菌落总数测定时,样品稀释时怎么保证它的无菌称量?需要在超净工作台上称量吗?

酵母菌可以用血细胞计数板,细胞比较大.
其他的一般是梯度稀释培养,不太快

1.可能是生理盐水的问题,还有操作的先后也可能有影响,无菌操作技术不熟练,很可能在操作过程中染菌.问：你的空白实验怎么做的?
2 你说的梯度稀释只是理论,一般做出来都不会正好是10倍关系,我做的大都是5—8倍.至于浓度低的比浓度高的多,有可能是稀释时没有混匀,建议你稀释时用振荡器混匀.如果是用EP管的话,稀释时体积误差会比较大,最好用1ml高浓度溶液到9ml无菌水,用试管稀释.
我能想到的就这么多吧,希望对你有所帮助,祝实验顺利!

高压灭菌锅、生化培养箱、干燥箱、恒温水浴锅、显微镜、电子秤、称量纸、蒸馏水器、冰箱、无菌室、超净工作台 、酒精灯、烧杯、大小试管、锥形瓶、剪刀、镊子、1ml10ml吸管或移液枪、吸耳球、平皿、接种针

是-6

菌落总数、大肠菌群可以在生物安全一级实验室检验,致病菌必须在生物安全二级实验室才能检验!

先五点取样,再按公式,将立方微米换算成立方厘米,毫升.计数板有两格式,公式也有两计算方法,购买计数板时说明书上都有公式计算方法,按买的格式计算就可以了.多给点分哈.

两个菌连在一起算两个,
如果你是用浇注法的话,总是连在一起可能是稀释液加入平板后,你浇注时间晚了,稀释液中的细菌菌落已经有些吸附于平皿底部,再浇注后打圈混匀也不足以分散.所以样品加入后要尽快浇注培养基,一般我们都是两个人做,一个做稀释,一个浇注.基本上不会出现你说的情况.

每种食物它的标准值都是不一定的啦,像桶（瓶）装饮用水
细菌总数 标准值≤20 cfu/mL
而在饮料方面的标准却为
≤100 cfu/mL
酵母 ≤10 cfu/mL
大肠菌群 ≤3 MPN/100mL
鬼才知道到底是什么标准

乳酸菌的检测：
一 概述
乳酸菌是指一群能分解葡萄糖或乳糖产生乳酸,需氧和兼性厌氧,多数无动力,过氧化氢酶阴性,革兰氏阳性的无芽胞杆菌和球菌.这类细菌在自然界分布广泛,可栖居在人和各种动物的口腔、肠道等器官内,在土壤、食品、饲料、水及一些临床标本中都有乳酸菌的存在.乳酸菌在工业、农业和医药等与人类生活密切相关的领域应用价值很高,相当多的乳酸菌对人、畜的健康起着有益的作用,但个别菌种能对人畜致病,乳酸菌主要包括23个属的细菌.
二 样本采集
检样主要为含乳酸菌活菌的饮料和微生态制剂,样本应放入冰箱保存,心快检验.
三 检验方法（中华人民共和国国家标准 乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物学检验GB／T 16347-1996）
乳酸菌菌总数的测定：乳酸菌菌落总数是指标样在一定条件下培养后,所得1ml检样中所含乳酸菌菌落的总数.
（一）检验程序
乳酸菌菌落总数检验程序如下：
（二）培养基和试剂
改良TJA培养基（改良番茄汁琼脂培养基）；改良MC培养基（modified Chalmers培养基）；0.1％亚甲蓝牛乳培养基；6.5％氯化钠肉汤参照；pH9.6葡萄糖肉汤；40％胆汁肉汤；淀粉水解培养基；精氨酸水解培养基；乳酸杆菌糖发酵管；七叶苷培养基；革兰氏染色液；3％过氧化氢溶液；蛋白胨水、靛基质试剂；明胶培养基；硝酸盐培养基、硝酸盐试剂；生理盐水：定量分装于三角瓶和试管内灭菌.
（三）操作步骤
1．以无菌操作将经过充分摇匀的检样25ml（或25g）放入含有225ml灭菌生理盐水的来菌广口瓶内做成1：10的均匀稀释液.
2．用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1m,沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液）.
3．另取1ml灭菌吸管,按上述操作顺序,作10倍增稀释液,如此每递增一次,即换用1支1ml灭菌吸管.
4．选择2～3个以上适宜稀释度,分别在作10倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内,每个稀释度作两个平皿.
5．稀释液移入平皿后,应及时将冷至50℃的乳酸菌计数培养基（改良TJA或改良MC）注入平皿约15ml,并转动平皿使混合均匀.同时将乳酸菌计数培养基倾入加有1ml稀释液检样用的灭菌生理盐水的灭菌平皿内作空白对照,以上整个操作自培养物加入培养皿开始至接种结束须在20min内完成.
6．待琼脂凝固后,翻转平板,置36℃±1℃温箱内培养72h±3h取出,观察乳酸菌菌特征,选取菌落数在30～300之间的平板进行计数.计算后,随机挑取5个菌落数进行革兰氏染色,显微镜检查并做过氧氢酶试验.革兰氏阳性,过氧化氢酶阴性,无芽胞的球菌或杆菌可定为乳酸菌.根据证实为乳酸菌菌落计算出皿内的乳酸菌数,然后乘其稀释倍数即得每亳升样品中乳酸菌数.例如,检样10－4的稀释液在改良TJA琼脂平板上,生成的可疑菌落为35个,取5个鉴定,证实的乳酸菌的4个,则1ml检样中乳酸菌数为：
35×4／5×104＝2.8×105
7．乳酸菌在改良TJA和改良MC培养基上菌落生长形态特征.
（四）乳酸菌的鉴定
对上述分离到的乳酸菌需进行菌种鉴定时,则作以下试验.
1．菌种制备 自平板上挑取菌落,接种于改良TJA或改良MC琼脂斜面,于36℃±1℃,24～48h培养,刮取菌苔,分别进行下列试验.
2．乳酸杆菌鉴定试验 极少见还原硝酸盐,不液化明胶,不产生靛基质和硫化氢.
3．常见乳杆菌属内种的碳水化合物反应.
4．产酸乳的链球菌的鉴别试验.

菌落总数测定具体操作步骤可以下载国标 网上有的 ,最好用最新版的,记录表填写3个然后取平均数.

既然是半成品应该不是采用国家标准而应该是企业标准,这样的企业标准制定应该根据你们企业的历史检测情况来制定,标准制定出来后使员工通过努力能够达到标准,不努力则达不到标准,这样的标准应该就不错了.根据时间和产品质量的提升来不断地提高标准,提高——保持——再提高——再保持!

通常出口食品工厂的要求：工作服、手、设备、工器具,车间空气,包材等统称为食品接触面,菌落总数小于100个/cm,大肠菌群一般小于3个/cm.
希望能够帮助你

选取菌落数在30-300之间的平板进行计数,这里只有1:100的在范围内,结果就是164*100=16400,在用科学计数法表示就是

1.牛乳酸度：外表酸度和真实酸度的总称.
2.总酸度：总酸度是指食品中所有酸性成分的总量.它包括未离 解的酸的浓度和已离解的酸的浓度其大小可借碱滴定 来测定故总酸度又可称为“可滴定酸度”.
3.灰分：指一种物质中的固体无机物的含量.
4.恒重：两次称量重量差异在万分之二以下可视作恒重.
5.总糖：主要指具有还原性的葡萄糖,果糖,戊糖,乳糖和在测定条件下能水解为还原性的单糖的蔗糖（水解后为1分子葡萄糖和1分子果糖）,麦芽糖（水解后为2分子葡萄糖）以及可能部分水解的淀粉（水解后为2分子葡萄糖）.
6.粗脂肪：是饲料、动物组织、动物排泄物中脂溶性物质的总称.
7.单色光：单一频率（或波长）的光.
8.检样：是从一批产品中随机抽取少量产品(样本) 进行检验,据以判断该批产品是否合格的统计方法和理论.
9.大肠菌群：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌.
10.在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数.
希望我的回答给予您帮助!祝您天天开心!

菌落总数：称25克或吸25ml样品到225毫升的灭菌生理盐水中,得到就是1:10的样品了,吸1ml接种到平皿里倒琼脂培养；再从1:10的里面吸1ml到9ml的灭菌生理盐水里,得到的就是1:100的样品,吸1ml接种到平皿里倒琼脂培养；从1:100的里吸1ml到9ml的灭菌生理盐水里,得到的就是1:1000的样品了,吸1ml接种到平皿里倒琼脂培养；.
大肠菌群：称25克或吸25ml样品到225毫升的灭菌生理盐水中,得到就是1:10的样品了,分别吸10ml接种到3根装有10ml的双料管中培养养；再从1:10的里面吸1ml到9ml的灭菌生理盐水里,得到的就是1:100的样品,分别吸1ml接种到三根单料管中培养；从1:100的里吸1ml到9ml的灭菌生理盐水里,得到的就是1:1000的样品了,分别再吸1ml接种到三根单料管中培养；

测定微生物数量的方法
1.计数器测定法：
即用血细胞计数器进行计数.取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内,用显微镜观察计数.由于计数室的容积是一定的(O.1mm3),因而根据计数器刻度内的细菌数,可计算样品中的含菌数.本法简便易行,可立即得出结果.
本法不仅适于细菌计数,也适用于酵母菌及霉菌孢子计数.
2、电子计数器计数法:
电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化,小孔仅能通过一个细胞,当一个细胞通过这个小孔时,电阻明显增加,形成一个脉冲,自动记录在电子记录装置上.
该法测定结果较准确,但它只识别颗粒大小,而不能区分是否为细菌.因此,要求菌悬液中不含任何碎片.
3、活细胞计数法
常用的有平板菌落计数法,是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的.取一定容量的菌悬液,作一系列的倍比稀释,然后将定量的稀释液进行平板培养,根据培养出的菌落数,可算出培养物中的活菌数.此法灵敏度高,是一种检测污染活菌数的方法,也是目前国际上许多国家所采用的方法.使用该法应注意：①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数,过多或过少均不准确；②为了防止菌落蔓延,影响计数,可在培养基中加入O．001％2,3,5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物.
广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验,是最常用的活菌计数法.
4、比浊法
比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量.细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比,与光密度成正比,所以,可用光电比色计测定菌液,用光密度(OD值)表示样品菌液浓度.
此法简便快捷,但只能检测含有大量细菌的悬浮液,得出相对的细菌数目,对颜色太深的样品,不能用此法测定.
5、测定细胞重量法
此法分为湿重法和干重法.湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重；干重法系单位体积培养物经离心后,以清水洗净放人干燥器加热烘干,使之失去水分然后称重.
此法适于菌体浓度较高的样品,是测定丝状真菌生长量的一种常用方法.
6、测定细胞总氮量或总碳量
氮、碳是细胞的主要成分,含量较稳定,测定氮、碳的含量可以推知细胞的质量.此法适于细胞浓度较高的样品.
7、颜色改变单位法（colour change unit,简称CCU）
这种方法通常用于很小,用一般的比浊法无法计数的微生物,比如支原体等,因为支原体的液体培养物是完全透明的,呈现为清亮透明红色,因此无法用比浊法来计数,由于支原体固体培养很困难,用cfu法也不容易计数,因此需要用特殊的计数方法,即CCU法.它是以微生物在培养基中的代谢活力为指标,来计数微生物的相对含量的,下面以解脲脲原体为例单介绍其操作：,简
（1）取12只无菌试管,每一管装1.8ml解脲脲原体培养基.
（2）在第一管加入0.2ml待测解脲脲原体菌液,充分混匀,从中吸取0.2ml加入第二管,依次类推,10倍梯度稀释,一直到最末一管
（3）于37度培养,以培养基颜色改变的最末一管作为待测菌液的CCU,也就是支原体的最大代谢活力,比如第六管出现颜色改变,他的相对浓度就是10的6次方CCU/ml.
一般来说,比浊法和菌落计数法就可以满足绝大多数细菌的计数,但是对支原体这样比较特殊的微生物,用CCU法比较合适.

这个要求目前没有能达到的,菌落总数、大肠菌群且不说,致病菌的检测用vitek II 也需要前增菌、纯化,机器检测时间取决于你纯化的纯度.
不过,科研方面已经有人在搞利用机器识微生物“相貌”特征的研究,据我看到的文献,也需要增菌,不然很容易被忽略掉.

菌落总数是一个保鲜指标,超过范围则说明变质,在国标范围内对人体健康无害,但是食品包装本身可能存在污染,控制得当才行.