农杆菌转换法是将带目的基因的质粒插入染色体吗?

A、在目的基因的左侧只有B酶的识别位点，右侧只有C酶的识别位点，因此应该使用酶B和酶C切取抗虫基因，A正确；
B、应该将目的基因插入T-DNA，而T-DNA中含有A酶和B酶的切割位点，因此应该使用酶A和酶B切割Ti质粒，B正确；
C、酶A和酶C切割形成的黏性末端相同，使用酶B和酶C切取抗虫基因，使用酶A和酶B切割Ti质粒，再用DNA连接酶连接两者形成重组质粒后，重组质粒不含酶A的识别位点，C错误；
D、成功建构的重组质粒含有两个酶C的识别位点，因此用酶C处理重组质粒将得到2个DNA片段，D正确．
故选：C．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题结合图解，考查基因工程的技术和原理，要求考生识记基因工程的概念、原理、操作工具及操作步骤，能根据图中限制酶的识别序列及切割位点选择合适的限制酶，再结合所学的知识准确判断各选项．

A、质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外并具有自我复制能力的双链环状DNA分子，质粒不是细胞器，故A错误；
B、转基因生物含有抗性基因，相当于杂合子，而花粉是生殖细胞只含体细胞一半的染色体，可能不含抗病基因，故B正确；
C、天然的质粒不能直接作为载体，即不一定都含抗性基因的，基因工程中用到的质粒都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的，故C错误；
D、植物的体细胞、生殖细胞都可以作为受体细胞，因为每个细胞都具有全能性，故D错误．
故选：B．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题考查基因工程相关知识，意在考查学生识记和理解能力，解题的关键是理解基因工程的工具和步骤．

A、一般来说，质粒对受体细胞无害，即存在与否对宿主细胞生存没有决定性的作用，错误；
B、由于植物细胞具有全能性，则转基因植物的受体细胞可以是受精卵或体细胞，B错误；
C、抗枯萎病基因之所以能在金花茶细胞中表达，原因是两者共用一套遗传密码子，并且基因表达方式相同，C错误；
D、导入受体细胞的抗枯萎病的基因是单个的，而花粉是减数分裂后的产物，因此有的花粉是不带有抗性基因的，D正确．
故选：D．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题考查基因工程的工具、步骤等相关知识，意在考查学生对知识点的识记和理解能力，注意D选项中转基因生物一般为杂合子．

A、获取植物细胞的原生质体时，需要采用酶解法去壁，即用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，A正确；
B、原生质体没有细胞壁保护，在低渗溶液中容易吸水胀破，因此为了防止原生质体吸水胀破，培养基的浓度要适宜，B正确；
C、由以上分析可知，图e表示将原生质体培养成愈伤组织，图f表示将愈伤组织转移到含有一定抗生素的选择培养基中进行筛选培养，C正确；
D、将含有目的基因的愈伤组织继续培养（图g），要注意调整植物激素的种类和比例，才能获得完整的植株，D错误．
故选：D．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术；植物培养的条件及过程．

考点点评： 本题结合通过土壤农杆菌与植物细胞原生质体共培养的方法获得转基因植物的过程图解，考查基因工程、植物细胞工程，要求考生识记基因工程的原理、工具及操作步骤；识记植物体细胞杂交和植物组织培养的过程，能准确判断图中各过程的含义，再结合所学的知识答题．

（1）根据题意知：只有将抗旱基因转移到T-DNA上，才能将目的基因整合到植物基因组中，后代植株才能具有抗性，此过程为基因工程的操作过程，所用的工具有限制酶、DNA连接酶、运载体Ti质粒．
（2）将上述外植体筛选后离体培养，先经过细胞分裂及脱分化形成愈伤组织，然后再分化形成具有不定芽的胚状体，再进一步培养成幼苗．
（3）转基因技术是否成功可以对转基因植物进行鉴定，最简便的是个体水平（表型）的鉴定，在个体水平上直接对两种植株进行比较，看是否有相应的性状出现即可．
故答案为：
（1）T-DNA 限制酶、DNA连接酶、Ti质粒
（2）愈伤组织
（3）表型（或个体水平）

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术；植物培养的条件及过程．

考点点评： 本题考查基因工程及细胞工程的相关知识，意在考查学生理解基因工程的知识要点，把握知识间的内在联系的能力．

A、本题涉及的目的基因是河南华溪蟹的金属硫蛋白基因，因此需要用特定的限制性核酸内切酶切割河南华溪蟹的基因，故A错误；
B、转基因生物与原生物之间一般不会出现生殖隔离，故B正确；
C、通过农杆菌转入重组质粒的植物细胞是单个烟草细胞或原生质体，故C正确；
D、要想用DNA连接酶将目的基因和质粒连接形成重组质粒，则目的基因（金属硫蛋白基因）的两端与作为载体的质粒至少存在着一段核苷酸序列相同的片段，这样用限制酶切割才能形成相同的黏性末端，故D正确．
故选：A．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题考查基因工程的相关知识，意在考查考生分析题文提取有效信息的能力；识记能力和能理解所学知识要点，把握知识间内在联系，形成知识网络结构的能力；能运用所学知识，对生物学问题作出准确判断和得出正确结论的能力．

（1）构建重组质粒时，首先需要限制酶切割质粒和含有目的基因的外源DNA分子，其次需要DNA连接酶将目的基因和质粒连接形成重组质粒；将目的基因导入微生物细胞时，需要用CaCl2处理微生物细胞，使之处于能吸收周围环境...

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题结合构建重组质粒和筛选含抗烟草花叶病毒基因的土壤农杆菌的过程图解，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的操作工具及其作用，掌握基因工程的操作步骤及其应用，能正确分析题图，并能结合图中信息准确答题．

（1）提取目的基因时需要使用限制酶；构建基因表达载体时，需先用限制酶切割质粒和含有目的基因的DNA分子，还需用DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组DNA分子；限制酶和DNA连接酶的作用部位均为磷酸二酯键．
（2）将目的基因导入微生物细胞时，需要用Ca²⁺处理微生物细胞，使其成为易于吸收周围环境中DNA分子的感受态；图中将目的基因导人受体细胞所用的方法是农杆菌转化法．
（3）将含有目的基因的受体细胞培育成转基因植株，还需要采用植物组织培养技术，该技术包括脱分化和再分化两个过程；植物组织培养过程需要在无菌条件下进行．
（4）进行植物细胞融合时，需要用纤维素酶和果胶酶处理植物细胞以去除细胞壁获得原生质体；诱导植物原生质体融合时常有聚乙二醇（PEG）；受体细胞制备成功的标志是再生出新的细胞壁．
故答案为：
（1）限制酶 限制酶和DNA连接酶
（2）Ca²⁺使其成为感受态细胞 农杆菌转化法
（3）脱分化 再分化 无菌
（4）聚乙二醇（PEG） 再生出新的细胞壁

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术；植物体细胞杂交的过程．

考点点评： 本题结合利用农杆菌培育转基因植物的流程图，考查基因工程和植物细胞工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤；识记植物组织培养和植物体细胞杂交的具体过程，能结合所学的知识准确答题．

A、蓝色素基因可以用人工合成法合成，A正确；
B、重组质粒首先进入农杆菌的Ti-DNA分子中，再利用农杆菌侵染玫瑰细胞，将重组质粒导入到玫瑰细胞的染色体上，B正确；
C、含有目的基因的受体细胞可通过植物组织培养技术获得转基因植株，C正确；
D、根据运载体上的标记基因的产物选择导入目的基因的农杆菌，D错误．
故选：D．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题着重考查了基因工程的原理和技术等方面的知识，意在考查考生能识记并理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成一定知识网络的能力，并且具有一定的分析能力和理解能力．

（1）将携带外源基因的DNA导入植物细胞之前，首先要构建基因表达载体，该步骤需要限制酶和DNA连接酶．
（2）目的基因导入植物细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，可以通过检测转化的植物有没有显示出目的基因控制的性状来确定．将转基因细胞培育成转基因植株需要采用植物组织培养技术．
（3）利用基因工程技术进行育种的优点：①能打破生物种属的界限；②在分子水平上定向改变生物的遗传特性．
（4）转基因产品的安全性：
安全：①多环节、严谨的安全性评价，可以保证转基因食品的安全；②转基因农作物要表现其新性状，必须有一定条件；③种植抗虫转基因农作物，可减少农药用量．
不安全：①可能会出现新的过敏源；②导入转基因生物的外源基因有可能与感染转基因生物的某些细菌或病毒杂交，从而重组出新的病原体；③重组的微生物降解化合物过程中会产生中间产物，造成二次污染．
故答案为：
（1）限制性核酸内切酶和DNA连接酶
（2）检测转化的植物有没有显示出目的基因控制的性状植物组织培养
（3）①能打破生物种属的界限②在分子水平上定向改变生物的遗传特性
（4）安全：①多环节、严谨的安全性评价，可以保证转基因食品的安全；②转基因农作物要表现其新性状，必须有一定条件；③种植抗虫转基因农作物，可减少农药用量．
不安全：①可能会出现新的过敏源；②导入转基因生物的外源基因有可能与感染转基因生物的某些细菌或病毒杂交，从而重组出新的病原体；③重组的微生物降解化合物过程中会产生中间产物，造成二次污染．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术；植物培养的条件及过程．

考点点评： 本题考查基因工程及转基因生物的安全性问题，要求考生识记基因工程的工具及操作步骤，了解转基因生物的安全性问题，能结合所学的知识准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查．

（1）基因工程中要用同一种限制性内切酶处理目的基因和运载体，产生相同的粘性末端，然后通过碱基互补配对的方式将目的基因与运载体连在一起，构成基因表达载体．
（2）因该植株含有一个携带目的基因的T-DNA片段，看作是杂合子，可以假设基因型为A0，则通过杂交可以产生AA：AO：OO=1：2：1，则具有抗除草剂特性的植株占总数的[3/4]．
（3）将目的基因导人叶绿体DNA中，则目的基因就与叶绿体绑在一起，随叶绿体的遗传而遗传给后代，表现出母系遗传的特点，不会通过花粉传递给后代．
故答案为：
（1）限制性内切酶碱基互补配对
（2）[3/4]雌雄配子各有[1/2]含抗除草剂基因；受精时，雌雄配子随机结合
（3）叶绿体遗传表现为母系遗传，目的基因不会通过花粉传递丽在下一代中显现出来

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题考查基因工程的工具，转基因作物的后代遗传，基因污染等知识，属于考纲综合应用层次．要对课本上关于基因工程的工具，转基因作物的后代遗传，基因污染等知识熟知．