECT这种抗生素.
2.挑取数个菌落,做PCR,如果阳性,可以初步断定转化成功
3.再培养扩增,提取质粒后测序,得到最终肯定的结果.

当然可以,有各种试剂可以将目的基因导入细胞中（如Fugene,Lipofectamine）等等,但是有些细胞系更容易成功（如HELA,CHO,HEK293）,而另一些则较难（巨噬细胞）.这个过程叫转染.
细胞最终会将DNA分解掉,这就是为什么一般转染后4天内表达消失.如要长期表达则需要在载体DNA上另带一个抗药基因（G418）,然后再用药来选择表达的细胞.

C.转染

外源基因指的是原本基因组没有的,通过人工方法或者自然方法获得的基因都叫外源基因.

在巨型小鼠的研制过程中,外源基因来自（人的生长激素基因）,被导入外源基因的细胞是（小鼠的受精卵）,外源基因的导入所?

不一定,可以是同种细菌的质粒.

不能
外源基因在受体细胞内无法复制或表达,只有构建入基因表达载体才能保存并整合到受体细胞的染色体DNA上,从而达到稳定存在并表达的目的

表达的概念是产生了基因对应的蛋白质
A选项只是找到了基因，没有说明该基因已经表达
B、C项错误，理由同A
正确选项为D，酵母菌中植入人产生干扰素的基因，该基因表达后可产生干扰素蛋白，在酵母菌细胞中提取倒人干扰素蛋白说明干扰素基因在酵母菌细胞中表达。
故正确答案选D。

电源是能够提供持续电流（稳定电压 电能）的装置.电源的作用是在电源内部不断使用正极集聚正电荷,负极集聚负电荷,在电源外源电流的从正极流向负极.

这个问题一句话真的就可以解决,因为呼吸作用需要相关的酶催化才能进行,这类微生物没有相关的健全的酶系统,所以只能发酵,不能进行呼吸.

1.强启动子
2.产物本身对大肠杆菌没有毒性
如果你使用了强启动子还是表达量低,先做个PCR,看看转录有没有问题.如果mRNA水平低,那就是转录有问题,换个启动子,或者重新做个表达载体.如果mRNA水平很高,建议你可以在16°培养过夜.或者换一个株系的细菌看看.

外源激素特异性上有差距,会造成组织的排异反应.而且不容易控制培养过程,不能达到预期的理想效果.

首先要知道这段基因的序列,然后可以用软件来设计,如Primer
我就知道这个,看到别人用,很好推荐

我不知道你是大学生还是高中生,下面的解释可能有点深奥：
外源基因的表达产量与每个细胞平均表达量和细胞浓度正相关.
影响因素：
①外源基因的拷贝数；
②外源基因的表达频率：
包括：启动子的强度、AUG和SD序列的间距、密码子的组成、核糖体结合位点的有效性.
③表达产物的稳定性；
④细胞的代谢负荷.
简单一点说：导入的外源基因越多,启动子越有效,宿主菌种的生活状态越好,表达就越充分.

导入动物受精卵一般用显微注射的方法.
质粒的运用非常广泛,动物细胞、植物细胞、细菌等等,都可以用质粒作为外源基因运载体,但是动物的受精卵比较特殊,很难用质粒转染,所以要用显微注射.

外源基因在原核宿主内表达不能含有内含子,所以不能用基因组DNA,需要利用原核基因的强启动子和S-D序列（顺势作用原件）,导入后要形成正确的阅读框架,涉及到的顺势作用原件：启动子,S-D序列,终止子,衰减子等.
真核基因在原核基因内表达有四大困难：1,因为缺乏转录后加工机制,只能表达克隆的cDNA,不能表达真核基因组DNA.2,缺乏适当的翻译后加工机制,所表达的蛋白质不能形成适当的折叠或进行糖基化修饰.3,表达的蛋白常形成不溶性的包涵体,分离纯化时需要进行复杂的复性处理,方可得到有活性的蛋白质.4,很难表达大量的可溶性蛋白.

= =你会导入外源基因片段不知道怎么验证?
与未导入外源基因的大肠杆菌做对照试验,培养基中加入淀粉成分,进行一段时间的培养,看两种菌体能不能自行分解淀粉.

首先将目的基因与质粒进行重组,然后将重组质粒导入λ噬菌体中,得到重组λ噬菌体,最后将重组λ噬菌体与大肠杆菌等宿主细胞放入同一培养基中培养,因为λ噬菌体为寄生生物,所以他会主动寄生于宿主细胞,并将其体内的基因通过宿主细胞来进行表达,最后宿主细胞便会产出目的产物

解题思路：解答本题从动物细胞培养、基因表达载体的组成、PCR技术所需条件等知识点着手考虑．

（1）为了使组织分散开为单个细胞通常用胰蛋白酶或胶原蛋白酶．
（2）基因表达载体包括启动子、终止子、目的基因和标记基因．启动子位于目的基因的首端，终止子位于目的基因的尾端．
（3）PCR反应体系的主要成分应该包含：扩增缓冲液（含Mg²⁺）、水、4种脱氧核糖苷酸、模板DNA、TaqDNA聚合酶和一对DNA引物；在PCR反应过程中，有一个环节是从较高的温度冷却到相对较低的55℃左右，其作用让引物结合到互补DNA链上，形成局部双链．
（4）利用生物反应器培养家蚕细胞时，贴壁生长的细胞会产生接触抑制．通常将多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反应器中，这样可以增大细胞贴壁生长的附着面积增加培养的细胞数量，也有利于空气交换．
故答案为：
（1）胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）
（2）启动子 终止子
（3）TaqDNA聚合酶对干扰素基因特异性的DNA引物对
（4）增大细胞贴壁生长的附着面积

点评：
本题考点： 基因工程的应用．

考点点评： 本题考查基因工程、细胞工程等相关知识，着重识记动物细胞培养和PCR技术的有关内容，意在考查考生的识记能力和应用能力，属于容易题．

1、质粒载体
质粒：是真核细胞细胞核外或原核生物拟核区外能共进行自主复制的遗传单位,包括真核生物的细胞器（主要指线绿体和叶绿体）中和细菌细胞拟核区以外的环状脱氧核糖核酸（DNA）分子.
2、λ噬菌体载体
λ噬菌体：是一种大肠杆菌双链DNA噬菌体,是一种中等大小的温和噬菌体,在感染宿主后可进入溶原状态,也可进入裂解循环.
3、柯斯质粒载体
柯斯质粒：是人工建造的含有λDNA的cos序列和质粒复制子的特殊类性的质粒载体.

不一样的,
目的基因,就是你最终想操作的基因,像靶子一样.
外源基因,是从是否生物体内部的基因来分类的,不是一个层次的概念.
☆⌒_⌒☆ 希望可以帮到you~

一般都只有一个基因,如果是说碱基对在几百至几千,有可能上万,但仅就高中所学就是几百至几千个碱基对.
希望我的回答有用·.

解题思路：靶向性载体不是基因工程的运载体，它只负责将携带有目的基因的重组DNA分子定向导入到特异性受体细胞中，并且能保护DNA免受核酸酶的降解．靶向性载体将重组DNA分子导入到靶细胞后易和目的基因分离，靶向性载体只是负责运载外源基因，并不能在细胞内长时间存在．

A、靶向性载体的作用是将目的基因导入靶细胞，因此要容易穿过靶细胞的细胞膜，A正确；
B、外源基因导入人体靶细胞后，通过其正常表达来治疗相应疾病，因此靶向性载体要能保护DNA免受核酸酶的降解，B正确；
C、靶向性载体可与目的基因分离，C正确；
D、靶向性载体不能长时间存在于细胞内，之后会在细胞内被降解，D错误．
故选：D．

点评：
本题考点： 人类遗传病的监测和预防．

考点点评： 本题考查人类遗传病的监测和预防，要求考生识记人类遗传病的监测和预防措施；识记基因治疗的概念，明确靶向性载体的功能及特点，能根据题干信息准确判断各选项．

基因工程又称基因拼接技术和DNA重组技术,是以分子遗传学为理论基础,以分子生物学和微生物学的现代方法为手段,将不同来源的基因(DNA分子),按预先设计的蓝图,在体外构建杂种DNA分子,然后导入活细胞,以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、 生产新产品.
所谓基因工程（genetic engineering)是在分子水平上对基因进行操作的复杂技术,是将外源基因通过体外重组后导入受体细胞内,使这个基因能在受体细胞内复制、转录、翻译表达的操作.
它是用人为的方法将所需要的某一供体生物的遗传物质——DNA大分子提取出来,在离体条件下用适当的工具酶进行切割后,把它与作为载体的DNA分子连接起来,然后与载体一起导入某一更易生长、繁殖的受体细胞中,以让外源物质在其中“安家落户”,进行正常的复制和表达,从而获得新物种的一种崭新技术.
外源基因：把需要研究的,由供体生物提供的基因称为外源基因.

按基因工程定义：在某些生长条件下,大肠杆菌能积累某种特殊的生物大分子包涵体,它们致密地集聚在细胞内,或被膜包裹或形成无膜裸露结构,这种水不溶性的结构称为包涵体.
简单的说,就是外源基因在大肠杆菌胞内表达的过程中,因为某些错误的折叠,形成的不溶的无活性的固体颗粒.形成的原因很复杂,比如表达量过高,无法糖基化,组成中含有较多的半胱氨酸之类的氨基酸,离子键疏水键共价键共同的化学作用等.
提高可溶表达的方法也很多
1,降低诱导温度,比如16度诱导.绝大多数蛋白质在降低诱导温度后可以明显提高可溶表达.
2,降低诱导剂的用量,比如0.1mM IPTG诱导.甚至更极端的可以不加诱导剂,形成泄漏表达.这种情况下表达出来的蛋白一定是可溶表达.
3,更换不同的表达载体,表达菌株.比如个人感觉pET28比pET21,Rosetta的菌株比BL21(DE3)更容易可溶表达.
4,更换表达系统增加信号肽,外源基因导入酵母系统或者哺乳动物细胞,只要是能分泌表达一定可溶性表达.

外源基因若转入细胞核就有可能通过花粉进行传播（大多数外源基因被转入细胞核,少数外源基因才被被转入细胞质）

在目的基因的两端分别加上只在该组织中表达的基因的启动子等调控组件.例如人们就是用这种方法让药物蛋白基因在乳腺细胞中表达的.

1、目的基因的获取
2、构建目的基因表达载体 目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时使目的基因能够表达和发挥作用.（目的基因+质粒+启动子+终止子）
3、将目的基因导入受体细胞：
受体细胞是植物导入的方法一般有三种：
1）农杆菌转化法：原理,Ti质粒上的T-DNA可以转移到受体细胞,并整合到受体细胞染色体的DNA上（一般针对双子与植物）
2）基因枪法（一般针对单子叶植物）
3）花粉管通道法：比如抗虫棉
4、目的基因的检测和测定

经过细胞工程和基因工程手段获得的,期间经过人工选择,保留能够高效表达目的基因的细菌就是最终的工程菌,所以当然能够使外源基因得到高效表达啊

使用噬菌体作为载体,通过DNA重组技术把外源基因导入动物细胞中.通过控制外源基因的剂量和表达效应达到可控式表达

游离,与受体基因组整合,自身整合

DNA的表达需要起始子和终止子,而单独的外援DNA片段是没有的,就不能成功表达,所以要用限制酶分别切载体和所需的DNA,让他们产生相同的末端,把外源DNA加进去,才能成功克隆

选B
其余三项本质均为蛋白质,可以表达

可能游离,然后被细胞消化分解；可能整合到宿主的染色体上,可是不能表达,遗传的时候丢失或传到下一代；也可能整合并且表达,不过这是极少的.大部分是游离的.

说实话 我也不怎么懂
限制性内切酶不是用来切割DNA上特定的位点
我记得只有拥有相同的黏性末端才能结合 所以外源DNA没有这样相同的结合位点就无法侵入
非编码区上有与RNA聚合酶结合位点来调控遗传信息的表达 他应该可以转录RNA 但是RNA只特定识别编码区 我想如果可以的话那表达出来的肯定是怪物了非编码区上的应该都是些无用的基因
一点小的见解 请慎重采纳

打个比方,目的基因就是你选中的要转移到受体细胞中基因；如果已经转入,那么目的基因相对于受体细胞来说就是外源基因了

我知道的就是腺病毒,它的导入整合能力较强,容量也比较大,不知道说的对不对,因为我们做实验用的就是这个,大肠杆菌的质粒应该也可以

导入的外源基因肯定是确定好的DNA序列,怎么会有不确定性啊.很好理解嘛.

结果表明,添加适量的谷氨酸单钠（MSG）、腺苷三磷酸（ATP）、含氮碱基、二氢叶酸和巨大芽孢杆菌的培养上清液都能够促进菌体增殖并提高2-KGA产量,而且2-KGA产量与生物量呈正相关.巨大芽孢杆菌的培养上清液促进菌体生长和产2-KGA的作用远大于以上各种外源营养物质.添加培养36 h的巨大芽孢杆菌胞外液后,氧化葡萄糖酸杆菌的菌落数和2-KGA产量分别是对照的13.39倍和8.81倍,而添加外源营养物质中促进作用最大的二氢叶酸后仅为对照的4.12倍和2.97倍.

限制酶的切点就是两个末端断裂的那个地方,也可以是平末端,不一定是黏性末端.
载体有多个限制性核酸内切酶切点,切点有多种,可以使用的酶也就有多种,但每种酶的切点最好只有一个.若用于切割载体的限制酶有多个切点,则切割后载体可能丢失含有复制起点的片段,重组DNA分子进入受体细胞后便不能进行自主复制.切点所处位置必须在载体本身需要的基因片段外,避免载体因目的基因的插入而失活.

“难道说目的基因能够激发标记基因表达?”
不是的,2个基因有分别的启动子.而抗药基因的启动子始终是处于激活状态.
标记基因这个名字起的不好,应该是筛选基因,比较好理解.
当目的基因和抗药基因在同一质粒时,抗药基因用来分离成功转染了该质粒的细菌.没有转染的细菌就不能存活.“这样所谓质粒的优越性又在哪里?” 这样很简便.不用一个一个细菌来检测是否有目的基因.

解题思路：基因治疗是指将外源正常基因导入靶细胞，以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病，以达到治疗目的．也就是将外源基因通过基因转移技术将其插入病人的适当的受体细胞中，使外源基因制造的产物能治疗某种疾病．

基因治疗是指把健康的外源基因导入有基因缺陷的细胞中，达到治疗疾病的目的．
故选：C．

点评：
本题考点： 转基因技术．

考点点评： 本题考查基因治疗，考查学生识记基因治疗概念的能力．

在实际情况下, 在做克隆插入片段的时候已经把有的序列优化了 (例如选择较常见的密码子), 以两个TAA来有效终止 (基本上一个也够啦). 其他的都已经由你选择的那个载体决定了.
到了蛋白表达这步, 首先选择在什么细胞系里表达啦. 原核细胞(大肠杆菌吧)一般要试不同的strain (细胞系), 有的是翻译系统经过优化的( 例如使信使RNA更稳定啦, 增加几个罕见的转运RNA来对应那些罕见的密码子啦), 有的是细胞里有辅助蛋白的 (使你要表达的蛋白能准确折叠). 转化涂板之后得到很多colony, 一定要试多个不同的克隆(colony), 因为天知道有的克隆就是表达得比另一个好. 另外还有这些变量要去优化: 诱导的时间 (细胞密度, 测OD600, 一般在0.6左右为佳), 诱导剂 (例如IPTG)的浓度, 蛋白表达的温度和时间 (经验证明,温度真是很重要!) .
希望对你有帮助~

影响目的基因在大肠杆菌中表达的因素? 浏览次数：904次悬赏分：0 | 提问时间：2009-4-28 17:30 | 提问者：lys2126
影响目的基因在大肠杆菌中表达的因素?

推荐答案 ⑴外源基因的拷贝数
⑵ 外源基因的表达效率
①启动子的强弱
②核糖体接合位点的有效性
③SD序列和起始密码ATG的间距
④密码子组成
⑶表达产物的稳定性
⑷细胞代谢负荷
⑸工程菌的培养条件
设计构建一个载体,将目的基因在植物根系表达并向根细胞外分泌.请详细写出个步骤 浏览次数：842次悬赏分：20 | 解决时间：2009-2-14 09:13 | 提问者：370629225
考研的 问题
最佳答案 先给你贴个东西你先看一下 希望对你有帮助
将特定的外源基因构建在植物表达载体中并转入受体植物,并不是植物遗传转化的最终目的.理想的转基因植物往往需要外源基因在特定部位和特定时间内高水平表达,产生人们期望的表型性状.然而,近二十年的发展历史却表明,外源基因在受体植物内往往会出现表达效率低、表达产物不稳定甚至基因失活或沉默等不良现象,导致转基因植物无法投入实际应用.另外,转基因植物的安全性问题已在许多国家引起人们的关注,例如,转基因有可能随花粉扩散,抗生素筛选标记基因有可能使临床上的某些抗生素失去作用等等.以上问题的出现使得植物基因工程这一高新技术正处于一种前所未有的困扰时期.针对这些问题,近几年人们对植物转基因技术进行了多方面的探索和改进,植物表达载体的改进和优化就是其中最重要的一项内容,本文就已经取得的进展进行综述.
1 启动子的选用和改造
外源基因表达量不足往往是得不到理想的转基因植物的重要原因.由于启动子在决定基因表达方面起关键作用,因此,选择合适的植物启动子和改进其活性是增强外源基因表达首先要考虑的问题.
目前在植物表达载体中广泛应用的启动子是组成型启动子,例如,绝大多数双子叶转基因植物均使用CaMV35S启动子,单子叶转基因植物主要使用来自玉米的Ubiquitin启动子和来自水稻的Actinl启动子.在这些组成型表达启动子的控制下,外源基因在转基因植物的所有部位和所有的发育阶段都会表达.然而,外源基因在受体植物内持续、高效的表达不但造成浪费,往往还会引起植物的形态发生改变,影响植物的生长发育.为了使外源基因在植物体内有效发挥作用,同时又可减少对植物的不利影响,目前人们对特异表达启动子的研究和应用越来越重视.已发现的特异性启动子主要包括器官特异性启动子和诱导特异性启动子.例如,种子特异性启动子、果实特异性启动子、叶肉细胞特异性启动子、根特异性启动子、损伤诱导特异性启动子、化学诱导特异性启动子、光诱导特异性启动子、热激诱导特异性启动子等.这些特异性启动子的克隆和应用为在植物中特异性地表达外源基因奠定了基础.例如,瑞士CIBA-GEIGY公司使用PR-IA启动子控制转基因烟草中Bt毒蛋白基因的表达,由于该启动子可受水杨酸及其衍生物诱导,通过喷酒廉价、无公害的化学物质,诱导抗虫基因在虫害重发生季节表达,显然是一个十分有效的途径.
在植物转基因研究中,使用天然的启动子往往不能取得令人满意的结果,尤其是在进行特异表达和诱导表达时,表达水平大多不够理想.对现有启动子进行改造,构建复合式启动子将是十分重要的途径.例如,Ni等人将章鱼碱合成酶基因启动子的转录激活区与甘露碱合成酶基因启动子构成了复合启动子,GUS表达结果表示：改造后的启动子活性比35S启动子明显提高.吴瑞等人将操作诱导型的PI-II基因启动子与水稻Actinl基因内含子1进行组合,新型启动子的表达活性提高了近10倍（专利）.在植物基因工程研究中,这些人工组建的启动子发挥了重要作用.
2 增强翻译效率
为了增强外源基因的翻译效率,构建载体时一般要对基因进行修饰,主要考虑三方面内容：
2.1添加5‘-3‘-非翻译序列
许多实验已经发现,真核基因的5‘-3‘-非翻译序列（UTR）对基因的正常表达是非常必要的,该区段的缺失常会导致mRNA的稳定性和翻译水平显著下降.例如,在烟草花叶病毒（TMV）的126kDa蛋白基因翻译起始位点上游,有一个由68bp核苷酸组成的Ω元件,这一元件为核糖体提供了新的结合位点,能使Gus基因的翻译活性提高数十倍.目前已有许多载体中外源基因的5‘-端添加了Ω翻译增强序列.Ingelbrecht等曾对多种基因的 3‘-端序列进行过研究,发现章鱼碱合成酶基因的3‘-端序列能使NPTII基因的瞬间表达提高20倍以上.另外,不同基因的3‘-端序列增进基因表达的效率有所不同,例如,rbcS3‘-端序列对基因表达的促进作用比查尔酮合酶基因的3‘-端序列高60倍.
2.2 优化起始密码周边序列
虽然起始密码子在生物界是通用的,然而,从不同生物来源的基因各有其特殊的起始密码周边序列.例如,植物起始密码子周边序列的典型特征是AACCAUGC,动物起始密码子周边序列为CACCAUG,原核生物的则与二者差别较大.Kozak详细研究过起始密码子ATG周边碱基定点突变后对转录和翻译所造成的影响,并总结出在真核生物中,起始密码子周边序列为ACCATGG时转录和翻译效率最高,特别是-3位的A对翻译效率非常重要.该序列被后人称为Kozak序列,并被应用于表达载体的构建中.例如,有一个细菌的几丁质酶基因,原来的起始密码周边序列为UUUAUGG,当被修饰为ACCAUGG,其在烟草中的表达水平提高了8倍.因此,利用非植物来源的基因构建表达载体时,应根据植物起始密码子周边序列的特征加以修饰改造.
2.3对基因编码区加以改造
如果外源基因是来自于原核生物,由于表达机制的差异,这些基因在植物体内往往表达水平很低,例如,来自于苏云金芽孢杆菌的野生型杀虫蛋白基因在植物中的表达量非常低,研究发现这是由于原核基因与植物基因的差异造成了mRNA稳定性下降.美国Monsanto公司Perlak等人在不改变毒蛋白氨基酸序列的前提下,对杀虫蛋白基因进行了改造,选用植物偏爱的密码子,增加了GC含量,去除原序列下影响mRNA稳定的元件,结果在转基因植株中毒蛋白的表达量增加了30～100倍,获得了明显的抗虫效果.
3 消除位置效应
当外源基因被移人受体植物中之后,它在不同的转基因植株中的表达水平往往有很大差异.这主要是由于外源基因在受体植物的基因组内插入位点不同造成的.这就是所谓的"位置效应".为了消除位置效应,使外源基因都能够整合在植物基因组的转录活跃区,在目前的表达载体构建策略中通常会考虑到核基质结合区以及定点整合技术的应用.
核基质结合区（matrix association region,MAR）是存在于真核细胞染色质中的一段与核基质特异结合的DNA序列.一般认为,MAR序列位于转录活跃的DNA环状结构哉的边界,其功能是造成一种分割作用,使每个转录单元保持相对的独立性,免受周围染色质的影响.有关研究表明,将MAR置于目的基因的两侧,构建成包含MAR-gene-MAR结构的植物表达载体,用于遗传转化,能明显提高目的基因的表达水平,降低不同转基因植株之间目的基因表达水平的差异,减少位置效应.例如,Allen等人研究了异源MAR（来自酵母）和同源MAR（来自烟草）对Gus基因在烟草中表达的影响,发现酵母的MAR能使转基因表达水平平均提高12倍,而烟草本身的MAR能使转基因的表达水平平均提高60倍.使用来源于鸡溶菌酶基因的MAR也可起到同样作用.
另一可行的途径是采用定点整合技术,这一技术的主要原理是,当转化载体含有与寄主染色体同源的DNA片段时,外源基因可以通过同源重组定点整合于染色体的特定部位.实际操作时首先要分离染色体转录活性区域的DNA片段,然后构建植物表达载体.在微生物的遗传操作中,同源重组定点整合已成为一项常规技术,在动物中外源基因的定点整合已获得成功,而在植物中除了叶绿体表达载体可实现定点整合以外,细胞核转化中还很少有成功的报道.
4 构建叶绿体表达载体
为了克服细胞核转化中经常出现的外源基因表达效率低,位置效应及由于核基因随花粉扩散而带来的不安全性等问题,近几年出现的一种新兴的遗传转化技术--叶绿体转化,正以它的优越性和发展前景日益为人们所认识并受到重视.到目前为止,已在烟草、水稻、拟南芥、马铃薯和油菜（侯丙凯等,等发表）5种植物中相继实现了叶绿体转化,使得这一转化技术开始成为植物基因工程中新的生长点.
由于目前多种植物的叶绿体基因组全序列已被测定,这就为外源基因通过同源重组机制定点整合进叶绿体基因组奠定了基础,目前构建的叶绿体表达载体基本上都属于定点整合载体.构建叶绿体表达载体基本上都属于定点事例载体.构建叶绿体表达载体时,一般都在外源基因表达盒的两侧各连接一段叶绿体的DNA序列,称为同源重组片段或定位片段（Targeting fragment）.当载体被导入叶绿体后,通过这两个片段与叶绿体基因组上的相同片段发生同源重组,就可能将外源基因整合到叶绿体基因组的特定位点.在以作物改良为目的的叶绿体转化中,要求同源重组发生以后,外源基因的插入既不引起叶绿体基因原有序列丢失,又不致于破坏插入点处原有基因的功能.为满足这一要求,已有的工作都选用了相邻的两个基因作为同源重组片段,例如rbcL/accD,16StrnV/rpsl2rps7,psbA/trnK,rps7/ndhB.当同源重组发生以后,外源基因定点插入在两个相邻基因的间隔区,保证了原有基因的功能不受影响.最近,Daniel等利用烟草叶绿体基因trnA和trnI作为同源重组片段,构建了一种通用载体（universal vector）.由于trnA和trnI的DNA序列在高等植物中是高度保守的,作者认为这种载体可用于多种不同植物的叶绿体转化.如果这种载体的通用性得到证实,那么这项工作无疑为构建方便而实用的新型叶绿体表达载体提供了一个好的思路.
由于叶绿体基因组的高拷贝性,定点整合进叶绿体基因组的外源基因往往会得到高效率表达,例如McBride等人首次将Bt CryIA(c)毒素基因转入烟草叶绿体,Bt毒素蛋白的表达量高达叶子总蛋白的3%～5%,而通常的核转化技术只能达到0.001%～0.6%.最近,Kota等将Bt Cry2Aa2蛋白基因转入烟草转入烟草叶绿体,也发现毒蛋白在烟草叶子中的表达量很高,占可溶性蛋白的2%～3%,比细胞核转化高出20～30倍,转基因烟草不仅能抗敏感昆虫,而且能够百分之百地杀死那些产生了高抗性的昆虫.Staub等最近报道,将人的生长激素基因转入烟草叶绿体,其表达量竟高达叶片总蛋白的7%,比细胞核转化高出300倍.这些实验充分说明,叶绿体表达载体的构建和转化,是实现外源基因高效表达的重要途径之一.
5 定位信号的应用
上述几种载体优化策略主要目的是提高外源基因的转录和翻译效率,然而,高水平表达的外源蛋白能否在植物细胞内稳定存在以及积累量的多少是植物遗传转化中需要考虑的另一重要问题.
近几年的研究发现,如果某些外源基因连接上适当的定位信号序列,使外源蛋白产生后定向运输到细胞内的特定部位,例如：叶绿体、内质网、液泡等,则可明显提高外源蛋白的稳定性和累积量.这是因为内质网等特定区域为某些外源蛋白提供了一个相对稳定的内环境,有效防止了外源蛋白的降解.例如,Wong等将拟南芥rbcS亚基的转运肽序列连接于杀虫蛋白基因之前,发现杀虫蛋白能够特异性地积累在转基因烟草的叶绿体内,外源蛋白总的积累量比对照提高了10～20倍.最近,叶梁、宋艳茹等也将rbcS亚基的转运肽序列连接于PHB合成相关基因之前,试图使基因表达产物在转基因油菜种子的质体中积累,从而提高外源蛋白含量.另外,Wandelt等和Schouten等将内质网定位序列（四肽KDEL的编码序列）与外源蛋白基因相连接,发现外源蛋白在转基因植物中的含量有了显著提高.显然,定位信号对于促进蛋白质积累有积极作用,但同一种定位信号是否适用于所有的蛋白还有待于进一步确定.
6 内含子在增强基因表达方面的应用
内含子增强基因表达的作用最初是由Callis等在转基因玉米中发现的,玉米乙醇脱氢酶基因（Adhl）的第一个内含子（intron 1）对外源基因表达有明显增强作用,该基因的其他内含子（例如intron8,intron9）也有一定的增强作用.后来,Vasil等也发现玉米的果糖合成酶基因的第一个内含子能使CAT表达水平提高10倍.水稻肌动蛋白基因的第三个内含子也能使报道基因的表达水平提高2～6倍.至今对内含子增强基因表达的机制不不清楚,但一般认为可能是内含子的存在增强了mRNA的加工效率和mRNA稳定性.Tanaka等人的多项研究表明,内含子对基因表达的增强作用主要发生在单子叶植物,在双子叶植物中不明显.
由于内含子对基因表达有增强作用,Mcelroy等在构建单子叶植物表达载体时,特意将水稻的肌动蛋白基因的第一个内含子保留在该基因启动子的下游.同样,Christensen等在构建载体时将玉米Ubiquitin基因的第一个内含子置于启动子下游,以增强外源基因在单子叶植物中的表达.然而,有研究指出,特定内含子对基因表达的促进作用取决于启动子强度、细胞类型、目的基因序列等多种因素,甚至有时会取决于内含子在载体上的位置.例如,玉米Adhl基因的内含子9置于Gus基因的5‘端,在CaMV35S启动子调控下,Gus基因的表达未见增强；当把内含子置于Gus基因3端,在同样的启动子控制下,Gus基因的表达水平却增加了大约3倍.由此可见,内含子对基因表达的作用机制可能是很复杂的,如何利用内含子构建高效植物表达载体,目前还缺乏一个固定的模式,值得进一步探讨.
7 多基因策略
迄今为止,多数的遗传转化研究都是将单一的外源基因转入受体植物.但有时由于单基因表达强度不够或作用机制单一,尚不能获得理想的转基因植物.如果把两个或两个以上的能起协同作用的基因同时转入植物,将会获得比单基因转化更为理想的结果.这一策略在培育抗病、抗虫等抗逆性转基因植物方面已得到应用.例如,根据抗虫基因的抗虫谱及作用机制的不同,可选择两个功能互补的基因进行载体构建,并通过一定方式将两个抗虫基因同时转入一个植物中去.王伟等将外源凝集素基因和蛋白酶抑制剂基因同时转入棉花,得到了含双价抗虫基因的转化植株.Barton等将Bt杀虫蛋白基因和蝎毒素基因同时转入烟草,其抗虫性和防止害虫产生抗性的能力大为提高（专利）.在抗病方面,本实验室蓝海燕等构建了包含β-1,3-葡聚糖酶基因及几丁质酶基因的双价植物表达载体,并将其导入油菜和棉花,结果表明,转基因植株均产生了明显的抗病性.最近,冯道荣、李宝健等将2～3个抗真菌病基因和hpt基因连在一个载体上,两个抗虫基因与bar基因连在另一个载体上,用基因枪将它们共同导入水稻植株中,结果表明,70%的R.代植株含有导入的全部外源基因（6～7个）,且导入的多个外源基因趋向于整合在基因组的一个或两个位点.
一般常规的转化,尚不能将大于25kb的外源DNA片段导入植物细胞.而一些功能相关的基因,比如植物中的数量性状基因、抗病基因等,大多成"基因簇"的形式存在.如果将某些大于100kb的大片段DNA,如植物染色体中自然存在的基因簇或并不相连锁的一系列外源基因导入植物基因组的同一位点,那么将有可能出现由多基因控制的优良性状或产生广谱的抗虫性、抗病性等,还可以赋予受体细胞一种全新的代谢途径,产生新的生物分子.不仅如此,大片段基因群或基因簇的同步插入还可以在一定程度上克服转基因带来的位置效应,减少基因沉默等不良现象的发生.最近,美国的Hamilton和中国的刘耀光分别开发出了新一代载体系统,即具有克隆大片段DNA和借助于农杆菌介导直接将其转化植物的BIBAC和TAC.这两种载体不仅可以加速基因的图位克隆,而且对于实现多基因控制的品种改良也会有潜在的应用价值.目前,关于BIBAC和TAC载体在多基因转化方面的应用研究还刚刚开始.
8 筛选标记基因的利用和删除
筛选标记基因是指在遗传转化中能够使转化细胞（或个体）从众多的非转化细胞中筛选出来的标记基因.它们通常可以使转基因细胞产生对某种选择剂具有抗性的产物,从而使转基因细胞在添加这种选择的培养基上正常生长,而非转基因细胞由于缺乏抗性则表现出对此选择剂的敏感性,不能生长、发育和分化.在构建载体时,筛选标记基因连接在目的基因一旁,两者各有自己的基因调控序列（如启动子、终止子等）.目前常用的筛选标记基因主要有两大类：抗生素抗性酶基因和除草剂抗性酶基因.前者可产生对某种抗生素的抗性,后者可产生对除草剂的抗性.使用最多的抗生素抗性酶基因包括NPTII基因（产生新霉素磷酸转移酶,抗卡那霉素）、HPT基因（产生潮霉素磷酸转移酶,抗潮霉素）和Gent基因（抗庆大霉素）等.常用的抗除草剂基因包括EPSP基因（产生5-烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸合酶,抗草甘磷）、GOX基因（产生草甘膦氧化酶、降解草甘膦）、bar基因（产生PPT乙酰转移酶,抗Bialaphos或glufosinate）等.
上面这些当中1、2、3、5、6都是值得注意的,特别是5,因为你要向细胞外分泌.骨架载体可以选择PB I121,然后你可以在上面改动基因型.
后面的就是克隆的步骤了,相对简单.
1 首先获得目的基因加酶切位点,连入改好的载体中.
2 将质粒转入大肠杆菌DH5a扩增
3 将扩增好的质粒转入植物细胞内进行表达
4 收集根细胞外培养基检测是否有该蛋白的表达和分泌.
至于改造载体那几个步骤要是答题的话简单说说就可以了,毕竟如果真的做出一个好载体都可以自己开公司了.

解题思路：本题考查转基因技术的应用．解答时应熟知转基因技术的原理．转基因技术是指运用科学手段从某种生物中提取所需要的基因，将其转入另一种生物中，使与另一种生物的基因进行重组，从而培育出转基因生物．

（1）不同生物间基因“嫁接”成功，这说明共享这一套遗传密码，遗传密码包含在脱氧核糖核酸或核糖核酸核苷酸序列中的遗传信息．它决定蛋白质中的氨基酸排列顺序，因而决定蛋白质的化学构成和生物学功能．遗传密码决定蛋白质中氨基酸顺序的核苷酸顺序，由3个连续的核苷酸组成的密码子所构成．遗传密码决定蛋白质中氨基酸顺序的核苷酸顺序，由3个连续的核苷酸组成的密码子所构成．由于脱氧核糖核酸（DNA）双链中一般只有一条单链（称为有义链或编码链）被转录为信使核糖核酸（mRNA），而另一条单链（称为反义链）则不被转录，所以即使对于以双链 DNA作为遗传物质的生物来讲，密码也用核糖核酸（RNA）中的核苷酸顺序而不用DNA中的脱氧核苷酸顺序表示．
（2）说明生物共有一套遗传物质．从进化角度看，这些生物具有共同祖先，彼此之间存在一定的联系．
基因是指染色体上决定生物性状的DNA小片段；性状是指生物的形态特征，生理特性和行为方式．性状是由基因控制的．把人的抗病毒干扰素基因植入烟草细胞中的DNA分子上，使烟草获得了抗病毒的能力，表明，烟草体内产生了抵抗病毒的抗体．
（3）转基因技术的第一个浪潮是医药转基因技术，主要利用乳房生物反应器，生产药物，应用转基因技术生产重组疫苗、抑生长素、胰岛素、干扰素、人生长激素等．基因治疗是将人的正常基因或有治疗作用的基因通过一定方式导入人体靶细胞以纠正基因的缺陷或者发挥治疗作用，从而达到治疗疾病目的生物医学高技术．转基因技术的第二个浪潮发生在农业领域，包括农业转基因动物、植物及微生物的培育，特别是转基因作物发展速度最快，培育了一批具有抗虫、抗病、耐除草剂等性状的转基因作物，目前转基因技术正在朝着改善农艺性状如光合效率、肥料利用效率、抗旱耐盐和改善品质等方向发展．转基因技术还可用于环境保护，如污染物的生物降解；用于能源生产，如利用转基因生物发酵酒精；用于新材料领域，如利用转基因生物生产高价值的工业品．
故答案为：
（1）遗传密码；
（2）共同的原始祖先；
（3）将抗病毒基因嫁接到水稻中，形成抗病毒水道新品种；将人的血型基因嫁接到猪体内，培育人血的猪；将干扰素基因嫁接到细菌体内，培育出能产生干扰素的细菌．（其他答案合理也可得分）．

点评：
本题考点： 转基因技术的应用；生物技术的发展对人类未来的影响．

考点点评： 转基因技术应用于实践，将给农业、医药等诸领域带来革命，目前已取得了许多成就．此部分也是经常考查的热点问题．