限制性内切酶和解旋酶都是作用于磷酸二脂键吗?DNA连接酶、DNA转录酶、逆转录酶分别作用的位置在哪呢?

（1）由于含有目的基因的DNA片段和质粒上均含有EcoRI酶的切割位点，所以用此酶切割后产生相同的黏性末端．这样，具有相同黏性末端的片段用DNA连接酶均可连接，从而产生3种连接产物，目的基因-载体连接物、载体-载体连接物、目的基因-目的基因连接物，所以要进行分离纯化．
（2）由于将细胞放入含四环素的培养基，要将存活tct^R 为四环素抗性基因结构要保持完整，用EcoRI酶切后再用连接酶连接的三种产物只有载体-载体连接物基因结构保持完整．
（3）防止目的基因和基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，需要有两种限制酶，而amp^R为青霉素抗性基因，P启动子，T为终止子，ori为复制原点，结构不能被破坏，故选择EcoRⅠ和BamHⅠ这两种限制酶．
故答案为：
（1）目的基因-载体连接物载体-载体连接物目的基因-目的基因连接物分离纯化
（2）载体-载体连接物
（3）EcoRⅠ和BamHⅠ

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 学生基因工程工具原理的应用理解不到位，特别是2种工具酶与获取目的基因和表达载体之间的联系与拓展．

A、每个DNA分子上至少有1个酶位点被该酶切断，可以切得的种类有：a、b、c、d、ab、bc、cd、abc、bcd九种，不是3种，A错误；
B、每个DNA分子上至少有1个酶位点被该酶切断，可以切得的种类有：a、b、c、d、ab、bc、cd、abc、bcd九种，不是4种，B错误；
C、每个DNA分子上至少有1个酶位点被该酶切断，可以切得的种类有：a、b、c、d、ab、bc、cd、abc、bcd九种，C正确；
D、每个DNA分子上至少有1个酶位点被该酶切断，可以切得的种类有：a、b、c、d、ab、bc、cd、abc、bcd九种，不是12种，D错误．
故选：C．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 主要考查学生对DNA重组技术的基本工具等考点的理解，要求学生能够识记和运用相关知识．

（1）用限制性核酸内切酶切割DNA分子获得一个目的基因时，需要切割目的基因的两侧，要断裂4个磷酸二酯键；
（2）用限制酶切割质粒时，至少要切一个切口，断裂2个磷酸二酯键．
因此，基因工程中构建重组质粒时，用同一种限制性内切酶切割DNA，至少有6个磷酸二酯键被水解．
故选：C．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题考查基因工程的原理及技术，重点考查限制酶的作用，要求考生识记限制酶的来源、特点及作用结果，能根据题干要求作出准确的判断，属于考纲识记和理解层次的考查．

A、获取目的基因时可能用到限制性内切酶，A正确；
B、DNA连接酶将黏性末端的磷酸二酯键连接起来，B错误；
C、目的基因须有运载体导入受体细胞，C正确；
D、最后需要检测目的基因是否已成功表达，D正确．
故选：B．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题考查基因工程的原理及技术，要求考生识记基因工程的原理、工具及操作步骤，掌握各步骤中的相关细节，能结合所学的知识准确判断各选项，属于考纲识记和理解层次的考查．

限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，即限制性内切酶进行的是DNA的剪切．
故选：A．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题知识点简单，考查基因工程的相关知识，重点考查基因工程的操作工具，明确限制酶的作用是剪切DNA，再根据题干要求作出准确的判断，属于考纲识记层次的考查．

限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，从而形成两个相同的黏性末端．图中四个黏性末端均不相同，因此是由四种限制性内切酶切割形成的．
故选D．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题考查了限制酶的相关知识，意在考查考生理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力．

A、目的基因获取需要限制酶切割DNA分子．目的基因导入受体细胞，不同种受体细胞导入的方法不同，但不需要限制酶，A错误；
B、目的基因导入不需要限制酶切割，检测可以利用DNA分子杂交技术，B错误；
C、目的基因与运载体结合是基因表达载体构建过程，此时需要同一种限制酶切割目的基因和运载体，使它们露出相同的黏性末端或平末端，之后用DNA连接酶连接成基因表达载体．导入不需要限制酶切割，C错误；
D、获取目的基因需要限制酶切割DNA分子．基因表达载体构建过程，此时需要同一种限制酶切割目的基因和运载体，使它们露出相同的黏性末端或平末端，D正确．
故选：D．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题考查了基因工程的相关内容，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系．

限制酶的作用部位是磷酸和脱氧核糖之间的磷酸二酯键，而一条链中相邻两个碱基之间的化学键为-脱氧核糖-磷酸-脱氧核糖-．
故选：D．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题难度一般，要求学生识记基因工程的相关知识，考查学生对基因工程概念及操作过程的理解．

根据题中图示，可将4kb的DNA示意图画出，再在此DNA上将两种限制酶及二者的混合物分别降解结果的示意图画出，进行比较，即可推出HindⅢ的切点为1个，将DNA切成2.8kb和1.2kb两段，同理BamHⅠ有2个，分别在距DNA一端的0.9kb处和另一端的1.8kb处．
故选：A．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题考查了限制性核酸内切酶的相关内容，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，能用数学方式准确地描述生物学方面的内容、以及数据处理能力．

A、每个DNA分子上至少有1个酶位点被该酶切断，可以切得的种类有：a、b、c、d、ab、bc、cd、abc、bcd九种，不是3种，A错误；
B、每个DNA分子上至少有1个酶位点被该酶切断，可以切得的种类有：a、b、c、d、ab、bc、cd、abc、bcd九种，不是4种，B错误；
C、每个DNA分子上至少有1个酶位点被该酶切断，可以切得的种类有：a、b、c、d、ab、bc、cd、abc、bcd九种，C正确；
D、每个DNA分子上至少有1个酶位点被该酶切断，可以切得的种类有：a、b、c、d、ab、bc、cd、abc、bcd九种，不是12种，D错误．
故选：C．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 主要考查学生对DNA重组技术的基本工具等考点的理解，要求学生能够识记和运用相关知识．