急!菌株产淀粉酶的最佳液体培养基配方优化方案

选用蛋白酶产量较高的原始菌种,扩大培养后,采用低浓度的菌悬液,进行紫外线时间梯度照射,选取一个突变率较高,成活率也较高的时间,大批量的进行紫外照射诱变,然后在明胶固体培养基平板上筛选水解圈较大的菌株接种,培养后测定水解酶活性,进一步筛选出高产菌株.

特别是利用甲基溴（Methyl Bromide）进行熏蒸.在东南部几个州进行的实验表明...为便于楼主查阅,另附上中英文对照版本.INTRODUCTION:前言：Black root ...

由题意,一开始培养皿里含有营养物质,所以种群随时间而逐渐增大.后来因为营养物质消耗完毕,细菌生长收到抑制,种群数量下降.再后来由于突变出现了新菌株,它们能够利用原来菌种产生的有害代谢废物,种群中新菌株增多,使得种群又一次增大.

选A,不用考虑太复杂,这只是基因序列与特定基因相对位置的问题.链霉素会破坏基因排列,距离越远,被破坏几率越大,野生型出现越多.

1 配制含纤维素的培养基
2 接种细菌
3 诱变处理：如紫外线照射
4 观察透明圈大小,选出菌株
原理：纤维素被纤维素酶水解后变得透明

不记得了...应该是有的 不过DH5a是扩增型感受态 外源转进去的质粒会大量复制 所以主要还是你转进去的质粒

细菌的菌株鉴定,16s区域就可搞定,我之前也涉及过,
最简单的方法就是测序鉴定,有什么不懂可以留言,

解题思路：人工诱变是创造动植物新品种和微生物新类型的重要方法，它突出的优点是可以提高突变率，加速育种工作的进程，并能大幅度改良某些性状．
用紫外线、激光、化学诱变剂处理青霉菌再经筛选的方法可选育高产菌种．
基因突变的特点是低频性、普遍性、少利多害性、随机性、不定向性．

A、由a变为b、c、d，青霉菌的菌株数和产量不同，体现了变异的多方向性，A正确；
B、由于基因突变是低频性的，所以用紫外线、激光、化学诱变剂处理青霉菌后，能提高变异的频率，B正确；
C、根据题意和图示分析可知：曲线d表示青霉菌的产量最高，是最符合人们生产要求的变异类型，C正确；
D、青霉菌在诱变剂作用下发生的变异可能有基因突变或染色体变异，不可能发生基因重组，D错误．
故选：D．

点评：
本题考点： 诱变育种．

考点点评： 本题考查了基因突变的特点和应用，意在考查学生的理解和应用能力，试题难度中等．

中文 » 英语

解题思路：诱变育种是通过物理或化学的方法使基因发生突变培育新品种的方法．

由细菌中的抗性基因存在于细菌的质粒上，因此X射线诱变的部位是质粒．
A、细菌的抗性基因不位于核区内的基因组上，因此核区不是X射线诱变的部位，A错误；
B、细菌属于原核细胞，无细胞核，B错误；
C、细菌的质粒上含有抗生素合成基因，因此X射线诱变的部位是质粒，C正确；
D、核糖体是蛋白质合成的场所，不含有基因，D错误．
故选：C．

点评：
本题考点： 诱变育种．

考点点评： 本题的知识点是诱变育种的原理，细菌DNA存在的部位，真核细胞与原核细胞的本质区别，对于相关知识点的记忆和应用是解题的关键．

质粒通常情况下不能整合到受体细胞的基因组中,整合的概率很低.
而是以单独质粒形态存在于细胞中
所以就用虚线啦

没有什么时间,我简单解释一下,语言你可以自己组织,意思对了丰富一下以下内容就可以了哈：
1、取材.指材料选择,微生物分离一般来源是自然界的土壤及其他生物体内.你最好选择在常年高温的环境中采样.譬如火山口,热泉口,常年高温的戈壁沙漠土壤等.
2、分离.指分离野生菌株.在实验室,分离微生物的传统途径是选择合适的培养基选择性分离土壤中的微生物,这个题目的要求说明实验中需要在高温条件培养,最好选用多种培养基,以便于分离到种类较多的各类微生物.相关实验技术请自行查阅书籍.
3、纯化.微生物分离过程中重要一步,目的是需要得到菌株的纯培养,即多次纯化过程中需挑取单菌落接种扩培,同时可以起到活化菌株生命力的作用.当然此过程中合适的培养基相当重要.否则菌株可能反而退化失活.
4、筛选.获得适合高温生长的菌株库之后,依据要求筛选菌株.即指提供单因子培养条件筛选,譬如选择能产高温蛋白酶的,需要在培养基中单一添加高级蛋白（即未降解过的或未胨化过的）作为氮源,以葡萄糖或其他易利用糖类作单一碳源.又如选择产高温淀粉酶的,以淀粉作为单一碳源,补充其他无碳利用的氮源.能在选择条件下生长的为目的菌株.
5、确证.得到目的菌株后即可通过相应的酶提取方法确证.提取总酶在高温条件下进行体外蛋白消化或者淀粉消化实验来确证.

没有什么时间,我简单解释一下,语言你可以自己组织,意思对了丰富一下以下内容就可以了哈：
1、取材.指材料选择,微生物分离一般来源是自然界的土壤及其他生物体内.你最好选择在常年高温的环境中采样.譬如火山口,热泉口,常年高温的戈壁沙漠土壤等.
2、分离.指分离野生菌株.在实验室,分离微生物的传统途径是选择合适的培养基选择性分离土壤中的微生物,这个题目的要求说明实验中需要在高温条件培养,最好选用多种培养基,以便于分离到种类较多的各类微生物.相关实验技术请自行查阅书籍.
3、纯化.微生物分离过程中重要一步,目的是需要得到菌株的纯培养,即多次纯化过程中需挑取单菌落接种扩培,同时可以起到活化菌株生命力的作用.当然此过程中合适的培养基相当重要.否则菌株可能反而退化失活.
4、筛选.获得适合高温生长的菌株库之后,依据要求筛选菌株.即指提供单因子培养条件筛选,譬如选择能产高温蛋白酶的,需要在培养基中单一添加高级蛋白（即未降解过的或未胨化过的）作为氮源,以葡萄糖或其他易利用糖类作单一碳源.又如选择产高温淀粉酶的,以淀粉作为单一碳源,补充其他无碳利用的氮源.能在选择条件下生长的为目的菌株.
5、确证.得到目的菌株后即可通过相应的酶提取方法确证.提取总酶在高温条件下进行体外蛋白消化或者淀粉消化实验来确证.

5 Yuebei biological characteristics of Ganoderma strains
Abstract:According to different test programs:tests carbon,nitrogen test,light test,pH test,C / N test,test growth factors,orthogonal and humidity tests to study the black Chicago JW-19,Ganoderma lucidum DG -3,Black Chi DG-2,space fungus,Taishan 1 (Zhejiang) as the representative of the northern part of Guangdong wild and cultivated biological characteristics of fungus.Test come:Black Chicago JW-1 strains cultivated in the most appropriate formula is pH 4.0,60% humidity and glucose + soybean meal + (Vb1 + Vc) and incubated in the dark.DG-3 strain of Ganoderma lucidum cultivated in the most appropriate formula is pH 5.0,60% humidity and fructose + yeast extract + Vc and incubated in the dark.Black Chicago in the DG-2 strains cultivated the most appropriate formula is pH 4.0,60% humidity and fructose + yeast extract + Vc and incubated in the dark.Cultivation of Ganoderma lucidum strain space the most appropriate formula is pH 4.0,60% humidity and maltose + soybean meal + Vc and cultured in dark conditions.Taishan 1 (Zhejiang) strains cultivated in the most appropriate formula is pH 4.0,60% humidity,yeast extract and malt + + (Vb1 + Vc) and cultured in dark conditions.

一般都是
大肠杆菌 ATCC 25922
大肠杆菌 CMCC 44568
金黄色葡萄球菌 ATCC 25923
都可以,有条件在来几株别的也可以啊!

获得一株纯种细菌,首先可以了解它的培养基（总要养得活才行）；
1. 平板涂布,观察菌落形态大小及色泽,革兰氏染色,在显微镜下观察；
2.根据以上获得信息初步判断,设计生理生化试验；
3.提取基因组,16s rDNA分子鉴定
最终能确定到细菌的种属.

首先可以肯定的是：可以筛选出来
但是：人工诱导突变 突变你也了解 不一定按照你的方向去变化.只要菌株量大 肯定可以
我也做过耐药菌株试验,根据你需要的耐药性不同 菌株数量肯定会不同.我做的大概400-500株 就筛选了不到5株

那是与耐药质粒在菌体内复制了多少以及菌体的强弱及耐药质粒表达量的多少有关.强菌耐药质粒拷贝数越高,表达量一般也就越大,抗性也就越强.另外培养条件也可能影响它们的表达,因为条件不适宜就相当于又给菌体加了一个选择压,这时候表达的菌体就会不仅具有耐药抗性,还会有对不良环境的抵抗能力.

1.待表达基因的密码子优化；
2.选择合适的启动子,必要时加入适当的信号肽促进分泌；
3.转化菌株,筛选多拷贝菌株,必要时进行多次转化；
4.选择工程菌进行优化,工程菌可以是将某些蛋白酶删除的菌株；
5.优化表达条件和培养基.

每个大肠杆菌在同样的环境下基因表达可能不同,所以实验上通过抗生素等筛选得到某种物质高表达量的菌株

解题思路：诱变育种是通过物理或化学的方法使基因发生突变培育新品种的方法．

由细菌中的抗性基因存在于细菌的质粒z，因此我射线诱变的部位是质粒．
A、细菌的抗性基因不位于核区内的基因组z，因此核区不是我射线诱变的部位，A错误；
B、细菌属于原核细胞，无细胞核，B错误；
C、细菌的质粒z含有抗生素合成基因，因此我射线诱变的部位是质粒，C正确；
D、核糖体是蛋白质合成的场所，不含有基因，D错误．
故选：C．

点评：
本题考点： 诱变育种．

考点点评： 本题的知识点是诱变育种的原理，细菌DNA存在的部位，真核细胞与原核细胞的本质区别，对于相关知识点的记忆和应用是解题的关键．

解题思路：从冰川土样中分离获得了具有较高脂肪酶活性的青霉菌菌株，为了在此基础上获得脂肪酶活性更高的菌株，可采用诱变育种的方法，如用用紫外线照射青霉菌菌株，再用相应的培养基进行筛选．

A、用紫外线诱导青霉菌发生基因突变，可能会出现脂肪酶活性更高的菌株，再通过筛选获得，A正确；
B、将青霉菌菌株与能高效水解蛋白质的菌株混合培养，再进行筛选得到是高效水解蛋白质的菌株，与题目要求不符，B错误；
C、将能高效水解蛋白质的菌株的基因导入青霉菌菌株，再进行筛选得到是高效水解蛋白质的菌株，与题目要求不符，C错误；
D、要筛选出脂肪酶活性更高的菌株，应设置培养基中脂肪的浓度梯度，对青霉菌菌株分别培养，再进行筛选，D错误．
故选：A．

点评：
本题考点： 诱变育种．

考点点评： 本题通过高效菌株的筛选考查诱变育种的向知识，首先要求考生识记几种育种方法的原理、方法、优点和缺点，学会在不同的情况下选择合适的育种方法；其次还要求考生掌握微生物培养和筛选的相关内容．

定义：A=(a-b+c+d-） B=（a+b-c-d+）1.采用U形管 中间隔有细菌滤器 ,左右管加入基础培养基灭菌.2.左管接入A,右管接入B.通气培养24小时后,左右分别在[—]上涂平板 观察是否有野生型出现.3 判断：如果2管均无,说明是接...

不能,没有答出酶是不给分的
即使控制的是分解能力,酶的活性是这道题的关键点,必须得出
生物高考一共写出来不到50个字,你可以想想你的答案会给你分吗?
老师原来告诉我们,你现在必须按照答案回答,不能有任何这种觉得也可以的想法,答案是什么,你就改成什么,到高考才会答出最正确的

如果瓶子的体积够大,装的培养液够多如1升或几升,每次只取几毫升测OD或菌数,是可以的.如果是好氧的摇瓶培养,250毫升三角瓶每瓶的装液量为20毫升,这样的话就不够取样了,必需从不同的瓶子中取菌液.

菌苔（lawn)
细菌在斜面培养基接种线上有母细胞繁殖长成的一片密集的、具有一定形态结构特征的细菌群落.一般为大批菌落聚集而成.
菌落（colony）单个微生物在适宜固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度；形成肉眼可见有一定形态结构的子细胞的群落.
菌种：
保存着的,具有活性的菌株.
模式菌株：
在给某细菌定名,分类作记载和发表时,为了使定名准确和作为分类概念的准则,以纯粹活菌（可繁殖）状态所保存的菌种.

解题思路：全面把握从激光诱变的黑曲霉高产菌株中提取果胶酶的流程，考查果胶酶的作用、影响果胶酶活性的因素、果胶酶菌株的培养及应用．

（1）果胶酶的主要作用是分解细胞壁及胞间层，使榨取果汁变得更容易，而果胶分解成可溶性的半乳糖醛酸，也使得浑浊的果汁变得澄清．
（2）以葡萄味原料榨取果汁，经过高温灭菌、冷却后，再加入果胶酶进行处理时，溶液的温度、酸碱度要适宜，果胶酶要适量，因为温度、酸碱度会影响酶的活性，生产果汁时为了使果胶酶得到充分的利用，节约成本，需要控制好酶的用量．
（3）从腐烂的果蔬或果园泥土中分离出产果胶酶的菌株，利用以果胶为唯一碳源的培养基进行筛选．在培养基上进行菌落培养时，在样品稀释液的稀释度要足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基的表面形成单个的菌落，这是为了培养基上的菌落是单个生长，这样有利于进行菌落计数．
（4）利用激光诱变选育果胶酶高产菌株时，应选取黑曲霉的成熟孢子，制成一定浓度的悬浮液激光辐射后，再对悬浮液中的辐射对象进行分离培养，以便获得突变菌株．
（5）快速、高效、灵活和易于操作是PCR技术的突出特点，从诱变得到的高产菌株生产的果胶酶耐高温，因此可利用该菌株提取耐高温的DNA聚合酶，用于PCR技术，进行DNA的扩增．
答案：
（1）细胞壁和胞间层可溶性的半乳糖醛酸
（2）适宜的温度和PH适量
（3）果胶单个菌落计数
（4）成熟孢子分离
（5）耐高温的DNA聚合酶

点评：
本题考点： 果胶酶的活性测定．

考点点评： 考查果胶酶的活性测定的知识，要求学生记忆的知识．

cDNA文库是以噬菌体群体或细菌群体的形式存在的.不是单菌落.可以在混合着在平板上存在,也可以收集后放在试管内（混合的,分开就不称之为文库了）存在.

GFP本身是绿色荧光蛋白(Green Fluorecent protein)的缩写,至于你说的大肠杆菌GFP是个菌,要么是可以表达绿色荧光蛋白的大肠杆菌重组菌,要么是你把蛋白和菌搞混了.
筛选氨苄青霉素抗性的阳性克隆很简单,将氨苄青霉素加到所用培养基中,终浓度100ug/ml,把要筛选的菌液涂布其上,能长出的就是氨苄青霉素阳性菌株.要注意的是生长时间不可太长,因为水解氨苄青霉素的beta-内酰胺酶能分泌到细菌外,导致阳性菌周围的阴性菌也能生长,即所谓的卫星菌落.

对于Ames,不同菌株测试不同致突变类型,最少也要选用TA98、TA100两种菌

　　拮抗菌 即“抗生菌”
　　筛选方法
　　琼脂块法较为常见
　　突变株的筛选除了选择合适的理化诱变条件外,对突变株的分离和筛选也是相当重要的.由于突变是随机产生的,且突变株中多数为负向变异,正突变率低,因此选择合适的筛选方法,对检出优良的高产菌株就显得尤为重要.
　　4.1 初筛和复筛
　　筛选一般分初筛和复筛两个阶段.初筛可在摇瓶中完成,也可采用琼脂块法, 即将适宜的反应试剂喷涂在平板上正在生长的菌落中,或采用混合指示剂在培养基上染色,直接观察特定的酶活性,或者将待测菌落打块,放置在涂有特定菌的检定盘上,依抑菌圈的大小定量测定菌株的抗菌活性物质的含量.初筛得到的高产菌株,再进行摇瓶复筛,对其生产性能作更精确的定量测定.
　　4.2 随机筛选
　　随机筛选是一种通过逐个检查、测定经诱变处理的存活菌株的产量或其他性状的常用的筛选方法,它的特点是方法简单,但工作量大、周期长、随机性大、成本高,为加快筛选速度,人们采用了诸如平皿快速检测法、计算机技术应用等多种方法, 但其随机的特点仍不能快速有效的检出所需优良菌株.
　　4.3 定向筛选
　　定向筛选常用来筛选抗性突变株和营养缺陷型突变株,其筛选效率远高于随机筛选.
　　4.3.1 抗性突变株的筛选
　　抗性突变包括抗代谢产物,抗代谢类似物,抗噬菌体,抗前体及其类似物,抗重金属离子或抗特定的有毒物质,抗培养基中的某些成分等.代谢产物等的积累,往往对其自身的合成具有反馈调节作用,筛选的抗性突变株,可以消除这些不利因素的抑制或阻遏作用,达到积累目的产物的作用.这些方法在抗生素生产中尤为重要,抗生素产生菌的抗性基因与抗生素合成的结构基因和调控基因紧密联锁而易发生共突变.在抗生素菌种选育中,抗性突变株往往就是高产突变株.
　　不太清楚你所做的课题具体所指,希望能对你有所帮助.

解题思路：诱变育种一般采用的方法有物理和化学两类：如射线照射、亚硝酸等．
诱变育种具有的优点是可以提高突变率，缩短育种周期，以及能大幅度改良某些性状．

A、细菌的抗性基因位于质粒上，而不是拟核的DNA上，A错误；
B、细菌属于原核生物，细胞中没有染色体，B错误；
C、细菌的抗性基因位于质粒上，所以利用人工诱变，将某抗生素低产菌株诱导成高产菌株，诱变时发生变异的结构是质粒，C正确；
D、细菌属于原核生物，细胞中没有线粒体，D错误．
故选：C．

点评：
本题考点： 诱变育种

考点点评： 本题考查原核细胞结构和诱变育种的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合分析问题的能力．

F-菌株：不具有F因子的雌性菌株.当它和具有F因子的菌接合时,就成为遗传物质的受体细菌.它通过和F+菌株结合,接受F因子后,F-菌就会转变为F+菌.
F+菌株：具有F因子的雄性菌株.具有F纤毛,通过与F-菌株接合,可以进行F因子的传递.
F' 菌株：当Hfr菌株细胞内的F质粒因不正常切离而脱离染色体组时,可重新形成游离的、但携带整合位点邻近一小段核染色体基因的特殊F质粒,称F‘质粒或F’因子.
Hfr菌株：高频重组菌株.指细胞内含有整合态（含有F因子,F因子通过交换整合到主染色体上）的F质粒的菌株.F质粒插入染色体后,形成*F因子,可以在接合过程中,将菌株的染色体DNA传给F-菌株
Hfr菌株的F因子从染色体上脱离下来的菌株是 F-（正常脱离） ,F' （不正常切离）

从含氮、磷污染物丰富的地方取样,经富集培养后,用鉴别性培养基进行稀释分离培养,初步筛选后还需对所得菌落进一步进行效能鉴定等.

第一,选择一种含少量碳源营养物质的基础培养基中
第二,将菌液稀释涂布到平板上,加入一定浓度的苯,进行培养
第三,挑取一定数量的菌落与液体培养基混匀,制成菌液,涂布到新的以苯为唯一碳源的基础培养基中继续培养
第四,选取生长活力较高的菌落,扩大培养或者保种

解题思路：（1）培养基的营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐．培养基的分类：①按物理性质分，分为液体培养基和固体培养基，固体培养基中含有凝固剂，一般是琼脂．②按化学成分分，分为天然培养基和合成培养．两者的区别是天然培养基成分不确定，合成培养基成分的含量是确定的．③按用途分，分为选择培养基和鉴别培养基．选择培养基主要是培养、分离特定的微生物，培养酵母菌可在培养基中加入青霉素；鉴别培养基可以鉴定不同的微生物，比如鉴别饮用水中是否含有大肠杆菌，可以用伊红-美蓝培养基，如果菌落呈深紫色，并带有金属光泽，说明有大肠杆菌．
（2）常用灭菌方法：灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌法．
培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌和消毒方法依次：高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌、化学消毒、紫外线灭菌、巴氏消毒法．
（3）接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法．接种的目的是使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，并在培养基表面形成单个细菌繁殖而成的子细胞群体--菌落．

（1）欲筛选出能降解原油的菌株，培养基中应只含有原油而无其它碳源，不能降解原油的细菌在此培养基上不能生存，这类培养基属于选择培养基．
（2）分离纯化菌种时，需采用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，使聚集在一起的细菌细胞分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落，以便纯化菌种．
（3）降解原油能力越强的菌株，在菌落周围形成的分解圈越大．
（4）实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌（如接种环）、干热灭菌（如培养皿）、高压蒸汽灭菌（如培养基）等．无菌操作要求在整个实验过程中操作都在酒精灯火焰附近进行，以避免周围微生物的污染．
故答案为：
（1）原油 选择
（2）平板划线法 稀释涂布平板法
（3）强
（4）干热灭菌 高压蒸汽灭菌 火焰

点评：
本题考点： 培养基对微生物的选择作用；用大肠杆菌为材料进行平面培养，分离菌落．

考点点评： 本题的知识点是微生物培养过程中的无菌技术，分离微生物的常用的接种方法和接种工具，主要考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力．

以你目前提供的,只能判断为芽胞杆菌,但具体是什么芽胞杆菌杆菌还是判断不出来.
鉴定细菌最主要的还是要看菌落形态和生化反应,目前不知道菌落形态,生化反应也太欠缺了（苏丹黑染色一般是用做细胞检查的,水解淀粉这个生化反应很少用因为太缺乏特异性,而大多数芽胞杆菌都能还原硝酸盐）

你只要配好淀粉筛选平板,其他都比较简单.
1.样本采集：你可设计以富含淀粉的植物为主,这其中的细菌淀粉分解株分离率比较高,也可采集土壤等.
2.将样本制成悬液,取一定量加入到富集培养基中（可根据情况自行配制不同的富集培养基,也可用营养肉汤、LB等）,培养过夜.
3.将培养液系列稀释,取一定量涂布淀粉平板,然后培养；
4.,挑取在蓝色淀粉平板出现白色透明圈的菌落即为产淀粉酶菌株.
5.测定获得的各产淀粉酶菌株的淀粉酶活性,挑选高产菌株.
6.对高产菌株进行分类鉴定.
淀粉酶初筛平板]：蛋白胨1.0g,酵母提取物0.5g,NaCl0.5g,可溶性淀粉1g,台盼蓝0.03g,琼脂糖1.0g,调节pH为3.0、7.5或10.5,加入100ml ddH2O中0.06MPa高压灭菌20min,待温后倾注平板.

这类题型要注意用单一变量法
首先进行菌种的采集（例如去野外采集）
其次培养基只加淀粉,这样可以初步筛选出能够分解利用淀粉的菌种
然后进行菌种的分类筛选,通过菌种的菌落色彩,生存环境（对PH的铭感度需氧厌氧来筛选出来某一特定的菌种）
最后进行扩大培养,进行采集

提高筛选的成功率首先要注意无菌操作,不要人工引入额外的杂菌,有条件的话全程应该在超净台中进行.然后就是按照目标菌种的特性,引入一些营养缺陷,或者抗生素,进行涂板挑选.一般的菌株都会有某种抗性基因,以供加入对应的抗生素进行筛选.
另外一种比较简单易用,效果十分可靠的筛选方法是蓝白斑筛选：
蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法,是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等.现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息.在这个编码区中插入了一个多克隆位点（MCS）,它并不破坏读框,但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能,这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞.因此,宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性,但它们同时存在时,可形成具有酶学活性的蛋白质.这样,lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补,称为α-互补.由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下,在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落,因而易于识别.然而,当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后,几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段,使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落.这种重组子的筛选,又称为蓝白斑筛选.如用蓝白斑筛选则经连接产物转化的菌平板37℃温箱倒置培养12-16hr后,有重组质粒的细菌形成白色菌落.
------------------------------------------
至于首先进行摇瓶培养,如果你的目标菌种含量不是实在太少,少到随机取来涂板的100微升中一个都没有,长不出菌落的话,没有这个必要.因为摇瓶的时候不同的细菌会产生竞争,而科研涉及到的一些特化菌株或者转化过的工程菌株生存能力不如野生细菌,往往会反而被淘汰.如果目的菌株实在太少,少到没法铺板那自然只好先用过量充足的培养基摇一下,这是没有办法的情况.

因为每个细菌的变异是不受其他细菌变异的影响的,那么就有独立性可得1-0.97^n>=0.95, 解得 n>=99 ,结果是99个

最好是要有已知生理生化性质的菌株作为标准参比.如果对菌株的背景毫无了解,可以做16srDNA的PCR扩增,再根据序列同源性比对,大致确定未知菌株的分类地位.

如果你已经得到纯菌株了,那就恭喜你了,通过DNA测序比对是比较容易的了.
1）提取DNA（这个不用说了,现在是标准步骤）
2）27f-1492rPCR 并克隆
3）切胶测序
4）基因bank比对.
同时应该将该株菌送至鉴定中心,进行生理代谢测定（这是最牢靠的证据）
希望有帮助,其实前面的人说的已经比较到位了,我这纯属罗嗦了.

Common Industrial Solvents Column:HP-1 19091Z-212 25 m x 0.32 mm,1.05 μm Carrier:Helium,35 kPa Oven:30-140°C at 10°C/min Injection:Split ratio 200:1 Detector:IRD,200°C Sample:1 μL Suggested Supplies Septum:Advanced Green,5183-4759 Liner:Split,single taper,low pressure drop,galss wool,5183-4647 Seal:Gold plated seal,18740-20885 Syringe:Syringe,5ul tapered,FN 23-26s/42/HP,5181-1273 谱图是PDF的传不上来 想看的话打这个电话010-88499131我发到你邮箱里

摘要：本文拟研究红曲固态发酵青稞生产色曲的生产工艺.
Summary: Solid-state fermentation of barley for Monascus red pigment production.
本文以红曲霉5018为出发培养菌株进行了研究,
Monascus ruber strain 5018 was used in this study.
在蒸煮青稞时间25分钟,料水比1:1,
Barley was mixed with water at the 1:1 ratio, and steam-boiled for 25 minutes.
青稞装料量为150g/L时,水分含量在50%有利于红曲霉的正常生长,
For the fermentation, barley content was 150g/L. Water content at 50% was favorable for Monascus growth.
发酵时间为9天；
The fermentation period was 9 days.
经正交因素确定在发酵温度34℃,接种量8%,初始pH3时,青稞红曲的色价最高,品质更好.
Orthogonal factor statistical analysis showed that the optimal fermentation conditions were: 34℃, inoculation level 8%, and initial pH 3. The product Monascus red pigment showed excellent color qualities. (Monascus red pigment, also called 'hongqu', or 'red konjac', is a natural food dye.)

我的见解如下：
1.先要获得野生型大肠杆菌的纯培养物
2.诱变：可以选择各种诱变法,如紫外线诱变法,将一定浓度的菌液（可分成好几等分分别做实验）放在一定强度的紫外灯下照射,那分成的几等分可以分别照射10S,20S,30S,40S,50S,60S,注意,菌液不可太稀太浓,这个操作应该在黑暗的条件下进行,只允许有紫外光,以免光修复造成突变失败.
3.培养：将上述菌种分别涂抹在配好的完全培养基上（牛肉膏-蛋白胨培养基）,倒置培养过夜
4,筛选：配置好基本培养基,再往上面添加一定浓度的氨基酸营养液,除了不要添加你说要得到的营养缺陷的那种氨基酸,必需氨基酸都要添加,再用影印法将3中的菌落印到这些培养基上,倒置培养过夜.
5.挑取：直接挑取4中培养基上的菌落,就是你要找的氨基酸营养缺陷突变菌株
在2中,之所以要分成好几份做,再以不同时间长短去照射,是为了加大筛选的效率时间过短,可能得不到想要的突变菌种,而时间过长,菌株全死,也得不到想要的菌株,所以这样做也可以算是一个试验性的步骤!

遗传转化实验：以其中一株如ABC为受体菌,提取另外一株如DEF的DNA并转化ABC菌株.将转化子涂布不含有ABCDEF的培养平板.在平板上能生长良好的转化子应该为能合成ABCDEF的菌株.

培养基本身是没有菌种的,如果人工培养的菌种是从培养基中培养的,那这些菌种属于②收集菌株筛选或③购置生产用菌种.