miRNA靶基因验证时怎么突变靶基因的3‘UTR结合位点

zvzv552022-10-04 11:39:541条回答

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魔猫 共回答了23个问题 | 采纳率82.6%
请问miRNA靶基因验证时怎么突变靶基因的3‘UTR结合位点 - 分子...
例如:靶基因和miRNA的结合位点序列为:CAUUUCA,那应该怎么突变,不知道是突变其中一个还是几个碱基.看文献有的只突变1个碱基,有的突变2个碱基,不知道有没有什么
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rats,SHR)主动脉的表达特征及其与高血压的关系.取4、8、16和24周龄雄性SHR大鼠及同龄正常血压对照(Wistar-Kyoto,WKY)大鼠.MiRanda、TargetScan和PicTar用于候选miRNAs及靶基因预测分析.通过实时定量RT-PCR检测大鼠主动脉miR-1、miR-133a、miR-155及miR-208的表达,并进一步通过实时定量RT-PCR检测呈差异表达的miR-155和miR-208的预测靶基因mRNA表达.结果显示,SHR大鼠主动脉miR-155表达在4、8、24周时与同龄WKY大鼠无显著差异,但在16周时明显低于同龄WKY大鼠(P0.05),且大鼠主动脉miR-155表达量与血压呈负相关(r=-0.525,P0.05).MiR-208表达在4周龄时最高,随年龄增长明显下降(P0.05),其表达水平与血压和年龄呈负相关(r=-0.400,P0.05;r=-0.684,P0.0001),但在SHR和WKY大鼠之间无显著差异.miR-1和miR-133a在各年龄组SHR和WKY大鼠间未呈现差异表达.MiR-155和miR-208表达与相应预测靶基因mRNA表达无显著负相关性.以上结果表明,miR-155表达在成年SHR大鼠主动脉明显低于WKY,并与血压呈负相关,提示miR-155可能参与高血压的发生发展,主动脉miR-155表达异常可能是SHR大鼠血压升高的原因之一.大鼠主动脉miR-208表达在幼年时最高,随年龄增长而明显下降,提示其可能与血管发育有关.
TaqMan探针PCR中,探针和靶基因有多少碱基配对,才能实现有效扩增.
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TAQMAN一般25-35个碱基吧,最好和模板完全匹配,结合会更好,当然,有一两个碱基不配对也不会影响扩增曲线.MGB是来进行检测SNP位点的吧,一般将SNP位点设置在探针3·末端倒数几个碱基处,可以有效区分.
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不是同一个,有序列上的关联性.
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