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在1997年10月，通过贝克曼对库尔特公司的并购，产生了一个集生物医疗为一体的最具产品业务综合性的新的组织，涵盖了从生命科学到临床诊断和细胞分析的领域。在临床诊断和细胞分析市场中，美国贝克曼库尔特有限公司的客户包括了医院实验室，商用实验室，医生诊所和合作营业者。这些客户群由临床生化系统，血液细胞分析系统，免疫生化系统，离心分离机，快速检测试剂盒，试剂以及质控生化制品所赖以支持。在生物学研究市场中，贝克曼库尔特生命科学领域的客户包括生物技术公司，制药公司，研究机构以及大学。这些研究机构的效率和生产力得到了贝克曼库尔特的鼎立支持，所涉及的范围包括：离心分离机和转子，毛细管电泳系统，蛋白纯化系统，DNA合成器，以及排序器，生物芯片制备仪工作站，流式细胞分析系统，高性能液相色谱仪，闪烁计数系统，分光光度计，实验室自动化系统以及软件，等等。自其在加利福尼亚州Pasadena的一间工蓬后面从事简单操作起步开始，到如今成为在生命科学和临床诊断领域中所公认的世界领导者，贝克曼库尔特将其成就归功于三位企业家：已经去世的Arnold O. Beckman博士及Wallace，Joseph Coulter两兄弟。这三位伟人共同对科学和医学进行了革命，挽救了无数的生命，同时使人们的日常生活质量得以提高。他们当中的每一位都有一段不平凡的故事。在很大程度上，他们的故事实际上就是我们大家的故事。位于加利福尼亚州Fullerton公司总部的博览馆，为我们展现了公司的发展史。它展示了实验室仪器所经历的翻天覆地的演变过程。

美国贝克曼库尔特有限公司是一家开发和销售仪器，生化，软件以及能够简化和自动化实验室处理产品的公司。该公司的产品能够支持在与疾病战斗的各个阶段的生物医学分析－从前沿医学研究到患者血液检测。 在2004年，公司销售额为 24亿美元，其中70%的销售额来自临床诊断市场，30%来自生物医学研究市场。稀释后每股收入(不包括特种费用/特别信贷)为0.82。在2010年，公司销售额为 $37亿，其中87.6%的销售额来自临床诊断市场，12.4%来自生物医学研究市场。贝克曼重组于1988年， 在从SmithKline Beckman公司抽资脱离以后。在1998年，公司名称更改为美国贝克曼库尔特有限公司，反映出1997年与库尔特公司的并购关系。

身高：217CM

由贝克曼学院

你说的是不是这个Beckman Coulter Inc, Brea, CA 加利福尼亚州（CA）布雷亚贝（Brea）克曼库尔特股份有限公司(Beckman Coulter Inc)

当地残疾人康复中心。Beckman口肌评估与治疗，主要针对发音不清楚、流口水、厌食偏食、进食困难、脑瘫、发育迟缓、语言障碍儿童。该认证课程内容包括：1、口部骨骼、肌肉、口周运动模式、口周运动障碍等基础知识。2、口部及面部运动补偿处理技术，并进行手法实际操作，如：口咬合紧张，口咬合器具紧张，口部传导慢，舌肌紧张，舌肌推力过大，呛咳，干呕，呕吐等。3、身体反射，身体姿势与进食及口部运动的关系，及处理方法。4、学习口部运动的评估（Beckman评定量表），学习从评定结果中分析出患者的具体缺陷，从而设定具体的治疗方案对患者进行治疗。Beckman口肌证书都是在当地残疾人康复中心学习并考取证书。

等同于stop停止，相当于刹车。

贝克曼库尔特生物科技(苏州)有限公司联系方式：公司电话0512-62388567，公司邮箱xbao@beckman.com，该公司在爱企查共有9条联系方式，其中有电话号码4条。公司介绍：贝克曼库尔特生物科技(苏州)有限公司是2011-04-08在江苏省苏州市虎丘区成立的责任有限公司，注册地址位于苏州工业园区桑田街218号苏州生物产业园4号楼101、201、301。贝克曼库尔特生物科技(苏州)有限公司法定代表人赖冬梅，注册资本1,416.2万(元)，目前处于开业状态。通过爱企查查看贝克曼库尔特生物科技(苏州)有限公司更多经营信息和资讯。

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这个荧光微球每瓶的浓度都不一样，你只能买一瓶，然后里面的说明书会写你那瓶的浓度。你自己是找不到的

门锁坏了。离心机门锁分电子锁和机械锁，虽然机械锁可以锁上，但是由于电子锁的微动开关移位，造成无法锁住，信号通过线路传递给主板，主板保护功能启动，使电机无法正常运转所致。建议打开离心机外壳，将门锁重新安装一下，对应好电子锁扣与机械锁吻合，问题解决。如果没有效果，那就是检查一下离心机的散热风扇吧，可能被别住了，使之运转正常就好了。

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电池、屏幕或者接线坏了。1、屏幕不显示可以查看电池是否没电了，没电的万能表是无法工作的，若是，更换电池即可。2、其次检查屏幕，显示屏出现故障，数字就无法显示在上面。3、如果接线松了，接触不良或者没插好，也无法显示，重新插好即可。4、以上就是beckman3020万用表没显示的原因。

你好，现在一般学校都有了。很高兴为你解答，希望我的回答可以帮到你答题不易，如果满意请点下采纳，谢谢

在影片开头, 出现了这么一行字幕： “Any resemblance to people living or dead is purely accidental ... Especially you, Jenny Beckman ... Bitch". 据编剧Scott Neustadter承认，电影本身是依照他在London School of Economics读书时认识的一个叫"jenny beckman"的女孩写的. 电影里的故事，就是他们的故事. 这个貌似是Jenny Beckman的facebook.. http://www.facebook.com/profile.php?id=1170282017&v=wall&viewas=817408193 她不仅把the smith列在自己喜欢的音乐里，还是电影"500 days of summmer"的fan.而且还跟Scott Neustadter是朋友.. 而且长得跟 Zooey Deschanel有那么点儿神似.. 这是g出来的结果，可惜那个网页我打不开。lz可以试试看

作为过来人，建议FUP的离心机，安全稳定，操作好，实际使用中一些小的实用功能在科研实验上非常好用。

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转子主要有4 种类型：角式、外摆式、连续流式以及区带式。只有角式与外摆式转子是标准的实验室仪器，另外两种只用作专门用途。 角式转子 用途： 样品浓缩。实验室中的“苦力” 。 说明： 样品沿着与旋转平面成一定角度的方向离心。 优点： 离心见效最快。物质具有更高的相对离心力，比在外摆式转子中沉降快。机器的活动组件少，损坏机会小。 缺点： 物质被驱向离心管的管壁方向，然后沿管壁滑落，导致颗粒与管壁的摩擦。 例子： Sorvall SS -34 或Beckman JA-20 、近垂直转子(Beckman) 、高速离心的垂直转子。 外摆式转子（也称为水平转子） 用途： 材料分离。常在临床医疗中用来分离各种细胞。 说明： 样品将从旋转枢纽上甩向旋转平面。 优点： 材料必须经过离心管的整个长度，而且穿过管中通常呈黏性的介质。这对样品来说比较温和，而且可以保持梯度与分层。转子中的外摆桶可以更换，这样就可以采用不同大小与形状的离心管，不易导致气雾。 缺点： 更长表观离心力，沉淀要求的时间比角式转子要求的长。有很多活动部件。用久后更易损坏。 例子： SW55 Ti(Backman) 。 连续流式转子 用途： 在大容量液体中分离颗粒与细胞。例如，沉淀几升的细菌及单克隆抗体的制备。 说明： 设计用于大容量的分离，带有进样口与出样口。 随着样品液体缓慢而连续地加入离心机，管内的沉淀块逐渐增大。不同体系每小时可以处理10-100 L 不等。 优点： 可以处理的体积大。 缺点： 离心机必须配以进样口和出样口；清理与保养耗费时间；许多部件容易遗失或损坏；产生气雾。 例子： SharplesTM （用千奶酪的分离）， Avanti J 系列(Beckman) 。 区带转子 用途： 密度梯度上大规模分离颗粒，可以分离液体、细胞或组织样品。 说明： 细胞悬液与梯度介质可以用泵从专门的入口打进转子里面，速度可调，以选择性排出密度不同的细胞。 优点： 可处理的体积大。 缺点： 需一定技巧。 例子： 离心淘析器、CF-32Ti (Beckman) 。

在复古这个领域，基本上材料的好坏就完全决定了产品的质感，尤其是皮衣皮靴皮包这类皮革制品。下面介绍几家坚持传统艺能、始终生产高品质皮革的皮革厂，以及他们的代表皮料。 简单来说，认准这些有名气、有口碑的皮革厂，相比在文案中大吹特吹质感多么好成本多么高、却对到底用的什么皮含糊其辞的产品，明显会更稳一点。 P.S：为了避免图片版权问题， 有实物的皮我都尽量用自己的图了~此外也没有介绍的特别全 ，还有法国德国的好几家（Annonay、Hass、Weinheimer等等）都没写上去。 全文共计5200字，66图，预计阅读时间8分钟 这家百年皮厂的名气实在太大了，几乎所有入坑的朋友都知道。Horween的客户不要太多，基本上只要是叫得上名字的皮鞋品牌都用过他们的皮（当然国内一些叫不上名字的牌子也在用）：Wesco、White"s、Viberg、Alden、Wolverine、Chippewa、Clinch……不要太多。 产品线很广，包含大家熟悉的CXL、马臀、Latigo在内，一共有50多种皮革了。。。 全部介绍是不可能的，而且我也懂不了那么多，只能讲讲熟悉的： 工装上经常看到的皮，特点是油脂丰富，看着光亮，穿久了出茶芯patina，自修复性强。这是一种复合鞣制的全粒面皮，先铬鞣再植鞣，Horween介绍总共需要28个工作日鞣制完成。一般来说铬鞣的皮比较柔软，耐用；植鞣的皮比较硬，会产生好看的patina效果。CXL综合了铬鞣和植鞣的优点。 自购Loyal Stricklin的CXL酒红色牛皮↑ 因为过于常见，所以CXL的争议很大，有人说它过誉了，有人说是情怀，有人说易松面，还有人甚至说它是二层修面。。。 其中大部分是商家逐利行为 ：觉得CXL太常见没得吹价格透明卖不了高价，所以就踩一下CXL，去吹大家不了解的、利润高的皮。 自购Loyal Stricklin的CXL酒红色牛皮↑ 我只能说，以官网说法为准吧，霍尔文已经说CXL是全粒面了，而且是一种用秘制配方鞣制了100多年、相当成熟的皮种，口碑在那里，不然双W、Viberg、Alden他们也不会一直在用。 自购John Lofgren的CXL黑色牛皮↑ 我个人觉得CXL是一种综合性能不错，很适合工装旧化效果的皮，除了延展性大导致长期使用会被拉伸这种“缺点”外，综合性能是要比那些名不见经传的高价皮更好的。由于CXL大家都在用，出货量很大，所以总有幸存者偏差，由此还产生了国内CXL不如国外CXL的说法，让人比较无语。。。详细可以参考之前写的皮革松面文章，这里面的影响因素很多，不能简单的错误归因国内不如国外。 自购Shonest密度超高的CXL威士忌牛皮↑ CXL马皮牛皮都有，而且CXL马皮还会分前身皮（horsefront）和长条皮（Strip）。Aero喜欢用CXL马前身皮做皮衣。而长条皮因为靠近马屁股，一般来说密度高，生长纹少，拿来做鞋质感不错。 自购Shonest CXL Strip黑色马皮↑ H马臀被誉为皮革中的钻石，地位很高。由于物以稀而贵，所以很多人会对此产生信仰，即便没买过也喜欢把它挂在嘴边以凸显自己博学强知，甚至把它吹上天。其实说白了这就是一种很亮、密度很高、褶皱很特别的皮，以及加工繁琐、鞣制时间长，除此之外并没有太多值得吹的地方了。此外马臀很怕水，下雨最好别穿。 自购Horween Cigar色马臀↑ 再就是个人觉得H马臀和其他马臀（日本新禧、小川、宫内，英国Clayton，意大利马臀等等）是两种东西，鞋子的话能买H马臀就买H马臀。 与CXL一样也是复合鞣制的全粒面皮，但我个人感觉Latigo油脂没有CXL那么丰富，再就是会比CXL更硬一点。此外，不同颜色的Latigo，皮革性质也有所不同，不太好一概而论。比如Moc色的Latigo，看着就是皮革原色，密度相当大，同时也比较硬。 而Natural色的Latigo看起来是比原色皮更浅的颜色，呈现的却是柔软的质感。 自购Natural色Latigo旧化对比图↑ 很有趣的一种皮，用的是皮革的肉面，经过各种处理后上了一层蜡。因为蜡并不会附着的很牢固，所以一点磕碰剐蹭就会露出皮的底色，形成风味很浓的旧化效果，斑驳且粗犷。这是种令人爱憎分明的皮，喜欢的人会很喜欢，讨厌的人就觉得太粗犷了。。 据我在reddit上的了解，它就是CXL不做最后2步的染色抛光处理，然后使用皮革的肉面，在上面涂上蜡，就制成了waxed flesh，所以它也是一种耐用的复鞣全粒面皮。 说Dublin之前可以简单说下Essex，这是种植鞣革，据Horween所说用了和马臀同样的鞣制方法，但原材料是牛皮。常见的Essex是原色的，而Dublin则是Essex上蜡上油再经过处理的版本。从我买的Dublin来看，皮面普遍风格原始粗犷，生产纹比较常见。 自购Dublin English Tan↑ 一家创立比Horween更早的美国皮革厂， 历史 超过150年，主要制造各种原始粗犷的植鞣革。WC在国内的名气很低很低，比一些意大利皮革厂更没存在感，更别说Horween了。我试着在TB搜了搜，结果发现了海觉用这个植鞣革做的6mm厚重口味腰带，看起来旧化效果挺带感。 比较巧的是，Wickett & Craig也有一种名为Latigo的皮，密度很高并且还比较重磅，日本地位很高的Clinch就用过这种Latigo进行手工刷色： 感觉美国除了Horween之外，其他皮厂的名气都一般般了，而且都专注于植鞣革生产，不过 历史 都挺悠久的，比如上面的Wickett & Craig和这里的Hermann Oak。 Hermann Oak 1881年成立，官网上的产品类目主要有马具马缰、皮鞋中底、皮带条，而且，赫尔曼橡树也有Latigo。以前我只知道Horween有Latigo，检索了一番才知道原来大家都有。。。不过赫尔曼橡树的这个Latigo是100%植鞣的，不像Horween的是复合鞣制。 我自己买过赫尔曼橡树中底做的鞋： 以及使用赫尔曼橡树植鞣革带条的Companion： 这家美国皮革厂名字的缩写很好记，可以拿来骂人。因为被红翼爸爸收购了，所以S.B Foot的体量相对来说挺大的。 自购的875↑ 875用的Oro Legacy皮革，Beckman用的FeatherStone皮革，这些名字比较熟悉的皮都是S.B Foot出品。 自购的9016 Beckman↑ 说到iLcea可能知道的人不多，但如果提到Museum Calf，可能知道的人会多一点。iLcea就是生产Museum Calf博物馆小牛皮的皮革厂，成立于1930年代，但后来因为创始人作死而破产了，2014年被另一家意大利皮革公司Gruppo Vecchia Toscana收购。 比较瞩目的一种小牛皮，因为皮面颜色深浅不一、具有斑驳的大理石纹路而出名。最初是给Johh Lobb独家使用，后来慢慢地大家都在用了，而且在官网上iLcea把Museum Calf的名字改成了Radica，并且归到了Box calf这个类目下面。 自购红棕Museum Calf↑ 自购深棕Museum Calf↑ 自购铁灰Museum Calf，但是后处理后变成棕色了↑ 这个应该算是一个皮革大类了，好几个皮革厂都有这个名字的皮革，我只买过iLcea的Box calf，感觉就是一种密度和光泽度高、褶皱细腻的高品质铬鞣小牛皮。 自购深棕Box calf↑ 此外我还买过iLcea的Box铬鞣马皮，拿来做了皮衣，皮面特征和Box calf比较类似，但因为是马皮所以弯折的时候觉得更硬，密度更是夸张到穿不出多少褶子。。。但因为是铬鞣所以整体来说还是可以算比较软的。 自购日落黄box马皮↑ 此外，偶然在Style Forum上看到iLcea官方账号2014年宣布停产马皮，看来我这个以后可能会升值了。。。 这个厂，玩手工皮具的朋友可能听说过，经常看到的Mirvena Box就是他们生产的。Badalassi Carlo成立了40多年，是意大利植鞣革协会成员。 此外，业内最贵的工装靴——WhiteKloud白云，也有用他们的皮做鞋： 英国复刻皮衣品牌Bill Kelso有使用他们的植鞣牛皮做的哥萨克皮衣： 之前还看到Astell&Kern用他们的皮做播放器皮套： 大名鼎鼎的Guidi，是有自家皮革厂的，1896年就成立了。早期只是做着皮革厂该做的工作，而做鞋则是很后面的业务了。 Guidi皮革厂历年的客户也不少，其中大部分都是先锋品牌，比如Carpe Diem，Carol Christian Poell，Rick Owens，Layer-0，Incarnation等等。 Guidi最出名的就是植鞣做旧马皮，质感很棒。 自购Guidi马皮↑ 简称CFS，成立于1904年的英国皮厂，比Horween还早一年，但名气没那么大。CFS产品线也非常丰富，其中绒面革做的很不错，是Alden、Viberg、Visvim，还有一些英国一线鞋厂的供应商。 一种绒毛非常细腻的绒面小牛皮。CFS通过精选小牛皮原材料，使用独家鞣制配方制作而成，反面是柔软的绒面，正面是经过苯胺处理的全粒面。根据CFS官网的介绍——“这是我们最好的绒面皮”。 一些高价位的鞋履品牌会使用这种皮，比如Paolo Scafaro、Saint Crispin"s、Antonio Meccariello等等。 非洲野生羚羊皮，CFS使用与Janus Calf相同的鞣制方法来处理这种皮，这种鞣制方法可以最大限度保留皮面的自然特性，在此基础上又加入了足量的蜡质，最终的成品具备粒面自然、保留着原皮伤痕的特征，并且结合了高强度与高柔软度。 福伦达65APO拍的皮面细节↑ 按我自己的穿着体验，这种皮柔软有韧性，耐操又舒服。刚开始会觉得有点干，但穿了2年期间打理几次，逐渐吸收油蜡之后就会变得很光亮，是一种很有意思的皮。 自购waxed kudu，全新↑ 自购waxed kudu，2年旧化效果↑ J&F J.Baker，1862年因为创始人购买了一家皮革厂而成立，目前是英国最后一家还在用橡树进行鞣制皮革的皮厂。很多买皮带的朋友，嘴里说着的JF马缰，就是这个厂出品的。他们的植鞣革，鞣制过程异常漫长，上面介绍H马臀要鞣制6个月，而JF则要鞣制12个月。也难怪他们的皮带条要卖到两三百一根的高价了。 JF马缰的特点就是保留了皮面的原始风格，全粒面的皮革毛孔清晰可见，不像JE那样表层被处理过显得很光亮。不过各有各的好吧，有的人无法接受原始皮面更喜爱看着光亮的，但就皮质而言肯定JF更好点。 自购JF马缰腰带↑ 除了JF，英国做马缰的皮革厂还有J&E Sedgwick、Clayton、TWS，感觉产品线都很重合，都是各种马缰马具、高端皮中底，就不多说了。 自购JE马缰腰带↑ 经常提到的日本新禧就是它了，成立也比较早，1951年到现在快70年了。专注于制造马皮、马臀，很多日本品牌的皮衣如FreeWheelers、The Real Mccoy"s、Buco用的就是新禧马皮，同时，美国的Himel Bros、Good wear也很喜欢用，Himel Bros的创始人甚至说新禧马皮是世界上最好的皮衣用皮（对此我很存疑。。。把天神枥木、CXL马长条、加州小熊、Guidi马皮都不放在眼里吗？） 使用新禧马皮的FW穆赫兰道： 新禧马臀拿来做包做小物件我觉得还可以，我自己有一个墨绿新禧马臀钱包，但拿来做鞋还是算了，锁死H马臀吧。 自购新禧马臀钱包↑ 除了新禧，日本还有很多小型皮革厂，比如聚集在栃木县的那些，但有些皮厂小到连官网都没有，实在是没法介绍了。这点有点类似于意大利的托斯卡纳地区，那里也有一堆小皮厂，但因为太小，所以很多人就直接叫托斯卡纳皮了。。。 写了这么多，也许有朋友会问，你最推荐什么皮？我想说这个问题没有很好的答案， 不同皮，特性不同价格不同玩法也不同，我觉得只有符合你喜好的才是合适的皮。再说了，我写在文章里面的基本上都是好皮。 有的皮很重磅很硬核，有的皮很油亮，有的皮很舒服，有的皮旧化patina明显，根据自己的喜好来，明白自己到底想要什么，再进行选择就行了。 千万别告诉我你自己都不知道自己想要什么，如果真这样那我只能说：不买立省100%。

找个爷们使劲拔出来。不过要特别小心别磕了下巴

流式细胞仪目前主流品牌是BD和Beckman，其他的还有Fisher，Millipore等。建议你购买的时候不要光看品牌，要看你购买仪器的用途，做的啥实验，要求是什么。就算是同一个品牌，同一个型号，配置的不同，价格也可能相差非常多。其他要考虑的因素还包括售后服务的价格，便利程度，技术支持的水平，耗材的成本，软件的操作这些。

电机异常。贝克曼离心机error28的意思贝克曼离心机的电机异常导致的，需要前往售后店铺进行维修，贝克曼离心机是将样品进行分离的仪器，广泛应用干生物医学、石油化工、农业、食品卫生等领域，它利用不同物质在离心力场中沉淀速度的差异，实现样品的分析分离。

目前2个公司几乎垄断了流式细胞仪。一个是BD. 还有一个是Beckman Coulterhttp://www.coulterflow.com/bciflow/homeus.phphttp://www.bdbiosciences.com/instruments/

我来答，lmd文件是Beckman机器的ListMode文件格式，您可以用免费的WinMDI打开哈。

单增李斯特菌生物膜制备方法：1、将-80℃冻存的菌株接种于固体BHI培养基，置于37℃培养18h进行活化。挑取单菌落于5mL液体BHI培养基中，37℃、200r/min培养过夜。次日，按1:100的比例转移至1L新鲜液体BHI培养基中继续培养至OD600为1.0。2、2.2超滤浓缩法提取膜囊泡当细菌培养至OD600为1.0时，4℃、6000r/min离心20min收集上清液，经0.45μm或0.22μm滤器过滤，除去细胞碎片等杂质后转移至截留相对分子质量100kD的超滤浓缩管中，4℃、4000r/min离心20min。取浓缩液，经4℃、31174r/min离心3h后弃上清，用10mL的磷酸缓冲液悬浮沉淀，重复离心一次后，将沉淀重悬于1mL磷酸缓冲液中，经0.22μm滤器过滤后进行无菌检验，鉴定其无菌后于-80℃保存，即为提取的膜囊泡。将所提取的EGDe、EGDeΔprfA和EGDeΔprfA+pERL3-prfA*的膜囊泡分别表示为EGDe-MVs、ΔprfA-MVs和prfA*-MVs。3、Optiprep密度梯度离心法提取膜囊泡Optiprep梯度离心液用DMEM分别配制成浓度为25%、30%、35%、40%和45%。吸取经过超滤浓缩法(同1.2.2)提取的1mL产物转移至Beckman离心管中，再依次加入2mL的45%、40%、35%、30%和25%Optiprep，于4℃、31174r/min进行超速离心15h。离心完毕后，小心收集30%-35%的组分于Beckman离心管中，并加入10mL磷酸缓冲液，再次进行超速离心。重复离心3次后弃上清，将沉淀重悬于1mL磷酸缓冲液中，经0.22μm的滤器过滤后进行无菌检验，鉴定其无菌后于-80℃保存，即为提取的膜囊泡。4、BCA法测定膜囊泡的蛋白浓度并计算膜囊泡的产率MVs蛋白浓度的具体测定方法参见BCA蛋白浓度测定试剂盒说明书。利用稀释平板涂布法统计OD600为1.0时的菌落数，以每1013个CFU获得的蛋白量(μg)为膜囊泡的产率。5、负染电镜观察膜囊泡的形态将铜网浸泡在MVs样品中吸附大约20min后取出，用滤纸与铜网垂直接触以除去多余液体。随后将铜网浸泡在PTA染液中染色5min，取出后于阴凉处自然干燥2-3d，即可用于电镜观察。6、对细菌生物被膜形成的影响细菌生物被膜的培养及检测参照冯飞飞等[10]的方法。将3株细菌的MVs稀释至同一浓度(0.2mg/mL)后，按照1:1的比例分别取100μL相应的MVs加入到含100μL菌液(同种菌株或者不同种菌株)的96孔板中。另设置2组不含MVs的参照：一组加入等量菌液，另一组加入等量的磷酸缓冲液。待上述操作完毕后，将96孔板置于37℃分别培养24、48和72h。培养相应时间后，酶标仪测定其OD600值，以检测其生长情况；随后弃去各孔培养基，所生成的生物被膜经蒸馏水洗涤，室温干燥后，用1%乙二酸铵结晶紫染色，并测定其OD595的光吸收值。所获得的试验数据使用Origin8和SPSS22进行分析处理。结晶紫染色后的生物被膜直接置于倒置显微镜下观察，拍照记录。7、膜囊泡的溶血活性检测溶血活性的测定参考于新惠等[12]的方法。将来源于不同菌株的MVs稀释至同一浓度(0.2mg/mL)后，分别取一定量的MVs加入含1mL红细胞悬液的离心管中，阴性对照组加入等量的磷酸缓冲液，阳性对照组加入等量的无菌水；另取等量的MVs加入1mL红细胞悬液后再添加2mmol/LDTT。将以上离心管置于37℃孵育3h后，室温、2600r/min离心5min，吸取800μL上清于一次性比色皿中测定OD543的值，即为MVs的溶血活性值。8、膜囊泡对棉铃虫幼虫体重、存活率和化蛹率以及幼虫发育时间的影响选取生理状态基本一致的4龄棉铃虫幼虫置于冰上麻醉2h待用[13]。将来源于不同菌株的MVs稀释至同一浓度(0.2mg/mL)后，吸取5μLLm-MVs自幼虫第一腹足下注入，对照组注入等量磷酸缓冲液，每组18条幼虫。注射完成后每隔24h称取幼虫体重，并统计存活率、化蛹率及幼虫发育时间(自购买之日起至末龄)，数据的计算方法为：化蛹率=蛹数/试虫总数×100%；存活率=存活数/试虫总数×100%。

顺时针方向右拧紧。1、打开电源开关，按OPENDOOR键，向上抬起离心机的门。2、用双手轻轻地放下所需转子，将紧固螺旋用手按顺时针方向右拧紧，再用特殊配置的扳手拧紧一圈，然后把平衡好的样品对称放在转子上，盖上合适的盖子，再次用手拧紧螺栓，并用扳手拧紧一圈固定。3、关上离心机的门，确认左右两个锁扣均已平衡关上。打不开的可以联系售后，询问售后具体怎么打开，或者直接询问售后可不可以到家里进行演示。

BECKMAN AcT diff2血细胞分析仪为BECKMAN COULTER公司生产的三分类血细胞分析仪。为了进一步了解BECKMAN AcT diff2血细胞分析仪设有的全血(WB)和预稀释(PD)两模式之间的差异，我们采用2种模式3组实验结果对仪器主要指标的精密度进行了统计分析，报告如下： 1 资料与方法 1.1 一般资料 仪器：BECKMAN AcT diff2血细胞分析仪，美国BECKMAN COULTER公司生产。试剂：稀释液(BECKMAN COULTER公司生产，批号：509023C)，EDTAK2抗凝管(BD公司生产)。标本来源：抽取1名健康志愿者静脉血6.0 mL，分瓶注入3支EDTAK2抗凝管中，每管2.0 mL。 1.2 方法 实验前将吸管、微量吸管进行校正，按要求做WB和PD模式质控，保证仪器处于良好工作状态。WB模式为1组，PD模式分为2组，其中一组由1名经验相对丰富工作人员完成，另一组由多名工作人员完成。3组依次交替进行，所有测定在1 h内完成［1］。 1.3 统计学处理 SPSS10.0软件采用配对t检验，P＜0.05为差异有显著性。 2 结 果 配对t检验结果表明：WB模式与PD模式，同一操作者结果之间WBC、GR、LY#、RDW差异无显著性(P＞0.05)，其中LY#变异最大。RBC、HB、HCT、MCV、MCH、MCHC、PLT、LY、MO、MO#、GR#、RDW、MPV差异有显著性(P＜0.05)。WB模式与PD模式不同操作者结果之间WBC、HB差异无显著性(P＞0.05)。RBC、HCT、MCU、MCHC、PLT、LY、MO、GR、LY＃、MO＃、GR＃、RDW、MPV差异有显著性(P＜0.05)。PD模式同一操作者与不同操作者结果WBC、RBC、MCH、PLT、LY、MO、GR、LY#、MO#、GR#、RDW、MPV差异无显著性(P＞0.05)，HB、HCT、MCV差异有显著性(P＜0.05)。WB模式与PD模式3组结果：WBC差异无显著性(P＞0.05)，其他项目差异有显著性(P＜0.05)。结果见表1。表1 两种操作模式3组测定结果 3 讨 论 WB模式与PD模式之间，PD模式2组实验结果的精密度显著低于WB模式组，主要与测定时稀释液及样品量准确与否(稀释倍数)密切相关。WB模式与PD模式结果之间除WBC外，其余结果均有显著差异。而PD模式2组结果之间除少数项目外，大部分项目之间差异无显著性，说明两种模式之间存在差异，与操作者不同因素关系不大。在细胞分类中，以中间细胞的变异最大，其次是淋巴细胞和中性粒细胞。相对大小型细胞来讲，中间细胞(嗜碱和嗜酸细胞)相对含量最少，较小的计数误差可产生大的变异，随着中间细胞含量的增加，其变异度将会减少。实际工作中还会遇到血液本身因素［2］(高脂血、高胆红素等)，以及其他因素［3］对个别参数正负偏差的影响，除去这些复杂的影响因素，针对同一标本而言，有条件使用WB模式的尽量不用PD模式；若特殊情况，必须使用PD模式，除保证所用计量器具准确和严格规范操作外，还应建立自己实验室的正常参考范围。

测序方案建立在双脱氧测序法(Sanger等，1977)的基础上。为了从每一克隆插入片段两端成对地进行测序，每一个质粒模板DNA板应配备两个384孔循环测序反应板。测序反应采用Big Dye Terminator chemistry version 3．1(AppliedBiosystems)和标准M13或常用正向引物和反向引物。测序反应通过BiomekFX(Beckman)移液操作工作站建立。机械臂负责等分模板试样，起与反应液混合的作用，反应液含有双脱氧核苷酸、荧光标记的核苷酸、TaqDNA聚合酶、序列引物和缓冲液。模板和反应板有条形码，且在BiomekFX移液操作工作站上有条形码读取器跟踪，确保模板和反应液转移中没有错误。30～40线性扩增步骤连续循环在MJResearchTetrads或9700热循环仪(Ap—pliedBiosystems)中进行。反应产物可以用异丙醇在室温下高效率沉淀，4C下保存或悬浮在水中密闭保存。如果测序仪器正常，在扫描反应板的条形码后，会自动为每一反应板生成一个样品膜。然后将反应板移至一台ABIPrism3700DNA分析仪或AppliedBiosystems 3730xiDNA分析仪上，进行电泳。现在的多聚体和软件允许每天在ABIPrism 3700 DNA分析仪上进行8次电泳，在AppliedBiosystems 3730xlDNA分析仪上进行12次，调试时间少于1h。平行运行大量工作的高通量测序设备通常需要通过实验室信息管理和样品跟踪系统(1aboratory information management and sample tracking system，LIMS)(Kerlavage等，1993)进行自动化管理。在TIGR，这种系统包括从文库构建早期经测序到结束的样品跟踪的整套软件。经过这种处理，数据保存在Sybase关系数据库表格中。数据库储存和联系在整个基因组测序流程中所收集的全部数据，允许使用者以各种方式回溯数据流，可从已经注释的基因回溯到基因的原始测序跟踪文件。这个系统包括样品管理、数据输入、文库管理和序列加工的客户端/服务器应用软件。经过多年改进，并且结合新的实验室方法、新型的仪器和软件，这一系统已成熟稳定。这些整合应用包括自动载体清除、确定和屏蔽重复元件、发现污染的克隆和跟踪克隆及模板信息。在测序流程中，生成的模板和序列的质量每天可通过用户友好界面系统地监控。这就保证了迅速发现并改正工作中的潜在问题。通常，质量控制和质量测评(qualitycontrol/qualityassessment，QC/QA)组共同应用质量检测标准。他们负责检验和提供试剂给生产组，并在流程中检测模板质量、调查失败和偏离正常表现范围的情况、监控数据质量、审计、确定可改进的方面、制作控制文件(标准操作步骤)，以保证这些文件具有格式上的一致性和技术上的准确性。

选手名:nbsp;Candicenbsp;Michelle真实姓名:nbsp;Candicenbsp;Michellenbsp;Beckman-Ehrlich出生日期:1978年9月30日家乡:威斯康辛州密尔沃基市nbsp;身高:167CM(5英尺7英寸)首次登台:2004年11月15日长期对手:Melinanbsp;PerezAshleynbsp;MassaroTorrienbsp;WilsonMickienbsp;James2006年3月《花花公子》杂志封面女郎(作者:钢铁长城内斯塔)Candice新闻动态[2007-12-9]nbsp;Candicenbsp;Michellenbsp;在nbsp;WWE.com有了新的部落客。她最近在手腕的内部有了新的纹身。[2007-12-3]nbsp;WWE的计划是让Bethnbsp;Phoenix保持女子腰带,再于WM24会一会Candicenbsp;Michelle.nbsp;[2007-12-1]nbsp;Candicenbsp;Michellenbsp;基本可以确定于12月29日回归.(作者：GreenCnbsp;)[2007-12-1]nbsp;根据一些地方的广告，Bobbynbsp;Lashley将会在12月的某个时间内回归，很有可能是在Armageddon之后...另外上个月意外受伤的Candicenbsp;Michelle据说也会在那段时间回归。[2007-11-8]nbsp;Candicenbsp;Michelle再度为Gonbsp;Daddy拍广告[2007-10-24]nbsp;WWE官方宣布Candicenbsp;Michelle因在昨晚RAW女子冠军争夺赛中不慎跌落,造成锁骨断裂,将修养6-8个星期,但她无须动任何的手术.[2007-10-23]nbsp;Candicenbsp;Michellenbsp;受伤了!!!在今晚举行的RAW中,Candicenbsp;Michellenbsp;在与Bethnbsp;Phoenix争夺女子冠军头衔时,不慎被Bethnbsp;Phoenix击落至擂台中央.比赛快快的结速了,Candicenbsp;Michellenbsp;则被医护人员担架伺候,稍后送到医院,估计是肩部受伤.[2007-10-21]nbsp;Thenbsp;Miaminbsp;Heraldamp;lt;迈阿密先驱报amp;gt;有一篇前WWEnbsp;Divanbsp;Sable的文章,她在文中批评现在WWE的Divaamp;lt;esamp;gt;,说她们只能当花瓶,没有任何摔角能力.但他很看好Bethnbsp;Phoenix,Candicenbsp;Michelle,Victoria和Mickienbsp;James.[2007-10-2]nbsp;另一场Nonbsp;Mercy的新增比赛nbsp;,nbsp;Bethnbsp;Phoenix对Candicenbsp;Michelle的女子头衔战nbsp;[2007-9-30]nbsp;以下是出席澳大利亚表演的摔角手Johnnbsp;Cena,nbsp;Triplenbsp;H,nbsp;Randynbsp;Orton,nbsp;Umaga,nbsp;Jeffnbsp;Hardy,nbsp;Mr.nbsp;Kennedy,nbsp;Paulnbsp;Londonnbsp;amp;nbsp;Briannbsp;Kendrick,nbsp;Lancenbsp;Cadenbsp;amp;nbsp;Trevornbsp;Murdoch,nbsp;Candicenbsp;Michelle,nbsp;Bethnbsp;Phoenix,nbsp;Jilliannbsp;Hall,nbsp;Williamnbsp;Regal,nbsp;Valnbsp;Venis,nbsp;Snitsky,nbsp;Hacksawnbsp;Jimnbsp;Duggan,nbsp;Thenbsp;Highlanders,nbsp;Sheltonnbsp;Benjaminnbsp;amp;nbsp;Charlienbsp;Haas,nbsp;Codynbsp;Rhodesnbsp;andnbsp;Daivari.nbsp;[2007-9-6]nbsp;以下是nbsp;JRnbsp;的新文章摘录：nbsp;WWE女郎的进步nbsp;nbsp;「Candicenbsp;Michellenbsp;正在大幅地进步，从她最初的表现来比较的话，她是极其优秀的成长着。nbsp;nbsp;Candicenbsp;是现在最火辣的当日好菜，至少直到她在nbsp;Unforgivennbsp;对上nbsp;Bethnbsp;Phoenixnbsp;之前。nbsp;nbsp;我很佩服她的工作伦理、以及旺盛的求学心。」nbsp;nbsp;Shawnnbsp;Michaelnbsp;的回归nbsp;nbsp;「我并未听闻nbsp;HBKnbsp;回归的确切日期，我认为那会在十一月左右。nbsp;nbsp;我听说他养伤的状况良好，但还需要一段时间来恢复身为nbsp;Shawnnbsp;Michaelsnbsp;该有的水准。nbsp;nbsp;我们真的很希望他赶快回到nbsp;RAW，但我希望他不要急，先等到他完全健康时再回来。」nbsp;nbsp;Punknbsp;前程似锦nbsp;「我很喜爱nbsp;CMnbsp;Punknbsp;的擂台风格、以及他对事业的参与度。nbsp;nbsp;Punknbsp;的前程似锦，希望他别受伤，并避免做出同辈常做的错误决

支持下国产 北分厂的也不错啊

超市特工1月份就完结了，LZ记得第四季末尾Morgan载入了intersect，那是坏的会吃脑子，到第五季Morgan已经疯的不成样了连Alex都记不得，最终在第3集帮他卸载了；Chuck和Sarah是新婚夫妇，caseay也有了个俄国女朋友verbanski（黑客帝国里的女主），小组开创了Carmicheal Industry，先后消灭了许多坏蛋：Decker炸死了，shaw入狱了，Sarah的腹黑联络人也中刀了（由此Sarah有个小妹妹），幕后大boss，quinn浮出水面，是为了原版的intersect眼镜（原版的也可以恢复Sarah的记忆）~然后Chuck遭绑，Sarah无奈戴上了万恶的眼镜…于是Sarah变态了，忘掉了所有人……在分成两集的大结局中Sarah被Chuck的真情感动，想起了一些事情，紧要关头Chuck使用了正义眼镜，拆除炸弹，大家合力干掉了quinn，恢复世界和平。但Sarah的记忆由此拜拜。大结局是小组恢复清白，beckman将军致谢，caseay和verbanski在一起，Morgan与Alex同居，jeffster也去了德国走星光大道，subway入驻买多多了；Chuck在黄昏的海滩找到Sarah，两人谈心，在插曲Rivers and roads中亲吻。Sarah失去了记忆，Chuck又载入了intersect，开放式结局。编剧说以后出了DVD还有很多加长片段，而且会出电影版。放心看吧

JohnBeckmanJohnBeckman是一名演员，主要作品有《同性三分亲》、《猛鬼街4》。外文名：JohnBeckman职业：演员代表作品：《同性三分亲》合作人物：哈维·费斯特恩

CandiceBeckmanCandiceBeckman是一名演员，主要作品有《The25thAnniversaryofWrestleMania》《恐怖万圣节》《WWENoMercy》。外文名：CandiceBeckman职业：演员代表作品：《恐怖万圣节》合作人物：乔·艾斯特维兹

门锁坏了。离心机门锁分电子锁和机械锁，虽然机械锁可以锁上，但是由于电子锁的微动开关移位，造成无法锁住，信号通过线路传递给主板，主板保护功能启动，使电机无法正常运转所致。 建议打开离心机外壳，将门锁重新安装一下，对应好电子锁扣与机械锁吻合，问题解决。如果没有效果，那就是检查一下离心机的散热风扇吧，可能被别住了，使之运转正常就好了。

ChrisBeckman外文名：ChrisBeckman职业：演员代表作品：《真实的世界》合作人物：AceAmerson，AdamKing电视剧作品

bitch，口语里经常表示婊子，用来骂女人的

BD公司的 就是很贵 但是性能确实好 很多实验室都用的是BD公司的

DCBDC 本文讲述了英国人怎样互相做以称呼.说了见到男性会说MR+姓氏,如果互相熟悉则可以直接称呼他的名字.见到女性且不知道她是否结婚,会说MS+姓氏.文末讲了英国姓名的来历有很多方式,举了rose 和 wolf的例子.,9,26.D 27.C 28.B 29.D 30.C,1,26. D 27.C 28.B. 29.D 30.C,0,dcbdc,0,In England,people never use Mr,Mrs,Miss or Ms before their first names.They use them with their family names.If you meet a man with the name Philip Allan Beckman,you can call him Mr.Beckman.If you"re very close,you can call him Philip.If you meet a woman named Alice White,and you don"t know whether she is married or not married,you can tell her Ms.White.In English,people call Elizabeth “Liz” for short. The English names e from different things.For example,“Rose” es from a kind of flower.And “wolf” es from a animal.To many people,the meaning of a name is very important. 26.In English,people use Mr,Mrs,Miss or Ms before their __________ names. A.first B.given C.middle D.last 27.If you"re not close with Philip Allan Beckman,you can call him_______. A.Philip B.Mr Philip C.Mr Beckman D.Mr Allan 28.You don"t know whether Alice White is married or not,you can call her ________. A.Mrs White B.Ms White C.Ms Alice D.madam White 29.English names e from ________. A.flowers B.animals C.flowers and animals D.different things 30.To many people,the meaning of a name is _________. A.popular B.easy C.important D.good

转子的类型及用途北京英格恩赵2022-05-25 14:43·字数:723·阅读:318转子主要有4 种类型：角式、外摆式、连续流式以及区带式。只有角式与外摆式转子是标准的实验室仪器，另外两种只用作专门用途。角式转子用途：样品浓缩。实验室中的“苦力” 。说明：样品沿着与旋转平面成一定角度的方向离心。优点：离心见效最快。物质具有更高的相对离心力，比在外摆式转子中沉降快。机器的活动组件少，损坏机会小。缺点：物质被驱向离心管的管壁方向，然后沿管壁滑落，导致颗粒与管壁的摩擦。例子：Sorvall SS -34 或Beckman JA-20 、近垂直转子(Beckman) 、高速离心的垂直转子。外摆式转子（也称为水平转子）用途：材料分离。常在临床医疗中用来分离各种细胞。说明：样品将从旋转枢纽上甩向旋转平面。优点：材料必须经过离心管的整个长度，而且穿过管中通常呈黏性的介质。这对样品来说比较温和，而且可以保持梯度与分层。转子中的外摆桶可以更换，这样就可以采用不同大小与形状的离心管，不易导致气雾。缺点：更长表观离心力，沉淀要求的时间比角式转子要求的长。有很多活动部件。用久后更易损坏。例子：SW55 Ti(Backman) 。连续流式转子用途：在大容量液体中分离颗粒与细胞。例如，沉淀几升的细菌及单克隆抗体的制备。说明：设计用于大容量的分离，带有进样口与出样口。随着样品液体缓慢而连续地加入离心机，管内的沉淀块逐渐增大。不同体系每小时可以处理10-100 L 不等。优点：可以处理的体积大。缺点：离心机必须配以进样口和出样口；清理与保养耗费时间；许多部件容易遗失或损坏；产生气雾。例子：SharplesTM （用千奶酪的分离）， Avanti J 系列(Beckman) 。区带转子用途：密度梯度上大规模分离颗粒，可以分离液体、细胞或组织样品。说明：细胞悬液与梯度介质可以用泵从专门的入口打进转子里面，速度可调，以选择性排出密度不同的细胞。优点：可处理的体积大。缺点：需一定技巧。例子：离心淘析器、CF-32Ti (Beckman

我来答，lmd文件是Beckman机器的ListMode文件格式，您可以用免费的WinMDI打开哈。

核酸的性质 核酸的理化性质及研究方法内容十分庞杂，本节只可能对若干比较重要的核酸理化性质和研究方法作概要叙述。 一、一般物理性质 1. 溶解度 DNA为白色纤维状固体，RNA为白色粉末状固体，它们都微溶于水，其钠盐在水中的溶解度较大。它们可溶于2-甲氧乙醇，但不溶于乙醇、乙醚和氯仿等一般有机溶剂，因此，常用乙醇从溶液中沉淀核酸，当乙醇浓度达50%时，DNA就沉淀出来，当乙醇浓度达75%时RNA也沉淀出来。DNA和RNA在细胞内常与蛋白质结合成核蛋白，两种核蛋白在盐溶液中的溶解度不同，DNA核蛋白难溶于0.14mol/L的NaCl溶液，可溶于高浓度（1~2mol/L）的NaCl溶液，而RNA核蛋白则易溶于0.14mol/L的NaCl溶液，因此常用不同浓度的盐溶液分离两种核蛋白。 2. 分子大小 DNA分子极大，分子量在106以上，RNA的分子比DNA分子小得多。核酸分子的大小可用长度、核苷酸对（或碱基对）数目、沉降系数（S）和分子量等来表示。 3. 形状及粘度 核酸（特别是线形DNA）分子极为细长，其直径与长度之比可达1：107，因此核酸溶液的粘度很大，即使是很稀的DNA溶液也有很大的粘度。RNA溶液的粘度要小得多。核酸若发生变性或降解，其溶液的粘度降低。 二、核酸的紫外吸收 嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键，使碱基、核苷、核苷酸和核酸在240~290nm的紫外波段有一强烈的吸收峰，因此核酸具有紫外吸收特性。DNA钠盐的紫外吸收在260nm附近有最大吸收值（图3-25），其吸光率（absorbance）以A260表示，A260是核酸的重要性质，在核酸的研究中很有用处。在230nm处为吸收低谷，RNA钠盐的吸收曲线与DNA无明显区别。不同核苷酸有不同的吸收特性。所以可以用紫外分光光度计加以定量及定性测定。 实验室中最常用的是定量测定小量的DNA或RNA。对待测样品是否纯品可用紫外分光光度计读出260nm与280nm的OD值，因为蛋白质的最大吸收在280nm处，因此从A260/A280的比值即可判断样品的纯度。纯DNA的A260/A280应为1.8，纯RNA应为2.0。样品中如含有杂蛋白及苯酚，A260/A280比值即明显降低。不纯的样品不能用紫外吸收法作定量测定。对于纯的核酸溶液，测定A260，即可利用核酸的比吸光系数计算溶液中核酸的量，核酸的比吸光系数是指浓度为1μg／mL的核酸水溶液在260nm处的吸光率，天然状态的双链DNA的比吸光系数为0.020，变性DNA和RNA的比吸光系数为0.022。通常以1OD值相当于50μg／mL双螺旋DNA，或40μg／mL单螺旋DNA（或RNA），或20μg／mL寡核苷酸计算。这个方法既快速，又相当准确，而且不会浪费样品。对于不纯的核酸可以用琼脂糖凝胶电泳分离出区带后，经啡啶溴红染色而粗略地估计其含量。 三、核酸的沉降特性 溶液中的核酸分子在引力场中可以下沉。不同构象的核酸（线形，开环，超螺旋结构）、蛋白质及其他杂质在超离心机的强大引力场中，沉降的速率有很大差异，所以可以用超离心法纯化核酸，或将不同构象的核酸进行分离，也可以测定核酸的沉降常数与分子量。 应用不同介质组成密度梯度进行超离心分离核酸时，效果较好。RNA分离常用蔗糖梯度。分离DNA时用得最多的是氯化铯梯度。氯化铯在水中有很大的溶解度。可以制成浓度很高（8mol／L）的溶液。 应用啡啶溴红—氯化铯密度梯度平衡超离心，很容易将不同构象的DNA、RNA及蛋白质分开。这个方法是目前实验室中纯化质粒DNA时最常用的方法。如果应用垂直转头，当转速为65 000r/min（Beckman L-70超离心机），只要6h即可以完成分离工作。但是如果采用角转头，转速为45 000r/min时，则需36h。离心完毕后，离心管中各种成分的分布可以在紫外光照射下显示得一清二楚（图3-26）。蛋白质漂浮在最上面，RNA沉淀在底部。超螺旋DNA沉降较快，开环及线形DNA沉降较慢。用注射针头从离心管侧面在超螺旋DNA区带部位刺入，收集这一区带的DNA。用异戊醇抽提收集到的DNA以除去染料，然后透析除CsCl，再用苯酚抽提1~2次，即可用乙醇将DNA沉淀出来。这样得到的DNA有很高的纯度， 可供DNA重组、测定序列及绘制限制酶图谱等。在少数情况下，需要特别纯的DNA时，可以将此DNA样品再进行一次氯化铯密度梯度超离心分离。 四、核酸的两性解离及凝胶电泳 核酸既含有呈酸性的磷酸基团，又含有呈弱碱性的碱基，故为两性电解质，可发生两性解离。但磷酸的酸性较强，在核酸中除末端磷酸基团外，所有形成磷酸二酯键的磷酸基团仍可解离出一个H+，其pK为1.5；而嘌呤和嘧啶碱基为含氮杂环，又有各种取代基，既有碱性解离又有酸性解离的性质，解离情况复杂，但总的来看，它们呈弱碱性。所以，核酸相当于多元酸，具有较强的酸性，当pK>4时，磷酸基团全部解离，呈多阴离子状态。 核酸是具有较强的酸性的两性电解质，其解离状态随溶液的pH而改变。当核酸分子的酸性解离和碱性解离程度相等，所带的正电荷与负电荷相等，即成为两性离子，此时核酸溶液的pH就称为等电点（isoelectric point, 简称pI）。核酸的等电点较低，如酵母RNA的pI为2.0~2.8。根据核酸在等电点时溶解度最小的性质，把pH调至RNA的等电点，可使RNA从溶液中沉淀出来。 根据核酸的解离性质，用中性或偏碱性的缓冲液使核酸解离成阴离子，置于电场中便向阳极移动，这就是电泳（electrophoresis）。凝胶电泳可算是当前核酸研究中最常用的方法了。它有许多优点：简单、快速、灵敏、成本低。常用的凝胶电泳有琼脂糖（agarose）凝胶电泳和聚丙烯酰胺（polyacrylamide）凝胶电泳。可以在水平或垂直的电泳槽中进行。凝胶电泳兼有分子筛和电泳双重效果，所以分离效率很高。 (一)琼脂糖凝胶电泳 以琼脂糖为支持物。电泳的迁移率决定于以下因素： 1. 核酸分子大小 迁移率与分子量对数成反比； 2. 胶浓度 迁移率与胶浓度成反比。常用1%胶分离DNA； 3．DNA的构象 一般条件下超螺旋DNA的迁移率最快，线形DNA其次，开环形最慢。但在胶中加入过多的啡啶溴红时，上述分布次序会发生改变； 4．电压 一般不大于5V／cm。在适当的电压差时，迁移率与电流大小成正比； 5．碱基组成 有一定影响，但影响不大； 6．温度 4~30℃都可，常在室温。 琼脂糖凝胶电泳常用于分析DNA。由于琼脂糖制品中往往带有核糖核酸酶（RNase）杂质，所以用于分析RNA时，必须加入蛋白质变性剂，如甲醛等，以使核糖核酸酶变性。 电泳完毕后，将胶在荧光染料啡啶溴红的水溶液中染色（0.5μg／ml）。啡啶溴红为一扁平分子，很易插入DNA中的碱基对之间。DNA与啡啶溴红结合后，经紫外光照射，可发射出红—橙色可见荧光。0.1μgDNA即可用此法检出，所以此法十分灵敏。可根据荧光强度可以大体判断DNA样品的浓度。若在同一胶上加一已知浓度的DNA作参考，则所测得的样品浓度更为准确。可以用灵敏度很高的负片将凝胶上所呈现的电泳图谱在紫外光照射下拍摄下来，作进一步分析与长期保留。图3-27即为凝胶电泳图谱。 应用凝胶电泳可以正确地测定DNA片段的分子大小。实用的方法是在同一胶上加一已知分子量的样品（如图3-27中的λDNA／HindⅢ的片段）。电泳完毕后，经啡啶溴红染色、照相，从照片上比较待测样品中的DNA片段与标准样品中的哪一条带最接近，即可推算出未知样品中各片段的大小。目前许多试剂公司都能提供各种不同分子量的标准样品。凝胶上的样品，还可以设法回收，以供进一步研究。回收的方法很多，可参考其他资料。最常用的方法是在紫外光照射下将胶上某一区带切割下来，切下的胶条放在透析袋中，装上电泳液，在水平电泳槽中进行电泳，使胶上的DNA释放出来并进一步粘在透析袋内壁上，电泳3~4小时后，将电极倒转，再通电30~60s，粘在壁上的DNA重又释放到缓冲液中。取出透析袋内的缓冲液（丢弃胶条），用苯酚抽提1~2次，水相用乙醇沉淀。这样回收的DNA纯度很高，可供进一步进行限制酶分析、序列分析或作末端标记。回收率在50%以上。 （二）聚丙烯酰胺凝胶电泳 以聚丙烯酰胺作支持物。常用垂直板电泳。单体丙烯酰胺在加入交联剂后，就成聚丙烯酰胺。由于这种凝胶的孔径比琼脂糖凝胶的要小，所以可用于分析分子量小于1 000bp的DNA片段。聚丙烯酰胺中一般不含有RNase，所以可用于RNA的分析。但仍要留心缓冲液及其他器皿中所带的RNase。 聚丙烯酰胺凝胶上的核酸样品，经啡啶溴红染色，在紫外光照射下，发出的荧光很弱，所以浓度很低的核酸样品不能用此法检测出来。 五、核酸的变性、复性 （一）变性 变性（denaturation）作用是核酸的重要物化性质。核酸的变性指核酸双螺旋区的氢键断裂，变成单链的无规则线团，使核酸的某些光学性质和流体力学性质发生改变，有时部分或全部生物活性丧失（图3-28），并不涉及共价键的断裂。多核苷酸骨架上共价键（3", 5"-磷酸二酯键）的断裂称核酸的降解。降解引起核酸分子量降低。 当将DNA的稀盐溶液加热到80~100℃时，双螺旋结构即发生解体，两条链分开，形成无规则线团。一系列物化性质也随之发生改变：粘度降低，浮力密度升高等，同时改变二级结构，有时可以失去部分或全部生物活性。 DNA变性后，由于双螺旋解体，碱基堆积已不存在，藏于螺旋内部的碱基暴露出来，这样就使得变性后的DNA对260nm紫外光的吸光率比变性前明显升高（增加），这种现象称为增色效应（hyperchromic effect）。常用增色效应跟踪DNA的变性过程，了解DNA的变性程度。 可以引起核酸变性的因素很多，如加热、极端的pH、有机溶剂、酰胺、尿素等。由温度升高而引起的变性称热变性。由酸碱度改变引起的变性称酸碱变性。尿素是用聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定DNA序列常用的变性剂。甲醛也常用于琼脂糖凝胶电泳法测定RNA的分子大小。 DNA变性的特点是爆发式的。当病毒或细菌DNA分子的溶液被缓慢加热进行DNA变性时，溶液的紫外吸收值在到达某温度时会突然迅速增加，并在一个很窄的温度范围内达到最高值。其紫外吸收增加40%，此时DNA变性发生并完成。DNA热变性时，其紫外吸收值到达总增加值一半时的温度，称为DNA的变性温度。由于DNA变性过程犹如金属在熔点的熔解，所以DNA的变性温度亦称为该DNA的熔点或熔解温度（melting temperature），用Tm表示。DNA的Tm值一般在70~85℃之间（图3-29），常在0.15mol/L NaCI，0.015mol/L柠檬酸三钠（sodium chloride-sodium citrate, SSC）溶液中进行测定。 DNA的Tm值大小与下列因素有关： 1． DNA的均一性 均一性愈高的DNA样品，熔解过程愈是发生在一个很小的温度范围内。 2． G≡C的含量 G≡C含量越高，Tm值越高，二者成正比关系（图3-30）。这是因为G≡C对比A=T对更为稳定的缘故。所以测定Tm值可推算出G≡C对的含量。其经验公式为： G≡C% = （Tm – 69.3）×2.44 3． 介质中的离子强度 一般说离子强度较低的介质中，DNA的熔解温度较低，熔解温度的范围较宽。而在较高的离子强度的介质中，情况则相反（图3-31）。所以DNA制品应保存在较高浓度的缓冲液或溶液中。常在1mol／L NaCl中保存。RNA分子中有局部的双螺旋区，所以RNA也可发生变性，但Tm值较低，变性曲线也不那么陡。 （二）复性 变性DNA在适当条件下，两条彼此分开的链重新缔合（reassociation）成为双螺旋结构的过程称为复性（renaturation）。DNA复性后，许多物化性质又得到恢复，生物活性也可以得到部分恢复。复性过程基本上符合二级反应动力学，其中第一步是相对缓慢的，因为两条链必须依靠随机碰撞找到一段碱基配对部分，首先形成双螺旋。第二步快得多，尚未配对的其他部分按碱基配对相结合，象拉锁链一样迅速形成双螺旋。 反应的进行与许多因素有关。将热变性的DNA骤然冷却时，DNA不可能复性，例如用同位素标记的双链DNA片段进行分子杂交时，为获得单链的杂交探针，要将装有热变性DNA溶液的试管直接插入冰浴，使溶液在冰浴中骤然冷却至0℃。由于温度降低，单链DNA分子失去碰撞的机会，因而不能复性，保持单链变性的状态，这种处理过程叫―淬火‖ （guench）。热变性DNA在缓慢冷却时，可以复性，这种复性称为退火（annealing）。DNA的片段越大，复性越慢。DNA的浓度越大，复性越快。在一定条件下，复性反应的速度可以用Cot来衡量。Co为变性DNA的原始浓度，以核苷酸的摩尔浓度表示，t为时间，以秒表示。实验证明，两种浓度相同但来源不同的DNA，复性时间的长短与基因组的大小有关（图3-32）。具有很多重复序列的DNA，复性也快。 DNA复性后，其溶液的A260值减小，最多可减小至变性前的A260值，这现象称减色效应（hypochromic effect）。引起减色效应的原因是碱基状态的改变，DNA复性后其碱基又藏于双螺旋内部，碱基对又呈堆积状态，它们之间介电子的相互作用又得以恢复，这样就使碱基吸收紫外光的能力减弱。可用减色效应的大小来跟踪DNA的复性过程，衡量复性的程度。 (三)核酸的杂交(hypidization) 根据变性和复性的原理，将不同来源的DNA变性，若这些异源DNA之间在某些区域有相同的序列，则退火条件下能形成DNA-DNA异源双链，或将变性的单链DNA与RNA经复性处理形成DNA-RNA杂合双链，这种过程称为分子杂交（molecular hypidization）。核酸的杂交在分子生物学和分子遗传学的研究中应用极广，许多重大的分子遗传学问题都是用分子杂交来解决的。 核酸杂交可以在液相或固相上进行。目前实验室中应用较广的是用硝酸纤维素膜作支持物进行的杂交。英国的分子生物学家E．M．Southern所发明的Southern印迹法（southern blotting）就是将凝胶上的DNA片段转移到硝酸纤维素膜上后再进行杂交的。这里以 DNA-DNA杂交为例，较详细地介绍Southern印迹法。将DNA样品经限制性内切酶降解后，用琼脂糖凝胶电泳进行分离。将胶浸泡在碱（NaOH）中使DNA变性，并将变性DNA转移到硝酸纤维素膜上（硝酸纤维素膜只吸附变性DNA!），在80℃烤4~6h，使DNA牢固地吸 附在纤维素膜上。然后与放射性同位素标记的变性后DNA探针进行杂交。杂交须在较高的盐浓度及适当的温度（一般68℃）下进行数小时或十余小时，再通过洗涤，除去未杂交上的标记物。将纤维素膜烘干后进行放射自显影。全部过程见图3-33。 除了DNA外，RNA也可用作探针（probe）。用32P标记核酸时（用作探针），可以在3"，或5"末端标记，也可采用均匀标记。 应用类似的方法也可分析RNA，即将RNA变性后转移到纤维素膜上再进行杂交。此方法称Northern印迹法（Northern blotting）。 不同来源的核酸链的杂交形成了近代分子遗传学许多重要实践技术的基础。在有一段合适的互补DNA单链的情况下（通常对这个DNA链进行适当的标记），通过杂交可以在许多其他DNA顺序存在时检出一个特殊DNA序列或基因。应用核酸杂交技术，可以将含量极少的真核细胞基因组中的单拷贝基因钓出来。 六、核酸的酸解、碱解与酶解 核酸在酸、碱和酶的作用下，发生共价键断裂，多核苷酸链被打断，分子量变小，此过程称为降解。下面简要讨论酸、碱和酶对核酸的降解作用。 （一）酸解 酸对核酸的作用因酸的浓度、温度和作用时间长短而不同。用温和的或稀的酸作短时间处理，DNA和RNA都不发生降解。但延长处理时间或提高温度，或提高酸的强度，则会使核酸中的部分糖苷键发生水解，先是嘌呤碱基被水解下来，生成无嘌呤的核酸，同时少数磷酸二酯键也发生水解，使链断裂。若用中等强度的酸在100℃下处理数小时，或用较浓的酸（如2~6mol/L HCl）处理，则可使嘧啶碱基水解下来，更多的磷酸二酯键断裂，核酸降解程度增加。 （二）碱解 RNA在稀碱条件下很容易水解生成2"-核苷酸和3"-核苷酸。因为RNA中的核糖具有2"-OH，在碱催化下3",5"-磷酸二酯键断裂，先形成中间物2", 3"-环核苷酸，它不稳定而进一步水解，生成2"-核苷酸和3"-核苷酸的混合物。反应过程见图3-34。 RNA碱解所用的KOH（或NaOH）的浓度可因温度和作用时间而不同，如1 mol/L KOH（或NaOH）在80℃下作用1h，或0.3 mol/L KOH（或NaOH）在37℃下作用16h均可以使RNA水解成单核苷酸。在同样的稀碱条件下，DNA是稳定的，不会被水解成单核苷酸，因为DNA中的脱氧核糖C2"位没有-OH，不能形成2", 3"-环核苷酸。DNA在碱的作用下，只发生变性，不发生磷酸二酯键的水解。 根据碱对DNA和RNA的不同作用，可用碱解法从RNA制取2"-和3"-核苷酸；用碱处理DNA和RNA混合液，使RNA水解成单核苷酸保留在溶液中，再把DNA从溶液中沉淀下来，分别进行定量测定。 图3-34 RNA碱解反应过程 （三）核酸的酶解 1. 核酸的酶法水解与核酸酶的分类 能水解核酸的酶称为核酸酶（nucleases）。实际上所有的细胞中都含有各种核酸酶。它们参加正常的核酸代谢过程。有些器官如胰脏，可以提供含有大量核酸酶的消化液以水解食物中的核酸。核酸酶都是―磷酸二酯酶‖（phospho diesterases），它们催化在水参与下磷酸二酯键的断裂。由于核酸链是由两个酯键将核苷酸连接而成的，核酸酶切割磷酸二酯键的位置不同会产生不同的末端产物。 核酸酶分为内切核酸酶（endonuclease）和外切核酸酶（exonuclases）。外切核酸酶只从一条核酸链的一端逐个切断磷酸二酯键释放单核苷酸。而内切核酸酶在核酸链的内部切割核酸链，产生核酸片段（参见第九章）。 与大部分的酶一样，核酸酶对它们作用底物的性质表现出选择性或特异性。有些核酸酶只作用于DNA，称为脱氧核糖核酸酶（DNases），而有些核酸酶只作用于RNA，称为核糖核酸酶（RNases）。既能水解DNA亦能水解RNA的称非特异性核酸酶，例如两种非特异性核酸酶蛇毒磷酸二酯酶和脾磷酸二酯酶，它们在特异性上是互补的，蛇毒磷酸二酯酶以游离的3"-OH末端开始切割产生5"-单磷酸核苷，而脾磷酸二酯酶从游离的5" -OH末端开始切割产生3"-单磷酸核苷。 核酸酶还表现出对二级结构的特异性，有些核酸酶只水解单链核酸；有些则只水解双链核酸。有些核酸酶选择核酸链含某一碱基的核苷酸处切割核酸链（碱基特异性）；有些则要求切割点具有4~8个核苷酸残基的特殊核苷酸顺序，对分子生物学家来说，核酸酶是在实验室中切割和操作核酸的工具。 2. 限制性内切酶 限制性内切酶（restriction endonuclease）也称限制性酶（restriction enzyme），是由W. Arber，H. Smith和D. Nathans等人（1979年）从细菌中分离的一类酶。限制酶具有极高的专一性，识别双链DNA上特定的位点，将两条链都切断，形成粘末端或平末端。限制酶可以用来解剖纤细的DNA分子，在分析染色体结构、制作DNA的限制酶谱、测定较长的DNA序列、基因的分离、基因的体外重组等研究中是不可缺少的工具。对于研究DNA的分子生物学家来说，这是一把天赐神刀——分子生物刀。 限制性酶的生物学功能在于防御或―限制‖入侵细胞的外DNA（如噬菌体DNA）。原核生物利用他们独特的限制性内切酶把外来DNA切成无感染性的片段。但不能降解自身细胞中的染色体DNA，因为细胞内还有―共座‖的DNA甲基化酶修饰相应序列使之受到保护。 限制酶可被分成三种类型。I型和Ⅲ型限制酶水解DNA需要消耗ATP，全酶中的部分亚基有通过在特殊碱基上补加甲基基团对DNA进行化学修饰的活性。I型限制性内切酶在随机位点切割DNA；Ⅲ型限制酶识别双链DNA的特异核苷酸序列，并在这个位点内或附近切开DNA双链。 Ⅱ型限制性内切酶已被广泛应用于DNA分子的克隆和序列分析，这是因为它们水解DNA不需要ATP，并且也不以甲基化或其他方式修饰DNA。最重要的是它们在它们所识别的特殊核苷酸顺序内或附近切割DNA链。这些特殊序列常常含4个或6个核苷酸残基，通常具回文结构（palindromic structure），切割后形成粘末端（或平末端）。例如，大肠杆菌的一限制酶称EcoR I，它识别下列六核苷酸顺序： 5"……GAATTC……3" 3"……CTTAAC……5" 这种回文结构的两条链以5"→3"方向阅读序列都是一样的结构，当EcoR I遇到DNA的这种序列时，它会对这种DNA链进行交错切割，产生突出的5"末端。 5"……G AATTC……3" 3"……CTTAA C……5" 有些限制酶，如Pst I，它识别序列5"-CTGCAG-3"，并在A与G之间切割DNA双链产生3"突出粘性末端。还有些限制酶，如Bal I，DNA链产生具有平末端（blunt end）的DNA片段。 限制酶的命名较为特殊。以EcoR I为例加以说明。第一个大写字母E为大肠杆菌E. coil的属名的第一个字母，第二、三两个小写字母co为它的种名的头两个字母。第四个字母用大写R，表示所用大肠杆菌的菌株。最后一个罗马字表示从该细菌中分离出来的这一类酶的编号。目前提纯的限制酶已很多，常用的约有100多种，并且已转化成为商品。大大节约了研究人员的时间。 3. DNA的限制酶图谱 在研究某一种DNA时，弄清楚这种DNA分子有哪些限制酶切点是很重要的，这就是制作DNA的限制酶图谱（restriction map）。建立限制酶图谱是进一步深入分析此DNA的基础。 图谱的制作十分简单。将纯化的DNA（往往用分子克隆法，从单一克隆中扩增而制备）用不同的限制酶切割，进行凝胶电泳分析。对环形DNA要先找出一个对该DNA只有一个切点的酶，以此点作为参考点。根据测量凝胶电泳图上各酶切片段的长度，就可以决定各切点的位置。有时，需要用两种酶相继降解，有时需要用一种酶部分降解才能决定其酶切位点的位置。 如果将DNA的一端（3"，或5"端都可）先进行放射性同位素标记，再用不同酶分头切割（完全降解，部分降解或双酶相继降解），各切点位置的决定就要容易得多了。 图3-35为一种小分子环形DNA分子质粒pBR322DNA的限制酶图谱（参阅第十章）。此图表明限制图实际上是各种限制性内切酶在某一DNA分子上或DNA片段上切点的排列。由于各种酶切位点之间的距离是以碱基对表示的[对大的染色体DNA则以千碱基对 （kilobase pair, kb）或百万碱基对（Mb）表示，也可计算出两切点间的绝对距离，因此，限制图也称物理图谱。

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