- 再也不做稀饭了
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1.研究烫伤休克大鼠肠内补液时给予卡巴胆碱对肠血管通透性及组织水肿的影响。方法健康雄性Wistar大鼠48只,随机分为单纯烫伤组(S组)、葡萄糖?电解质组(GES组)、卡巴胆碱治疗组(CAR组)和葡萄糖-电解质+卡巴胆碱治疗组(GES/CAR组),每组12只。制作35%休表面积(TBSA)Ⅲ°烫伤模型,肠内输入GES和(或)CAR(60μg/kg)进行复苏。应用改良伊文思蓝(EB)渗出法测定烫伤后4小时肠内补液时肠血管通透性及用干湿重法测定肠组织含水率的变化。结果 GES组与S组比较,肠组织EB含量显著增加(P<0.05),肠组织含水率增加,但无统计学意义(P>0.05)。给予卡巴胆碱治疗后,CAR组与GES/CAR组肠组织EB含量分别比S组与GES组显著下降(P<0.05)。CAR组比S组肠组织含水率减少(P<0.01),GES/CAR组肠组织含水率比GES组显著减少(P<0.01)。结论 卡巴胆碱能降低烫伤休克口服补液时肠血管通透性,减轻肠黏膜组织水肿,对烫伤休克肠内补液时小肠缺血再灌注损伤具有保护作用。
2.研究拟胆碱药卡巴胆碱(CAR)对40%血容量丢失大鼠早期口服葡萄糖?电解质液(GES)时胃排空和胃血流量的影响。方法 48只雄性SD大鼠随机分为:GES组(手术后口服GES,n=16)、失血 GES组(H GES,n=16)和失血 GES 卡巴胆碱组(H GES/CAR,n=16)。用氯胺酮-速眠新Ⅱ肌注复合麻醉后,行右侧颈动脉插管,按全身血容量的40%分2次间隔15分钟放血制作失血性休克模型。于失血后0.5小时及1小时分两次给予2倍失血量的GES灌胃。卡巴胆碱(60μg/kg))溶于GES,于首次灌胃时给予。用激光多谱勒血流仪测定失血后2小时和4小时胃组织血流量,采用酚红法测定胃排空率。结果 失血后2小时和4小时,H GES组胃排空率分别比GES组低51.4%和30.2%(P<0.01和P<0.05);胃血流量低50.0%和35.2%(P<0.01)。H GES/CAR组胃排空率和胃血流量显著高于H GES组,伤后4小时已恢复至GES组水平(P>0.05)。结论 卡巴胆碱能显著增加大鼠失血性休克早期胃排空率和胃血流量,提高口服液体复苏的效果。
3.探讨不同剂量卡巴胆碱对烫伤大鼠胃血流量和胃排空功能的影响.方法:40只Wistar雄性大鼠,随机分为假烫组(n=5)、单烫组(n=5)和口服卡巴胆碱组(n=30),后者又根据卡巴胆碱剂量不同分为20、40、60、80、100、120 μg/kg组(每组5只).假烫组大鼠均给予0.1%酚红溶液1.5 ml灌胃.单烫组和口服卡巴胆碱组大鼠均经30%TBSAⅢ度烫伤后立即给予0.1%酚红溶液1.5 ml灌胃,口服卡巴胆碱组于伤后0.5 h给予相应剂量卡巴胆碱+1 ml生理盐水灌胃.大鼠均于伤后2 h处死,观察不同剂量卡巴胆碱对大鼠胃血流量及胃排空率的影响.结果:烫伤后大鼠胃排空率为(29.50±13.42)%,明显低于假烫组(92.19±5.24)%,P<0.01.伤后2 h胃血流量从伤前的(476.00±71.24)U降低到(103.60±51.28)U,P<0.01.烫伤后给予不同剂量卡巴胆碱均能增加胃排空率和胃血流量,但以60 μg/kg最为显著(P<0.01).结论:卡巴胆碱对烧伤休克大鼠胃血流量和胃排空有显著促进作用,最佳剂量为60μg/kg.
4.探讨拟胆碱药卡巴胆碱对肠部分缺血再灌注损伤家兔血浆促炎细胞因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素6和抗炎细胞因子白细胞介素10含量的影响. 方法:实验于2005-01/05在解放军第三○四医院完成.大耳白兔45只,随机分为卡巴胆碱治疗组20只、肠部分缺血再灌注组20只、假手术对照组5只.卡巴胆碱治疗组在部分阻断肠系膜上动脉2 h后肠内注射卡巴胆碱30 mg/kg.肠部分缺血再灌注组用自制血流阻断器阻断肠系膜上动脉血流50%,4 h后恢复灌流.假手术对照组不阻断肠系膜上动脉.各组分别于阻断前及阻断后2,4,8 h,1,2,3 d测定血浆促炎细胞因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素6及抗炎细胞因子白细胞介素10的含量.结果:进入结果分析实验兔40只,卡巴胆碱治疗组18只、肠部分缺血再灌注组17只、假手术对照组5只.①家兔肠部分缺血再灌注损伤后,血浆肿瘤坏死因子α、白细胞介素6及白细胞介素10含量明显升高.②肠内注射卡巴胆碱后,血浆肿瘤坏死因子α含量在术后1 d显著降低,白细胞介素6含量在阻断4及8 h显著降低,与肠部分缺血再灌注组相比差异显著.③肠缺血再灌注组与卡巴胆碱治疗组血浆白细胞介素10含量相比无显著差异.结论:卡巴胆碱能明显抑制促炎细胞因子肿瘤坏死因子α和白细胞介素6的产生和释放,而对抗炎细胞因子白细胞介素10的影响甚微.表明拟胆碱药-卡巴胆碱具有明显的抗炎作用.
5.研究卡巴胆碱(胆碱能受体激动剂)对脓毒症模型的抗炎和器官保护作用.方法 ♂大鼠128只,用盲肠结扎穿孔术,制备脓毒症模型.随机分为卡巴胆碱组和脓毒症组,分别静注卡巴胆碱10 μg·kg~(-1)或等量生理盐水.观察12,24 h病死率、肝、肾、心功能指标、促炎症因子水平和组织含水率.结果 卡巴胆碱组12,24 h病死率分别为25%,50%,显著低于脓毒症组的37.5%,75%.肝、肾、心组织促炎因子、一氧化氮含量、髓过氧化物活性以及脏器功能指标和组织含水量,卡巴胆碱组均显著低于脓毒症组.结论 卡巴胆碱能改善脓毒症大鼠脏器功能,降低早期病死率,其机制可能与其抑制促炎症因子水平、减轻脏器组织炎症和水肿有关.
6. 目的:6.1观察卡巴胆碱对脂多糖刺激大鼠腹腔巨噬细胞释放炎症细胞因子的影响;6.2研究卡巴胆碱抑制脂多糖刺激大鼠腹腔巨噬细胞释放促炎细胞因子的受体途径,为卡巴胆碱用于脓毒症和多器官功能障碍等过度炎症性疾病的防治提供实验依据。方法:采用脂多糖(LPS,100ng/mL)刺激大鼠腹腔巨噬细胞模型,用酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫荧光法进行研究。研究分二部分进行:1.卡巴胆碱对LPS刺激巨噬细胞释放炎症细胞因子的影响以及和其他胆碱能受体激动剂作用的比较取雄性Wistar大鼠腹腔巨噬细胞,调整浓度为10~6细胞/mL,加入24孔细胞培养板中。分别加入卡巴胆碱(K1 2mmol/L、K2 0.2mmol/L、K3 0.02mmol/L、K4 2μmol/L、K5 0.2μmol/L、K6 0.02μmol/L 6种浓度)、N样胆碱能受体激动剂烟碱(nicotine)或M样胆碱能受体激动剂毒蕈碱(muscarine),室温下处理15min;然后各孔加入LPS,置于37℃、5%CO_2细胞培养箱中孵育4h。检测细胞培养上清液中促炎细胞因子TNF-α、IL-6和抑炎细胞因子IL-10的浓度。实验分为5组:①空白对照组C;②LPS对照组,L;③卡巴胆碱组,K;④烟碱组,N;⑤毒蕈碱组,M。其中K组用6种不同浓度卡巴胆碱(K1-K6)观察其作用的差异并确定后续实验中胆碱能受体激动剂的浓度。2.卡巴胆碱抑制LPS刺激巨噬细胞释放促炎细胞因子的受体途径取上述浓度巨噬细胞置于24孔细胞培养板中,加入M样胆碱能受体拮抗剂阿托品或N样胆碱能受体α7亚基(α7nAChR)特异性拮抗剂α-银环蛇毒素(α-Bgt),室温下孵育15min;后续实验步骤同第一部分。检测细胞培养上清液中TNF-α和IL-6的浓度。实验分为6组:①卡巴胆碱组,K;②烟碱组,N;③阿托品+卡巴胆碱组,AK:④阿托品+烟碱组,AN;⑤银环蛇毒素+卡巴胆碱组,BK;⑥银环蛇毒素+烟碱组,BN。免疫荧光法实验取上述浓度细胞,在6孔培养板中制作细胞爬片。先用卡巴胆碱或烟碱(5mmol/L)处理15min,再加入异硫氰酸荧光素(FITc)标记的α-Bgt(30μg/mL),4℃孵育15min。冲洗、封片后,在荧光显微镜及激光扫描共聚焦显微镜下观察荧光强度并摄片。实验分为4组:①阴性对照组;②阳性对照组:单纯用FITC-α-Bgt标记细胞;③烟碱对照组:烟碱+FITC-α-Bgt;④卡巴胆碱组:卡巴胆碱+FITC-α-Bgt。结果:1.正常大鼠腹腔巨噬细胞在体外RPMI1640培养基中表达少量的各种细胞因子包括TNF-α、IL-6和IL-10;LPS刺激后,三种细胞因子水平较空白对照组均显著增加。2.用K1-K6 6种浓度的卡巴胆碱处理巨噬细胞后,各浓度组TNF-α水平均低于L组。其中,K1、K2、K3组与L组有显著差异。选择K3为后续实验的胆碱能受体激动剂浓度。3.与L组相比,K组TNF-α和IL-6水平显著降低,IL-10水平无显著变化。4.K组、N组和M组TNF-α和IL-6水平均显著低于L组;与M组相比,K组和N组降低地更明显;K组和N组之间无显著差异。与L组相比,K组和N组IL-10水平无显著变化。5.与K组相比,AK组TNF-α和IL-6水平无显著变化;与N组相比,AN组TNF-α和IL-6水平无显著变化;与K组相比,BK组TNF-α和IL-6水平显著升高;同样,与N组相比,BN组TNF-α和IL-6水平显著升高。6.免疫荧光法实验结果。FITC-α-Bgt标记后,细胞膜位置可见明显的荧光;而用高浓度的烟碱和卡巴胆碱处理后再用FITC-α-Bgt进行标记,细胞表面的荧光强度明显降低。结论:1、卡巴胆碱能显著抑制LPS刺激大鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6,并呈剂量依赖性,但对IL-10水平无显著影响;2、卡巴胆碱的抗炎作用与烟碱类似,两者均显著强于毒蕈碱;3、α-Bgt能显著降低卡巴胆碱和烟碱与巨噬细胞表面受体的结合从而抑制其抗炎作用,而阿托品的作用不明显,表明卡巴胆碱是通过α7nAChR发挥抗炎作用。